Proteomic analysis of chicken embryo fibroblast cells infected with recombinant H5N1 avian influenza viruses with and without NS1 eIF4GI binding domain

doi:10.18632/oncotarget.23615

.2017年12月22日；9（9）：8350-8367。

doi:10.18632/目标23615。 eCollection 2018年2月2日。

感染重组H5N1禽流感病毒的鸡胚成纤维细胞的蛋白质组学分析

郭克雷^1 2 三 4, 西安林^1 2 三 4, 李永涛^1 5, 魏谦^1 2 三 4, 钟邹^1 2 三 4, 陈焕春^1 2 三 4, 周洪波^1 2 三 4, 金美林^1 2 三 4

附属公司

¹华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，武汉，430070。
²华中农业大学兽医学院动物病毒学实验室，武汉，430070，中国。
^三华中农业大学农业部兽医诊断产品开发重点实验室，武汉，430070。
⁴可持续生猪生产合作创新中心，中国武汉，430070。
⁵河南农业大学畜牧兽医学院，郑州，450002。

PMID： 29492200
预防性维修识别码：项目编号5823584
内政部： 10.18632/目标23615

感染具有和不具有NS1-eIF4GI结合结构域的重组H5N1禽流感病毒的鸡胚成纤维细胞的蛋白质组学分析

郭克雷等人。 Oncotarget公司. 2017.

.2017年12月22日；9(9):8350-8367.

doi:10.18632/目标23615。 eCollection 2018年2月2日。

作者

郭克雷^1 2 三 4, 西安林^1 2 三 4, 李永涛^1 5, 魏谦^1 2 三 4, 钟邹^1 2 三 4, 陈焕春^1 2 三 4, 周洪波^1 2 三 4, 金美林^1 2 三 4

附属公司

¹华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，武汉，430070。
²华中农业大学兽医学院动物病毒学实验室，武汉，430070，中国。
^三华中农业大学农业部兽医诊断产品开发重点实验室，武汉，430070。
⁴可持续生猪生产合作创新中心，中国武汉，430070。
⁵河南农业大学畜牧兽医学院，郑州，450002。

PMID： 29492200
预防性维修识别码：项目编号5823584
内政部： 10.18632/肿瘤靶点23615

摘要

非结构1（NS1）蛋白是调节流感病毒复制的关键毒力因子。缺乏NS1的eIF4GI结合域的重组H5N1病毒（rNS1-SD30）的致病性明显低于具有完整eIF4GI结合域（rNS1-wt）的H5N1型病毒。为了进一步研究这一现象，我们对感染rNS1-wt和rNS1-SD30病毒的鸡胚成纤维细胞（CEF）中的宿主蛋白进行了比较蛋白质组学分析。在感染后12、24和36小时，共鉴定出81个差异表达（DE）蛋白。这些蛋白质主要参与细胞骨架、凋亡和应激反应、转录调节、转运和代谢过程、mRNA加工和剪接以及细胞信号转导。DE蛋白的过度表达表明，ANXA7抑制rNS1-SD30病毒的传播，但不抑制rNS1-wt病毒的传播。此外，ALDH7A1、ANXA7和DCTN2强烈增强了鸡MDA5（chMDA5）诱导的IFN-β启动子活性，在ANXA7的情况下，也增强了rNS1-SD30病毒株诱导的IFN-β启动子的活性。NS1-wt联合转染抑制了chMDA5诱导的ANXA7介导的IFN-β启动子活性增加。这些发现突出了NS1 eIF4GI结合域在H5N1致病性中的作用，并可能有助于设计抗病毒策略以降低与该病原体相关的高发病率和死亡率。

关键词：H5N1禽流感病毒；NS1 eIF4GI绑定域；鸡胚成纤维细胞；差异表达蛋白；蛋白质组分析。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突作者声明，不存在潜在的利益冲突。

数字

**图1。rNS1-wt和rNS1-SD30病毒在CEF中的感染和复制**
(A类)rNS1-wt和rNS1-SD30病毒中NS基因片段示意图。(B类)用0.01MOI的rNS1wt和rNS1-SD30病毒感染CEFs，并收集上清液，通过标准斑块分析（PFU）检测MDCK细胞中12、24和36hpi的病毒滴度。(C类)用抗NP单克隆抗体间接免疫荧光（IFA）染色法，分别在12、24和36 hpi感染的CEF和36 h模拟感染细胞中的rNS1-wt和rNS1-SD30增殖动力学作为对照。病毒NP蛋白呈绿色，细胞核呈蓝色。

