跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

该站点是安全的。
这个https：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2018年3月2日10:426-437。
doi:10.1016/j.omtn.2017.12.022。 Epub 2018年1月4日。

MicroRNA-140抑制大肠癌上皮-间充质转化和转移

李佳芝 1, 邹坤 2, 余丽慧 1, 赵文岳 1, 英路 三, 毛骏（Jun Mao） 4, 王波 1, 卢旺（Lu Wang） 1, 范淑君 1, 薄松 5, 李连红 6
附属公司

MicroRNA-140抑制大肠癌上皮-间充质转化和转移

李佳芝等。 摩尔热核酸. .

缩回

摘要

MicroRNA-140是一种软骨特异性MicroRNA，最近与癌症进展有关。然而，miR-140在结直肠癌（CRC）侵袭和转移中的综合作用尚不完全清楚。在本研究中，我们证实miR-140在CRC细胞系的翻译水平下调SMAD家族成员3（Smad3），Smad3是TGF-β信号通路的关键下游效应器。miR-140的异位表达至少部分通过靶向Smad3抑制上皮-间充质转化（EMT）过程，并诱导体外抑制CRC细胞的迁移和侵袭能力。miR-140还可能通过下调Samd3来抑制CRC细胞增殖。此外，miR-140的过度表达抑制了体内CRC的肿瘤形成和转移，沉默的Smad3也具有类似的作用。此外，miR-140在临床原发性CRC标本中表达降低，在转移性标本中表现为逐渐减少，而Smad3在CRC标本上过度表达。综上所述，我们的研究结果表明miR-140可能通过靶向Smad3抑制EMT过程而成为CRC进展和转移的关键抑制因子。miR-140可能是CRC治疗的新候选药物。

