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.2018年2月13日;8(1):2961.
doi:10.1038/s41598-018-21076-8。

慢性接触低剂量双酚A通过SIRT1调节对第一轮精子发生的影响

附属公司

慢性接触低剂量双酚A通过SIRT1调节对第一轮精子发生的影响

罗莎娜·契亚内塞等。 科学代表. .

摘要

精子发生依赖于沿着下丘脑-垂体-性腺轴的内分泌、自分泌和旁分泌通讯。双酚A(BPA)是一种雌激素内分泌干扰物,是一种用于制造聚碳酸酯塑料和环氧树脂的环境污染物,对男性生殖有毒性作用。在这里,我们研究了长期接触低BPA剂量是否通过调节SIRT1(一种NAD)影响精子发生+-依赖性脱乙酰酶参与精子发生的过程,并对细胞凋亡、氧化应激、代谢和能量平衡产生影响。首先通过胎盘接触BPA,然后通过哺乳和饮用水接触BPA会影响雄性后代在出生后45天和第一轮精子发生时的体重增加,导致血睾屏障受损、活性氧生成受损、DNA损伤和SIRT1表达降低。SIRT1下游分子通路的分析显示乙酰基-p53的增加赖氨酸370、γH2AX病灶、氧化应激防御能力降低和治疗动物睾丸中较高的凋亡率,以及性成熟时的部分挽救。总之,BPA暴露后SIRT1通路的破坏可能会对第一轮精子发生产生严重后果。

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利益冲突声明

作者声明没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
BPA暴露对血睾屏障完整性的影响。()Cx43和ZO-1的Western blotting代表条带。(b、 c(c))Cx43的蛋白表达(b条)和ZO-1(c(c))45 PND和60 PND。数据表示为平均值±扫描电镜(d–g)免疫荧光图像显示45 PND处Cx43(绿色)定位(,e(电子))和60 PND(f、 克). (小时–小时)显示ZO-1(红色)在45 PND分布的代表性图片(h、 我)和60 PND(j个,k个). 插图1-4(Cx43)和5-8(ZO-1)描述了每个实验组放大倍数较高的区域*P(P) < 0.05,**P < 0.01年龄匹配的对照组。比例尺,50微米。Cx43:连接蛋白43;ZO-1:闭塞带1;tub:微管蛋白;C: 对照组:双酚A暴露组;PND:产后一天。
图2
图2
BPA暴露对氧化应激和DNA损伤的影响。(,b条)mRNA表达Mlh1型()和半径51 (b条)17、45和60 PND。数据报告为标准化折叠表达式(n.f.e.)±SEM。(c、 d日)45 PND免疫荧光法检测γH2AX(绿色)。放大倍数较高的区域如插图1–2所示。细胞核用碘化丙啶(红色)标记。(e–h)45 PND时睾丸组织中DHE(红色)含量显示氧化剂的生成(e、 如果)和60 PND(g、 小时). (i、 j个)在45 PND时通过8-OHdG(绿色)评估氧化应激诱导的DNA损伤。BPA暴露组的高倍放大面积如插图3所示。Nuclei标有DAPI(蓝色)**P(P) < 0.01年龄匹配对照组;P(P) < 0.0517和45个PND对照组;#P(P) < 0.0117和45个PND BPA组。比例尺,50微米。DHE:二氢乙炔;8-OHdG:8-OH-脱氧鸟苷;C: 对照组:双酚A暴露组;PND:产后一天。
图3
图3
BPA暴露对睾丸SIRT1表达的影响。()mRNA表达沉默信息调节因子117、45和60 PND。数据报告为标准化折叠表达式(n.f.e.)±SEM。(b条)SIRT1的Western blotting代表条带。(c(c))大鼠睾丸在45 PND和60 PND时SIRT1的表达水平。数据表示为平均值±扫描电镜(d–g)显示45 PND时SIRT1(绿色)的代表性图像(,e(电子))和60 PND((f),). 每个实验组的选定区域在插图1-4中放大*P(P) < 0.05,**P < 0.01年龄匹配对照组;°P(磅) < 0.0117和60 PND对照组。比例尺,50微米。tub:微管蛋白;C: 对照组:双酚A暴露组;PND:产后一天。
图4
图4
BPA暴露引起的DNA损伤反应。()p53和Ac-p53的蛋白质印迹代表性条带赖氨酸370. (b、 c(c))p53蛋白表达(b条)和Ac-p53赖氨酸370(c(c))45 PND和60 PND。数据表示为平均值±扫描电镜(d–g)交流-p53赖氨酸37045 PND时大鼠睾丸(绿色)表达(,e(电子))和60 PND((f),). 方框内的区域在插图1-4中以较高的放大倍数显示。(h–j小时)评估Ac-p53表达的代表性图像赖氨酸370(绿色)(小时),SIRT1(红色)()和他们的合并(j个)BPA暴露组45 PND。插图5-6显示了放大倍数较高的区域。Nuclei标有DAPI(蓝色)**P(P) < 0.01年龄匹配的对照组。比例尺,50微米。交流-p53赖氨酸370:乙酰-p53赖氨酸370; tub:微管蛋白;C: 对照组:双酚A暴露组;PND:产后一天。
图5
图5
接触BPA后的抗氧化酶。()过氧化氢酶和MnSOD的Western blotting代表性条带。(b、 c(c))过氧化氢酶的蛋白质表达(b条)和MnSOD(c(c))45 PND和60 PND。数据表示为平均值±扫描电镜*P < 0.05年龄匹配的对照组。tub:微管蛋白;C: 对照组:双酚A暴露组;PND:产后一天。
图6
图6
BPA暴露对细胞凋亡的影响。()Bax和Bcl的Western blotting代表性条带2. (b条)Bax和Bcl的蛋白表达2表示为45 PND和60 PND时的比率。(c–f)TUNEL分析显示45 PND时大鼠睾丸中的凋亡细胞(绿色)(c(c),)和60 PND(e(电子),(f)). ()具有三个以上凋亡细胞的小管部分。数据表示为平均值±扫描电镜*P < 0.05,**P < 0.01年龄匹配的对照组。比例尺,50微米。tub:微管蛋白;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记;C: 对照组:双酚A暴露组;PND:产后一天。

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