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.2018年3月15日；11(1):17.
doi:10.1186/s13041-018-0361-z。

用于厚样品三维重建的超分辨荧光显微镜

桑郡公园 1 2 三, Wooyoung Kang（吴永康） 1 2 三, Yeong-Dae-Kwon先生 三 4, Jaehoon Shim公司 5, 金思勇（Siyong Kim） 5, Bong-Kiun Kaang先生 5, Sungchul Hohng公司 6 7 8
附属公司

用于厚样品三维重建的超分辨荧光显微镜

桑郡公园等。 臼齿脑. .

摘要

由于高水平的背景噪声和荧光探针的快速光漂白，使用超分辨率荧光显微镜对厚样品进行三维重建仍然具有挑战性。我们开发了超分辨率荧光显微镜，可以重建厚样品的三维结构，具有较高的定位精度，并且没有光漂白问题。通过使用线扫描共焦显微镜对样品进行光学切片，降低了背景噪声，并且通过使用DNA-PAINT（纳米地形成像的点累积）克服了光漂白问题。作为演示，我们拍摄了整个细胞微管的3D超分辨率图像，以及微管和线粒体的双色3D图像。我们还提供了小鼠大脑切片在0μm到100μm的不同z位置的化学突触的超分辨率图像。

关键词：DNA涂料；线扫描共焦显微镜；单分子定位显微镜；超分辨显微镜；三维重建。

PubMed免责声明

利益冲突声明

道德审批

所有实验方案均由首尔国立大学机构动物护理和使用委员会（委员会主席：Jaehak Park）批准，并符合首尔国立高校机构生物安全委员会（委员会主任：Byunghun Lee）的指导方针。

出版同意书

不适用。

竞争性利益

作者声明，他们没有相互竞争的利益。

出版商备注

Springer Nature在公布的地图和机构关联中的管辖权主张方面保持中立。

数字

图1
图1
显微镜示意图。五十： 透镜，CL：柱面透镜，OL：物镜，M：镜子，DM：分色镜，GM：振镜，BPF：带通滤波器
图2
图2
超分辨率，三维重建整个COS-7细胞的微管。一全细胞超分辨率图像的透视图。b条的俯视图(一).c-e公司中黑灰盒的最大强度投影图像(b条)在指定的z区域。（f）放大中红色框的图像(d日).g-i公司中三个不同位置的横截面图像(（f）). 在以下图像中g-i公司，z方向与垂直方向对齐
图3
图3
微管和线粒体的多色成像。一微管（绿色）和线粒体（红色）的两色超分辨率图像。图像是从z获取的 = 0–500纳米。b条放大中黄色框的图像(一).c-d公司白线的横截面图像(b条).电子-小时不同z区域的最大强度投影图像(b条).我中蓝色框线粒体的放大图像(一).j个z范围内的光学z轴截面图像 = 0纳米至150纳米英寸(我).k个的白线的横截面图像(我). 在以下图像中(c（c）)(d日)、和(k个)，z方向与垂直方向对齐
图4
图4
厚脑组织的超分辨率成像。一100μm厚小鼠脑组织突触前（绿色）和突触后（红色）的最大强度投影超分辨率图像。图像是从z获取的 = 18.0 ~ 18.6微米。b条中黄色框的透视图(一).c（c）中黄色框的侧视图(一).d-i型显示不同z位置的超分辨率突触图像
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