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.2018年2月26日；8(1):3581.
doi:10.1038/s41598-018-22067-5。

人滑膜中端粒细胞的形态学证据

艾琳·罗莎 1, 米尔卡·马里尼 1, 丹尼尔·瓜斯蒂 1, 利迪娅·伊巴·曼内西 1, 米尔科·马内蒂 2
附属公司

人滑膜中端粒细胞的形态学证据

艾琳·罗莎等。 科学代表. .

摘要

最近在人类各种器官的基质中发现了一种新的细胞类型，称为端细胞（即具有独特延长的细胞，称为末端足）。然而，尚未有研究报告在双关节滑膜中存在端粒细胞。因此，本研究利用透射电镜、免疫组织化学和免疫荧光技术在正常人滑膜中寻找端粒细胞。超微结构分析表明，在整个滑膜亚衬层中存在大量纺锤状终末细胞。滑膜端细胞表现出非常长和薄的念珠状端足，特别集中在衬里层和亚衬里层之间的边界以及血管周围。光学显微镜证实在上述位置存在CD34阳性的端粒细胞。此外，滑膜上皮细胞共同表达CD34和血小板衍生生长因子受体α。双重免疫染色进一步明确区分滑膜细胞（CD34阳性/CD31阴性）和血管内皮细胞（CD34阳性/CD31阳性）。成纤维细胞样滑膜细胞原代培养物的体外检测显示，不同类型的细胞共存，包括CD34阳性的端细胞投射典型的念珠状端足。总之，我们的工作提供了人类滑膜中确实存在端粒细胞的第一个证据，并为今后研究各种退行性和破坏性关节疾病中的滑膜端粒细胞奠定了基础。

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作者声明没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
光镜和透射电镜下人类滑膜（内层和亚内层）的形态。(一,b条)甲苯胺蓝染色滑膜半薄切片的代表性显微照片。箭头输入(一,b条)指向滑膜衬里层，星号在(b条)表示滑膜下层的血管。(b条)基质细胞呈纺锤状或梨状细胞体，细胞核大，细胞质极少量，在滑膜衬里和亚衬里层之间的边界观察到长而薄的细胞质突起（箭头所示；插图中放大倍率较高）。(c（c）,d日)用乙酸铀酰和亚硝酸铋溶液染色的滑膜超薄切片的代表性透射电镜照片。端粒细胞（TC）和端足类（Tp）被数字着色为蓝色。端粒细胞的超微结构特征是：i）纺锤状或梨状细胞体，具有相对较大的常染色细胞核，其周围有一层薄的细胞质层，其中含有少量线粒体、稀少的内质网池和一个小高尔基体，以及ii）存在端足类，长的细胞质突起，从细胞体中狭长突起，呈念珠状轮廓，特征是细段（足粒）和扩张部分（足粒”）交替出现。端粒细胞和端足类存在于A型/巨噬细胞样滑膜细胞（Ma）和构成滑膜衬里的B型/成纤维细胞样滑膜上皮细胞（Fb）下方的滑膜亚衬层中(c、 d日). 滑膜亚衬含有端足细胞或成纤维细胞（Fb），后者的细胞质丰富，富含粗面内质网池、线粒体和高尔基体，突起短而厚(c（c）). 比例尺：50 微米(一,b条), 5 微米(c（c）,d日).
图2
图2
光镜和透射电镜下人类滑膜（下层）的形态。(a、 b条)甲苯胺蓝染色滑膜半薄切片的代表性显微照片。星号表示下层血管。基质细胞显示纺锤状或梨状细胞体，细胞核大，细胞质很少，滑膜下衬中有细长的念珠状细胞质突起，尤其是在血管周围部位（箭头；插图中放大倍率较高）。(c（c）–小时)用乙酸铀酰和亚硝酸铋溶液染色的滑膜超薄切片的代表性透射电镜照片。Telocytes（TC）和telopodes（Tp）已被数字着色为蓝色。端粒细胞的超微结构特征是：i）一个小细胞体，主要由一个相对较大的细胞核占据，细胞核被稀少的细胞质包围，其中含有少量线粒体和内质网池以及一个小高尔基体，ii）细念珠状突起（端足类）从细胞体出现狭窄，呈念珠状（交替出现细节/足粒和扩张部分/足粒）。细胞核呈锯齿状，核膜附近可见异染色质斑块。荚膜容纳一些细胞器，如粗面内质网和线粒体(c（c），插图）。端粒细胞的超微结构特征使其很容易与邻近的成纤维细胞（Fb）区分开来，Fb具有丰富的粗面内质网和线粒体池、巨大的高尔基体和短而厚的突起(d日). 在整个滑膜亚衬层中都可以观察到端粒细胞和端足，无论是在被大量胶原细胞外基质包围的中性位置(c、 e（电子）)或与成纤维细胞在地形上密切相关(d日)和血管（BV）(（f）–小时). 注意，在微血管的基底层有端足类(（f）–小时). 比例尺：50 微米(a、 b条), 5 微米(c（c）–小时).
图3
图3
人类滑膜切片的代表性光学显微镜和荧光显微镜照片。(一–c（c）)CD34免疫过氧化物酶免疫组化和苏木精复染。(d日)用4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI；蓝色）复染细胞核的CD34（绿色）免疫荧光标记。CD34阳性的纺锤形细胞（端粒细胞）和长胞质突起（端足类）分布于整个滑膜亚衬层(一–d日). 请注意，在滑膜衬里-亚衬里界面处存在大量平行排列的CD34阳性基质细胞（箭头位于a、 b条)以及周围的亚线性微血管（箭头b、 c（c）). 血管内皮细胞中也观察到CD34免疫阳性。在高倍镜下，CD34阳性基质细胞的突起呈现念珠状轮廓(d日，插图）。(e、 （f）)CD34（绿色）和PDGFRα（红色）的双重免疫荧光标记与细胞核的DAPI（蓝色）复染。端粒细胞CD34和PDGFRα双重阳性。(克)CD34（绿色）和CD31（红色）用DAPI（蓝色）双重免疫荧光标记细胞核。端粒细胞为CD34阳性/CD31-阴性，而血管内皮细胞为CD34-阳性/CD31阳性（箭头所示）。比例尺：50 微米(一–克).
图4
图4
人类成纤维细胞样滑膜细胞原代培养的代表性相控和荧光显微镜照片。(a、 b条)相控显微镜。(c、 d日)用4′，6-二氨基-2-苯基吲哚（DAPI；蓝色）免疫荧光标记小麦胚凝集素（WGA；绿色）的细胞核。(一–d日)注意存在成纤维细胞（Fb）或终末细胞（TC），后者的特征是细胞体小，念珠状突起（末端足类，Tp）很长很薄，通常与成纤维细胞或其他终末细胞建立细胞间接触（箭头）。(e、 （f）)CD34（红色）用DAPI（蓝色）免疫荧光标记细胞核。CD34阳性细胞投射出很长很薄的念珠状细胞质突起（末端足类，Tp），可明确识别为末端细胞（TC）。中的插图(e（电子）)图中显示了由薄节段（足细胞）和扩张部分（足细胞。注意一个端粒细胞的端足与另一个端粒细胞的细胞体接触（箭头在e（电子）). 比例尺：50 微米(一–（f）).
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