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.2018年1月20日；8（2）：e2690。
doi:10.21769/BioProtoc.2690。

用FM染料荧光法测量分离培养海马神经元的突触活性

罗曼·拉扎伦科 1, 克莱尔·德尔博夫 1, 张琪（音译） 1
附属公司

用FM染料荧光法测量分离培养海马神经元的突触活性

罗曼·拉扎伦科等。 生物协议. .

摘要

突触小泡的释放和再循环对神经传递和突触可塑性至关重要。为了获得对这些过程的机械理解，直接测量囊泡的释放和回收是必不可少的。苯乙烯基染料如FM1-43和FM4-64已被广泛用于此目的，并且它们的装载和卸载是培养神经元中突触囊泡释放和回收的可靠测量。本方案详细描述了使用苯乙烯基染料标记和测量培养的大鼠海马神经元中突触囊泡的摄取和释放的过程。我们还简要介绍了海马培养。最后，我们简要讨论了FM染料、pH敏感荧光蛋白和量子点在测量突触囊泡行为方面的共性和差异。

关键词：分离海马培养；FM1-43；荧光实时成像；突触传递。

PubMed免责声明

利益冲突声明

我们没有利益冲突或相互竞争的利益需要申报。

数字

图1。
图1.用于海马分离的不同直径的火焰抛光巴斯德吸管尖端示例
图2。
图2：显示DIC中最佳细胞密度并覆盖FM1-43荧光的放大图像示例
图3。
图3：可用于控制电场刺激时间和在溶液灌注通道之间切换的Clampex协议示例。
采样率设置为1毫秒。
图4。
图4.Grass仪器SD9刺激隔离器设置。
频率–0，延迟–0，持续时间–10 x 0.1，电压–7 x 10，输出–单声道，极性–正常。
图5。
图5.控制器/设备互连图
图6。
图6.盖玻片在显微镜上的方位图
图7。
图7 FM1-43标记ROI的基于阈值的选择示例。
右侧的图像描述了基于阈值和粒径确定的ROI轮廓。
图8。
图8.Excel分析的屏幕截图。
A.将背景平均列添加到数据集中，然后制作电子表格的副本（续（2））。B.在con（2）中，减去电子表格背景，将帧编号转换为时间，F最大值和F最小值计算数值，添加图形面板以直观控制FM1-43荧光变化，然后再次复制电子表格（con（3））。C.在con（3）电子表格中，con（2）的数据被规范化，并表示为（F-F最小值)/（F）最大值-F类最小值)和应用程序条被添加到图形中。
图9。
图9.标准化FM1-43荧光对2分钟10 Hz电场刺激（绿色条）或1分钟高钾（90 K）化学刺激（红色）的响应示例
图10。
图10：基线、电场刺激结束和90 K第二回合结束时的示例图像+
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