Evidence of Amniotic Epithelial Cell Differentiation toward Hepatic Sinusoidal Endothelial Cells

doi:10.1177/0963689717727541

.2018年1月；27（1）：23-30。

doi:10.1177/0963689717727541。

羊膜上皮细胞向肝窦内皮细胞分化的证据

莫妮卡·塞拉^1 2, 米歇拉·马龙柳^1 2, 安东尼拉·康蒂尼¹, 三木俊雄^三, 埃里卡·卡多尼¹, 埃齐奥·拉科尼¹, 法比奥·马龙吉¹

附属公司

¹1意大利卡利亚里大学生物医学系实验医学部。
²莫妮卡·塞拉（Monica Serra）和米歇拉·马龙吉（Michela Marongiu）也对这项工作做出了同样的贡献。
^三2美国加利福尼亚州洛杉矶市南加州大学凯克医学院外科。

PMID： 29562778
预防性维修识别码：项目经理C6434484
内政部： 10.1177/0963689717727541

羊膜上皮细胞向肝窦内皮细胞分化的证据

莫妮卡·塞拉等。细胞移植. 2018年1月.

.2018年1月；27(1):23-30.

doi:10.1177/0963689717727541。

作者

莫妮卡·塞拉^1 2, 米歇拉·马龙柳^1 2, 安东尼拉·康蒂尼¹, 三木俊雄^三, 埃里卡·卡多尼¹, 埃齐奥·拉科尼¹, 法比奥·马龙吉¹

附属公司

¹1意大利卡利亚里大学生物医学系实验医学部。
²莫妮卡·塞拉（Monica Serra）和米歇拉·马龙吉（Michela Marongiu）也对这项工作做出了同样的贡献。
^三2美国加利福尼亚州洛杉矶市南加州大学凯克医学院外科。

PMID： 29562778
预防性维修识别码：项目经理C6434484
内政部： 10.1177/0963689717727541

摘要

羊膜上皮细胞（AECs）是以肝脏为基础的再生医学的一个有用且无争议的来源，因为它们可以在移植到肝脏后分化为肝细胞。然而，AEC能够分化为其他肝细胞类型的可能性，如肝窦内皮细胞（HSEC），从未被评估过。为了验证这一假设，对大鼠和人源性AECs（分别为rAECs和hAECs）进行体外内皮细胞管形成试验。此外，为了评估体内分化，我们使用了逆转录酶（RS）肝再生模型。吡咯里嗪生物碱（包括RS）以肝细胞和内皮细胞为靶点，诱导细胞扩大和抑制细胞周期进展。rAECs和hAECs在促血管生成条件下培养时能够形成毛细血管样结构。在体内实验中，从二肽基肽酶IV型（DPP-IV，CD26）供体中获得rAECs，并将其移植到受体CD26阴性动物的肝脏中，经RS预处理。通过形态学分析和CD26表达模式评估，将rAEC衍生细胞植入肝细胞和类似HSEC之间。供体衍生CD26⁺细胞共表达HSEC标记物RECA-1和SE-1，但缺乏典型肝细胞标记物（即细胞色素P450、肝细胞核因子4α）的表达。因此，这些结果首次证明AECs可以在体外对促血管生成信号作出反应，并在体内分化为HSEC。此外，他们支持AECs具有很强的可塑性的结论，并在肝脏和其他器官的再生医学领域代表了一种有希望的工具。

关键词：羊膜上皮细胞；细胞移植；肝窦内皮细胞；干细胞分化。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突声明：作者声明，与本文的研究、作者身份和/或出版没有潜在的利益冲突。

数字

**图1。**
（A–C）大鼠源性羊膜上皮细胞（rAECs）的分离。为了避免内皮细胞受到污染，有必要将无血管羊膜（红色箭头）与血管化的卵黄囊（黑色箭头）小心分离。（D–I）AEC的标准文化和*在体外*试管形成分析（100倍放大）。（D） rAEC塑料标准培养条件。24小时试管形成分析后的（E和F）rAEC。（G） hAEC塑料标准培养条件。24小时试管形成分析后的（H和I）hAECs。

**图2。**
（A）人源性羊膜上皮细胞（hAEC）衍生管状结构超微结构分析的交叉点。（B） hAEC衍生腹板的电子显微镜图像，其内腔未发育。

**图3。**
CD31表达的免疫荧光分析。（A–C）人源性羊膜上皮细胞（hAEC）衍生的毛细血管结构。（D–F）鼠源性羊膜上皮细胞（rAEC）衍生的毛细血管结构。（G-I）人脐静脉内皮细胞衍生的毛细血管结构（人阳性抗体对照）。（J–L）大鼠小静脉（大鼠抗体阳性对照）。（M和N）hAECs在塑料上培养，隔离后24小时。（O和P）rAECs在塑料上培养，隔离24小时后。（Q和R）人阴性抗体对照（无一级抗体）。（S和T）大鼠抗体阴性对照（无一级抗体）。100倍放大。插图显示放大200倍。

**图4。**
（A和B）DPP-IV（CD26）阳性供体或衍生簇进入受体动物肝脏的组织化学检测。（A）分化为肝细胞后植入的rAECs簇：rAEC衍生细胞中CD26的表达模式极化并定位于两个肝细胞之间的胆管（见插图）。（B） rAEC衍生的肝窦内皮细胞形态簇：将细胞植入常驻肝细胞之间，CD26表达均匀分布在细胞质中（见插图）。（C–H）对连续肝组织切片进行CD26和内皮标记物RECA-1和SE-1的双重免疫荧光染色。在所有观察到的簇中，CD26阳性细胞也表达RECA-1和SE-1。（C-E）RECA-1+CD26染色；（F–H）SE-1+CD26染色。200倍放大。插图显示放大600倍。

**图5。**
CD26和成熟肝细胞标记物的双重免疫荧光染色。在所有观察到的簇中，未发现CD26与肝细胞标记物共定位。（A）细胞色素P450（CYP）3A1+CD26染色，（B）CYP 2E1+CD26染色，和（C）肝细胞核因子4α（HNF4α）+CD26染色。所有图形的放大倍数为200倍，但右栏除外，其中显示600倍的字段。（D）阴性抗鼠对照（无一抗）；（E）阴性抗鼠对照（无一级抗体）。

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