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.2018年5月7日；217(5):1613-1622.
doi:10.1083/jcb.201801044。 Epub 2018年3月2日。

基底细胞有丝分裂在果蝇属但受Pink1或parkin缺失的影响最小

朱丽叶·J·李 1, 阿尔瓦罗·桑切斯·马丁内斯 1, 艾托·马丁内斯·萨拉特 # 2 三, 克里斯蒂安·贝尼卡 1, 乌戈市长 2, 迈克尔·克拉格 4, 亚历山大·惠特沃思 5
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基底细胞有丝分裂在果蝇属但受Pink1或parkin缺失影响最小

朱丽叶·J·李等。 J细胞生物学. .

摘要

帕金森病因子PINK1和parkin与体外应激诱导的线粒体自噬密切相关，但对它们对体内基础线粒体自噬的影响知之甚少。我们产生了转基因黑腹果蝇表达荧光丝裂原报告物评估粉红色/派金生理条件下基础有丝分裂的突变。我们发现，在许多组织中，包括与帕金森病相关的多巴胺能神经元，有丝分裂很容易被检测到，并且数量丰富。然而，我们没有在飞行肌肉中检测到有丝分裂体。令人惊讶的是粉红色1或停车场我们没有观察到对基础有丝分裂有任何实质性影响。由于这些苍蝇表现出运动缺陷和多巴胺能神经元丢失，我们的研究结果对PINK1/parkin通路相关致病机制的当前假设提出了质疑。我们的发现提供了证据，Pink1和parkin对果蝇属他们还强调，支持基础有丝分裂的机制在很大程度上仍不清楚。

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数字

图1。
图1。
验证mito-QC和mt-Keima有丝分裂报告。（A–C）幼虫表皮细胞（A和C）和成体飞行肌（B）的免疫组织化学和共焦成像分析。（A和B）天然GFP荧光（绿色）和（C）458-nm-刺激荧光（中性pH）通过抗ATP5A（品红）免疫染色与线粒体蛋白分布进行比较。（D和E）幼虫表皮细胞的共聚焦实时成像分析，用于mito-QC（D）和mt-Keima（E）中性和酸性pH谱，用于LysoTracker标记溶酶体。中性pH值和酸性pH值对应的荧光分别显示为绿色和红色。LysoTracker显示为白色。（F）G和H所示的丝裂原-QC幼虫表皮细胞中溶酶体的定量。图表显示的平均值±SD为n个=6只用于（WT）控制的动物，n个=2只动物服用去甲肾上腺素和附件5-RNAi表达。分析的细胞数量：表皮，WT=29细胞，去铁酮和附件5-RNAi=14个细胞。通过单因素方差分析和Sidak的事后检验确定统计显著性；***，P<0.001；****，P<0.0001。（G和H）昆虫幼虫表皮细胞表达丝裂原-QC和mt-Keima后的共聚焦成像分析附件5-RNAi转基因抑制自噬（G）或暴露于铁螯合物去铁酮（65µM）诱导有丝分裂（H）。棒材：（A，顶部；以及B、D、E、G和H）10µm；（A，底部；和C）4µm。基因型分析如下da-GAL4/UAS mito QC公司（A、D和H），Mef2-GAL4/UAS-mito-QC（B） ，GAL4管,UAS-mt-Keima公司（C、E和H），以及da-GAL4、UAS-mito-QC/UAS-Atg5型-RNAi和GAL4管,UAS-mt-Keima公司/无人机-附件5-RNAi（G）。
图2。
图2。
幼虫组织中丝裂原-QC和mt-Keima有丝分裂报告子的比较。（A–D）对幼虫表皮细胞（A和B）和中枢神经系统腹神经节（C和D）进行共焦显微镜分析，如图所示，观察丝裂原-QC（固定）和mt-Keima（活）。中性pH值和酸性pH值对应的荧光分别显示为绿色和红色。基因型分析如下da-GAL4/UAS-mito-QC（A和C）和GAL4管,UAS-mt-Keima公司（B和D）。棒材，10µm。
图3。
图3。
成人组织线粒体QC分析。如图所示，对WT成人大脑（2天龄）、2天龄和30天龄DA神经元、飞行肌（2天胎龄）和成年前（蛹）飞行肌的线粒体QC报告子进行共焦显微镜分析。线粒体明显为GFP-阴性/mCherry-阳性（仅红色）斑点。有丝分裂体的定量如图4和图5所示。基因型分析如下UAS-mito-QC/+；nSyb-GAL4型/+（成人大脑），UAS-mito-QC/+；TH-GAL4公司/+（DA神经元），以及Mef2-GAL4/UAS-mito-QC（成人和蛹肌）。棒材，10µm。
图4。
图4。
基底细胞有丝分裂在粉红色1突变体。共聚焦显微镜分析粉红色1B9如图所示，突变幼虫表皮和中枢神经系统、成年大脑（2日龄）、2日龄和30日龄DA神经元和成年飞行肌（2日日龄）。线粒体明显为GFP-阴性/mCherry-阳性（仅红色）斑点。棒材，10µm。图表显示了溶酶体的定量，并显示了平均值±SDn个=6只动物。分析的细胞数：表皮，WT=29个细胞，粉红色1B9公司=29个单元格；幼虫CNS，WT=28个细胞，粉红色1B9公司=26个单元格；成人大脑，WT=74个细胞，粉红色1B9公司=66个单元；DA神经元2d，WT=100个细胞，粉红色1B9公司=54个细胞和30天，WT=78个细胞，粉红色1B9公司=82个单元格。WT对照样品的定量如图1和图5所示。由韦尔奇确定的统计显著性t吨测试；ns，无显著性。基因型分析如下粉红色B9/是；da-GAL4/UAS-mito-QC（表皮和幼虫中枢神经系统），粉红色B9公司/是；UAS-mito-QC/+；nSyb-GAL4型/+（成人大脑），粉红色B9公司/是；UAS-mito-QC/+；TH-GAL4公司/+（DA神经元），以及粉红色B9/是；Mef2-GAL4/UAS-mito-QC（成人肌肉）。
图5。
图5。
基底细胞有丝分裂在停车场突变体。共聚焦显微镜分析公园25如图所示，2日龄和30日龄幼虫表皮和中枢神经系统、DA神经元和成年飞行肌（2日龄）。线粒体明显表现为GFP-阴性/mCherry-阳性（仅红色）斑点。棒材，10µm。图表显示了溶酶体的定量，并显示了平均值±SDn个=6只动物。WT对照样品的定量如图1和图4所示。分析的细胞数：表皮，WT=29个细胞，公园25=30个细胞；幼虫CNS，WT=28个细胞，公园25=31个单元格；DA神经元2d，WT=100个细胞，公园25=69个细胞和30天，WT=78个细胞，公园25=83个单元格。Welch确定的统计显著性t吨测试；ns=无显著性。基因型分析如下公园25,da-GAL4/公园25，UAS-mito-QC（表皮和幼虫CNS），UAS-mito-QC；公园25,TH-GAL4/风场25（DA神经元），以及公园25,Mef2-GAL4/公园25，UAS-mito-QC（成人肌肉）。
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