关键词：MicroRNA-140-5p；Smad3；TGF-β信号转导；结直肠癌；上皮-间充质转化；转移。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
Smad3是CRC细胞miR-140的直接靶点（A）Smad3 mRNA（wt）的3′UTR中存在预测的miR-501结合位点，并在结合位点中产生突变型（mut）。与Smad3-3′UTR-mut相比，miR-140模拟物转染降低了Smad3-3'UTR-wt的萤火虫荧光素酶活性；用Smad3-3′UTR-wt（negative miRNA+Smad3-3'UTR-wd）转染miRNA的阴性细胞也是阴性对照。n=3*p<0.05**p<0.01。（B） miR-140的异位表达略微降低了mRNA水平，而抗Smad3的siRNA通过实时qRT-PCR显著降低了Smad3 mRNA。使用寡效胺将miR-140模拟物（miR-140）转染HCT116和RKO细胞。仅CRC细胞（Con）和阴性miRNA（NC）为阴性对照，抗Smad3的siRNA（siSmad3）为阳性对照。GAPDH被用作内源性对照。n＝3**p<0.01。（C） 通过western blot分析，转染miR-140或Smad3敲除抑制Smad3和磷酸化Smad3（p-Smad3）蛋白水平。western blot定量结果用Gel-Pro Analyzer 4.0软件进行分析，GAPDH作为内源性对照。n=3**p<0.01。（D） 通过western blot分析，内源性miR-140的敲除可恢复Smad3和p-Smad3的表达。使用Lipofectamine 2000将miR-140抑制剂（140i）转染HCT116和RKO细胞。CRC细胞（Con）、扰乱的miRNA抑制剂（i-NC）以及miR-140抑制剂和针对Smad3的siRNA的共转染（140i+si）是阴性对照。western blot定量结果用Gel-Pro Analyzer 4.0软件进行分析，GAPDH作为内源性对照。n=3**p<0.01。数据表示为平均值±SD。
图2
图2
miR-140抑制CRC细胞的迁移和侵袭能力（A）划痕实验表明，与阴性对照、CRC细胞（Con）和阴性miRNA（NC）相比，miR-140过表达或沉默的Smad3减弱了HCT116和RKO细胞的迁移能力**p<0.01。（B） miR-140过表达或沉默的Smad3降低了Transwell迁移分析测定的迁移能力**p<0.01。（C） Transwell侵袭实验表明，miR-140或沉默Smad3的异位表达降低了CRC细胞通过细胞膜的能力**p<0.01。（D） 划痕试验表明，与阴性对照组（Con、i-NC和140i+si）相比，miR-140敲除增强了HCT116和RKO细胞的迁移能力**p<0.01。（E） transwell迁移分析表明，miR-140敲低促进了CRC细胞的迁移能力**p<0.01。（F） 跨阱侵袭实验表明，miR-140敲除增强了CRC细胞的侵袭能力**p<0.01。每个独立实验重复三次，数据表示为平均值±SD。获得了类似的结果，并显示了具有代表性的照片。
图3
图3
miR-140抑制CRC细胞生长（A）与CCK-8检测的阴性对照组（Con和NC）相比，增强miR-140的表达和沉默Smad3均显著降低细胞增殖和克隆数**p<0.01。（B） 集落形成试验表明，与阴性对照组（Con和NC）相比，miR-140过度表达和沉默Smad3减少了集落数量**p<0.01。（C） CCK-8分析显示，与阴性对照组（Con、i-NC和140i+si）相比，miR-140敲除促进了CRC细胞的增殖潜能**p<0.01。（D） 与阴性对照组（Con、i-NC和140i+si）相比，miR-140敲除增加了菌落数量**p<0.01。每个独立实验重复三次，数据以平均值±标准差表示。
图4
图4
miR-140抑制CRC细胞中的EMT（A）通过western blot分析，与阴性对照组相比，miR-140或siSmad3的增强表达增加了E-cadherin蛋白水平，降低了波形蛋白和Zeb1蛋白水平。（B） 与miR-140过度表达相比，miR-140的敲除逆转了E-cadherin、vimentin和Zeb1的蛋白表达。（C） 免疫荧光分析显示，与阴性对照组（Con和NC）相比，miR-140过度表达和Smad3敲除促进了E-cadherin表达（红色）并抑制了vimentin表达（绿色）。（D） 与阴性对照组（Con、i-NC和140i+si）相比，miR-140敲除抑制了E-cadherin的表达，增加了波形蛋白的表达。比例尺，25μm**p＜0.01。每个独立实验重复三次，数据表示为平均值±SD。
图5
图5
miR-140抑制CRC的发展和转移在体内用miR-140慢病毒载体（Len-140）或针对Smad3的shRNA（shSmad3）转导HCT116细胞，感染慢病毒对照的细胞为阴性对照（Len-NC）。（A） 将miR-140慢病毒载体（Len-140）、阴性对照（Len-NC）和抗Smad3 shRNA（shSmad3）转导的HCT116细胞分别皮下注射于BALB/c小鼠背部，监测皮下肿瘤生长4周（每组6例）。（B） 与阴性对照组相比，miR-140过表达或沉默Smad3显著降低肿瘤体积。数值显示为平均值±标准偏差。**p<0.01。（C） 局部肿瘤固定，石蜡包埋，切片，免疫组化染色。与阴性对照组相比，miR-140或shRNA-Smad3治疗组Smad3、p-Smad3，Zeb1和vimentin的表达显著降低，而E-cadherin的表达上调。显示代表性图像（左面板：100×；右面板：200×）。比例尺，50μm。（D） 在小鼠肿瘤组织中通过蛋白质印迹检测这些蛋白质，并且显示出与免疫组织化学相同的趋势。显示了具有代表性的图像。（E） 将感染慢病毒载体的HCT116细胞经尾静脉注射到BALB/c小鼠体内，监测8周。采集肺部和肝脏进行H&E染色。阴性对照组诱导所有小鼠出现可见的肺转移（n=6）。慢病毒过度表达miR-140导致6只小鼠中有4只发生肺转移，包括1例宏观转移结节和3例微观结节（n=6）。敲除Smad3后，6只小鼠中有4只发生了显微肺转移，其余2只小鼠未形成肺转移（n=6）。这三组患者的肝脏几乎没有受到影响。显示了具有代表性的图像（上面板：100×；下面板：200×）。比例尺，50μm。
图6
图6
miR-140的表达与大肠癌的发展和转移呈负相关，而Smad3的表达与小肠癌的发展呈正相关（A）选择了一组大肠癌标本，包括31个配对的大肠癌组织和邻近的大肠粘膜，采用实时定量RT-PCR检测miR-140表达水平。与邻近正常粘膜相比，原发性CRC组织中的MiR-140显著下调。（B） 然后，在31例有淋巴结或肝转移的CRC患者中选择13例，从转移瘤组织中提取RNA。miR-140在淋巴结中显著下调，并将肝转移瘤与配对原发肿瘤组织进行比较。miR-140的表达水平通过每个样品中的内部对照RNU6B进行标准化。（C） 在CRC队列中进行Smad3表达的免疫组织化学分析。与邻近正常粘膜相比，Smad3蛋白在CRC组织中过度表达。每个实验重复3次；数据以平均值±标准差表示。*p<0.05。比例尺，50μm。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

参考文献

    1. Fidler I.J.癌症转移的发病机制：重新审视“种子与土壤”假说。Nat.Rev.癌症。2003;3:453–458.-公共医学
    1. 曹华，徐毅，刘华，万丽，赖明。结直肠癌转移中的上皮-间质转化：系统综述。病态。研究实践。2015;211:557–569.-公共医学
    1. Thiery J.P.、Acloque H.、Huang R.Y.、Nieto M.A.发育和疾病中的上皮-间充质转变。单元格。2009;139:871–890.-公共医学
    1. 朱庆群，高瑞英，吴伟，秦海良。上皮-间质转化及其在结直肠癌发病中的作用。亚太地区。癌症预防杂志。2013;14:2689–2698。-公共医学
    1. Siegel R.L.、Miller K.D.、Jemal A.癌症统计，2015年。加州癌症杂志临床。2015;65:5–29.-公共医学

出版物类型

LinkOut-更多资源