**图2。感染和未感染CEF中DE蛋白斑点的典型二维凝胶图**
检测到的DE蛋白用绿点标记。a至g中列出了详细信息，请参阅表1、补充表3和4中的相应脚注以及相应的编号。接种量显示在顶部，CEF收集的时间点显示在左侧。显示了从每组中的样本生成的代表性图像。

**图3。rNS1-wt-和rNS1-SD30-感染的CEF中DE蛋白斑点的放大2-DE图谱**
圆点表示DE蛋白斑点。MOCK表示未感染CEF中的调节蛋白点。wt和SD30分别表示感染rNS1-wt和rNS1-SD30病毒的CEF的蛋白斑点。

**图4。通过比较rNS1-wt和rNS1-SD30感染在12、24和36 hpi的情况，确定DE蛋白的前5种疾病和生物功能**
(A类)疾病和障碍；(B类)分子和细胞功能；(C类)生理系统发育与功能；和(D类)毒性功能。

**图5。比较网络通路分析DE蛋白**
12小时最高核网络(A类)，24小时(B类)和36小时(C类). 红色上调蛋白；绿色下调蛋白；白色，蛋白质已知存在于网络中，但在我们的研究中尚未确定。颜色强度表示蛋白质表达水平的变化程度。符号的形状表示分子类别。连接分子的线表示分子关系。实线：直接已知的相互作用；虚线：可疑或间接的相互作用；箭头：特定的分子关系和相互作用的方向性。

**图6。代表性蛋白质的蛋白质印迹**
从12、24和36 hpi采集的rNS1-wt-、rNS1-SD30-和模拟感染的CEF的单个样本中检测到蛋白质。

**图7。ANXA7过度表达抑制rNS1-SD30病毒复制**
(A类)用1µg HA-ANXA7或对照质粒（pCAGGS-HA）转染DF-1细胞24 h，然后在0.01 MOI下感染rNS1-wt和rNS1-SD30病毒。在12、24和36 hpi时收集上清液，并使用MDCK细胞上的菌斑试验评估病毒滴度。(B类)用2µg HA-ANXA7或对照质粒（pCAGGS-HA）转染DF-1细胞24 h，并在0.01 MOI下感染rNS1-wt和rNS1-SD30病毒。对在12、24和36 hpi时收集的细胞裂解液进行蛋白质印迹，用NP和HA标记抗体评估NP和ANXA7蛋白水平。

**图8。ANXA7促进IFN-β反应**
(A类)rNS1-wt和rNS1-SD30病毒感染的CEF中的mRNA表达水平。在12、24和36 hpi时收集未感染和rNS1-wt-及rNS1-SD30感染的CEF（0.01 MOI）。从模拟细胞和病毒感染细胞中提取的总RNA用于qRT-PCR检测鸡IFN-βmRNA。(B类)NS1-wt抑制chMDA5诱导的IFN-β启动子活性。用chMDA5（100 ng）或空载体（100 ng；表达结果反映了与对照细胞中荧光素酶活性的比较。(C类)蛋白质过度表达对chMDA5诱导的IFN-β反应的影响。用所示表达质粒（200 ng）转染DF1细胞24 h，并进行如（B）所述的荧光素酶分析。(D类)ANXA7促进rNS1-SD30病毒诱导的IFN-β启动子活性。用所示质粒转染DF-1细胞24小时，然后感染1个MOI rNS1-wt或rNS1-SD30病毒或不治疗24小时。按照（B）所述进行荧光素酶分析。

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

截断NS1 eIF4GI结合域对H5N1流感A病毒毒力和致病性的影响。
周H、朱J、涂J、邹W、胡Y、于Z、尹W、李Y、张A、吴Y、于Z、陈H、金M。周浩等。传染病杂志。2010年11月1日；202(9):1338-46. doi:10.1086/656536。传染病杂志。2010 PMID：20854176
H5N1流感A型病毒NS1中的保守残基酪氨酸（Y）84调节干扰素信号反应以增强病毒感染。
Wang BX、Wei L、Kotra LP、Brown EG、Fish EN。 Wang BX等。病毒。2017年5月12日；9（5）：107。doi:10.3390/v9050107。病毒。2017 PMID：28498306 免费PMC文章。
NS1基因有助于H5N1禽流感病毒的毒力。
Li Z、Jiang Y、Jiao P、Wang A、Zhao F、Tiang G、Wang X、Yu K、Bu Z、Chen H。 Li Z等。 J维罗尔。2006年11月；80(22):11115-23. doi:10.1128/JVI.00993-06。Epub 2006年9月13日。 J维罗尔。2006 PMID：16971424 免费PMC文章。
高致病性H5N1流感病毒NS1的X射线结构。
Bornholdt ZA，Prasad BV公司。 Bornholdt ZA等人。自然。2008年12月18日；456(7224):985-8. doi:10.1038/nature07444。Epub 2008年11月5日。自然。2008 PMID：18987632 免费PMC文章。
[禽流感中的细胞因子风暴]。
美国D。美国D。米克罗比约尔·布拉。2008年4月；42(2):365-80. 米克罗比约尔·布拉。2008 PMID：18697437 审查。土耳其的。

