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.2018年5月;41(5):2704-2714.
doi:10.3892/ijmm.2018.3457。 Epub 2018年2月5日。

长非编码RNA ENSRNOG00000037522参与糖尿病大鼠足细胞上皮-间质转化

附属公司

长非编码RNA ENSRNOG00000037522参与糖尿病大鼠足细胞上皮-间质转化

李玲等。 国际分子医学杂志. 2018年5月.

摘要

糖尿病肾病(DN)是与I型和II型糖尿病相关的最常见并发症之一。长非编码RNA(lncRNAs)参与了多种生理和病理过程,最近的证据表明,它们参与了上皮-间充质转化(EMT)的过程。在本研究中,研究了lncRNA ENSRNOG00000037522在DN的EMT过程中的潜在功能。结果表明,在链脲佐菌素(STZ)诱导的DN伴肾小球足细胞受损的大鼠肾组织中,lncRNA ENSRNOG00000037522的水平显著升高。进一步证明,通过小干扰RNA转染沉默lncRNA ENSRNOG00000037522可部分恢复足细胞功能。此外,lncRNA ENSRNOG00000037522的敲除通过调节波形蛋白、足蛋白样1和nephrin的表达修复足细胞的损伤。总之,目前的结果表明,lncRNA ENSRNOG00000037522在DN足细胞EMT中起着关键作用。

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利益冲突声明

竞争性利益

作者声明,他们没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
免疫组化检测α-SMA、波形蛋白、PODXL1和nephrin的蛋白表达。对照组的α-SMA和波形蛋白表达水平几乎不存在,但在1周和6周时在糖尿病肾脏中高表达。然而,PODXL1和nephrin在对照组大鼠中强烈表达,但在STZ注射后肾脏中显著下调。所有实验均进行了三次,并显示了具有代表性的免疫组织化学图像。α-SMA,α-平滑肌肌动蛋白;PODXL1,podocalyxin-like 1;STZ、链脲佐菌素。
图2
图2
(A) 用ELISA法测定血清CysC、(B)血清β3-MG、(C)UmAlb和(D)BUN浓度。与对照组大鼠相比,糖尿病大鼠的这些因素增加。所有测量一式三份,结果以平均值±标准差表示。*与对照组相比,P<0.05。胱抑素C;β2-MG,β2-微球蛋白;尿液微量白蛋白;BUN,血尿素氮。
图3
图3
在显微镜下观察培养后第3天和第5天以及继代培养后第7天的足细胞形态(放大倍数×100)。比例尺,50µ所有实验一式三份进行,并显示代表性图像。
图4
图4
用western blot分析检测糖尿病大鼠和对照大鼠足细胞的肾素、PODXL1、波形蛋白和α-SMA蛋白表达水平。所有实验均一式三份,结果以平均值±标准偏差表示。*与对照组相比,P<0.05。PODXL1,podocalyxin-like 1;α-SMA,α-平滑肌肌动蛋白。
图5
图5
分层聚类热图显示了对照组和STZ治疗糖尿病大鼠足细胞中不同的lncRNA表达谱。6周后,从对照组和STZ治疗的糖尿病大鼠中获取足细胞,并进行层次聚类分析。根据色阶描述lncRNA的相对表达。红色列表示上调,绿色列表示下调。lncRNA,长非编码RNA;STZ、链脲佐菌素。对照1、2和3表示来自对照大鼠的三个代表性足细胞样品;STZ 1、2和3表示来自STZ治疗糖尿病大鼠的三个代表性足细胞样本。
图6
图6
对照组和STZ治疗的糖尿病大鼠之间差异表达lncRNAs的GO分析。包括三个领域,包括细胞成分、分子功能和生物过程。GO分析表明,差异表达的lncRNA主要参与细胞、细胞部分和细胞过程。GO,基因本体论;lncRNA,长非编码RNA;STZ、链脲佐菌素。
图7
图7
对照和STZ治疗的糖尿病大鼠之间差异表达lncRNA的京都基因和基因组百科全书通路分析。三种最丰富的途径是“癌症途径”、“PI3K-Akt信号途径”和“癌症中的microRNAs”。lncRNA,长非编码RNA;STZ、链脲佐菌素。
图8
图8
(A) RT-qPCR用于验证7个选定的lncRNA转录本。*与对照组相比,P<0.05。(B) 在用高糖处理足细胞后,对7个选定的lncRNA转录物进行RT-qPCR验证。lncRNA ENSRNOG00000037522是高糖治疗组足细胞中与正常组相比上调最多的lncRNA。*与正常细胞相比P<0.05。所有实验均一式三份,结果以平均值±标准偏差表示。lncRNA,长非编码RNA;RT-qPCR,逆转录定量聚合酶链反应。
图9
图9
(A) 用逆转录定量聚合酶链反应检测lncRNA ENSRNOG00000037522的敲除效率,并在转染siRNA1或siRNA2后观察到lncRNA EN SRNOG000037522显著消失。(B) Western blot分析测定lncRNA ENSRNOG00000037522敲除和对照足细胞中α-SMA、波形蛋白、nephrin和POXLD1的表达水平。(C) 蛋白质水平通过ImageJ软件进行量化,并显示在直方图中。以转染NC siRNA的足细胞作为对照。所有实验均一式三份,结果以平均值±标准偏差表示。*与NC组相比,P<0.05。lncRNA,长非编码RNA;NC,阴性对照;小干扰RNA。

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