查看所有类似文章

引用人

Hsp70是Echovirus 9感染的潜在治疗靶点。
王毅、张浩、马丹、邓X、吴丹、李芳、吴Q、刘浩、王杰。王毅等。前Mol Biosci。2020年7月17日；7:146. doi:10.3389/fmolb.2020.00146。eCollection 2020。前Mol Biosci。2020 PMID：32766279 免费PMC文章。

工具书类

1. Taubenberger JK、Kash JC。流感病毒进化、宿主适应和大流行形成。细胞宿主和微生物。2010;7:440–451.-项目管理委员会-公共医学
1. Hale BG，Randall RE，Ortin J，Jackson D.甲型流感病毒的多功能NS1蛋白。普通病毒学杂志。2008;89（第10部分）：2359–2376。-公共医学
1. Lu Y，Wambach M，Katze MG，Krug RM。流感病毒NS1蛋白与双链RNA的结合抑制磷酸化eIF-2翻译起始因子的蛋白激酶的激活。病毒学。1995;214:222–228.-公共医学
1. Qiu Y，Krug RM。流感病毒NS1蛋白是一种聚（a）结合蛋白，可抑制含有聚（a）的信使核糖核酸的核输出。《病毒学杂志》。1994;68:2425–2432.-项目管理委员会-公共医学
1. Nemeroff ME、Barabino SM、Li Y、Keller W、Krug RM。流感病毒NS1蛋白与CPSF的细胞30kDa亚单位相互作用，并抑制细胞前mRNA的3'末端形成。分子细胞。1998;1:991–1000.-公共医学

LinkOut-更多资源

[1] Taubenberger JK、Kash JC。流感病毒进化、宿主适应和大流行形成。细胞宿主和微生物。2010;7:440–451.-项目管理委员会-公共医学

[2] Taubenberger JK、Kash JC。流感病毒进化、宿主适应和大流行形成。细胞宿主和微生物。2010;7:440–451.-项目管理委员会-公共医学

[3] Hale BG，Randall RE，Ortin J，Jackson D.甲型流感病毒的多功能NS1蛋白。普通病毒学杂志。2008;89（第10部分）：2359–2376。-公共医学

[4] Hale BG，Randall RE，Ortin J，Jackson D.甲型流感病毒的多功能NS1蛋白。普通病毒学杂志。2008;89（第10部分）：2359–2376。-公共医学

[5] Lu Y，Wambach M，Katze MG，Krug RM。流感病毒NS1蛋白与双链RNA的结合抑制磷酸化eIF-2翻译起始因子的蛋白激酶的激活。病毒学。1995;214:222–228.-公共医学

[6] Lu Y，Wambach M，Katze MG，Krug RM。流感病毒NS1蛋白与双链RNA的结合抑制磷酸化eIF-2翻译起始因子的蛋白激酶的激活。病毒学。1995;214:222–228.-公共医学

[7] Qiu Y，Krug RM。流感病毒NS1蛋白是一种聚（a）结合蛋白，可抑制含有聚（a）的信使核糖核酸的核输出。《病毒学杂志》。1994;68:2425–2432.-项目管理委员会-公共医学

[8] Qiu Y，Krug RM。流感病毒NS1蛋白是一种聚（a）结合蛋白，可抑制含有聚（a）的信使核糖核酸的核输出。《病毒学杂志》。1994;68:2425–2432.-项目管理委员会-公共医学

[9] Nemeroff ME、Barabino SM、Li Y、Keller W、Krug RM。流感病毒NS1蛋白与CPSF的细胞30kDa亚单位相互作用，并抑制细胞前mRNA的3'末端形成。分子细胞。1998;1:991–1000.-公共医学

[10] Nemeroff ME、Barabino SM、Li Y、Keller W、Krug RM。流感病毒NS1蛋白与CPSF的细胞30kDa亚单位相互作用，并抑制细胞前mRNA的3'末端形成。分子细胞。1998;1:991–1000.-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

您的RSS源

感染重组H5N1禽流感病毒的鸡胚成纤维细胞的蛋白质组学分析

附属公司

感染具有和不具有NS1-eIF4GI结合结构域的重组H5N1禽流感病毒的鸡胚成纤维细胞的蛋白质组学分析

作者

附属公司

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

研究材料

其他

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

相关信息

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

研究材料

其他