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.2018年3月；15(3):3369-3375.
doi:10.3892/ol.2017.7669。 Epub 2017年12月20日。

长非编码RNA CCAT2促进上皮性卵巢癌细胞中涉及Wnt/β-catenin通路的上皮间质转化

王贝迪（Beidi Wang） 1, 刘美美 1, 如金庄 1, 靖江 1, 嘉荫高 1, 王浩（Hao Wang） 1, 何晨 1, 张宗峰 1, 叶匡 1, 李佩玲 1
附属公司

长非编码RNA CCAT2促进上皮性卵巢癌细胞中涉及Wnt/β-catenin通路的上皮间质转化

王贝迪（Beidi Wang）等。 Oncol Lett公司. 2018年3月.

摘要

长非编码RNA结肠癌相关转录物2（CCAT2）在多种类型的人类癌症中失调。然而，CCAT2在上皮性卵巢癌（EOC）中的作用在很大程度上仍然未知。本研究旨在探讨CCAT2对上皮性卵巢癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其相关分子机制。在本论文中，我们发现与正常卵巢上皮细胞HUM-cell-0088细胞系相比，在EOC SKOV3、A2780和HO8910细胞系中CCAT2显著上调。功能分析表明CCAT2的敲除抑制EOC细胞的迁移和侵袭在体外此外，我们的结果表明，沉默CCAT2通过上调SKOV3和A2780细胞系的上皮钙粘附素和下调神经钙粘附素、锌指蛋白SNAI和扭曲相关蛋白1来抑制EMT。但是，用氯化锂（LiCl）处理可以逆转这种情况，通过氯化锂处理可以激活典型的Wnt/β-catenin途径。此外，我们进一步研究了CCAT2在Wnt/β-catenin信号通路调节中的作用。我们的结果表明，CCAT2基因敲除抑制了β-catenin的表达和T细胞因子/淋巴增强因子的活性，是Wnt信号通路的关键转录因子。总之，这些结果表明CCAT2可能促进EMT，至少部分通过EOC细胞中Wnt/β-catenin信号通路。因此，CCAT2可能在EOC进展中发挥关键作用，并成为卵巢癌治疗的一个有价值的靶点。

关键词：Wnt信号；结肠癌相关转录物2；上皮性卵巢癌；上皮-间充质转化；长的非编码RNA。

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数字

图1。
图1。
与HOSE HUM-cell-0088细胞系相比，EOC SKOV3、A2780和HO8910细胞系中CCAT2表达上调。数据表示三个独立实验的平均值±标准偏差*P<0.05和#与HOSE细胞相比P<0.01（学生t检验）。上皮性卵巢癌；HOSE，人卵巢表面上皮；CCAT2，结肠癌相关转录本2。
图2。
图2。
沉默CCAT2抑制EOC细胞的迁移和侵袭在体外（A）伤口愈合试验的代表性图像。（B） 该试验表明，CCAT2的敲除降低了相对于NC细胞的运动能力。（C） 使用Matrigel侵袭室评估细胞侵袭的典型图像。（D） 沉默的CCAT2抑制SKOV3和A2780细胞的侵袭。数据表示三个独立实验的平均值±SD。与NC组相比P<0.01（Student t检验）。NC，阴性对照；小干扰RNA；结肠癌相关转录物2。
图3。
图3。
CCAT2促进EOC细胞中涉及Wnt/β-catenin信号通路的EMT。（A） 在SKOV3细胞中，敲除CCAT2在mRNA水平上增加了E-钙粘蛋白的表达并降低了N-钙粘蛋白、（B）Slug和Twist1的表达，在A2780细胞中，敲除CCAT2在mRNA水平上增加了E-钙粘蛋白的表达并降低了N-钙粘蛋白、（D）Slug和Twist1的表达。但是，Wnt信号激活剂LiCl（20 mM，24 h）的治疗逆转了这种情况。数据表示三个独立实验的平均值±标准偏差。控制值设置为1*与NC组相比P<0.05；#与SI组相比，P<0.05（Student t检验）。CCAT2，结肠癌相关转录物2；上皮-间充质转化；上皮性卵巢癌；NC，阴性对照；小干扰RNA；氯化锂、氯化锂；上皮钙粘附素；N-钙粘蛋白、神经钙粘蛋白；Slug、锌指蛋白SNAI；扭曲1，扭曲相关蛋白1。
图4。
图4。
敲除CCAT2后，SKOV3和A2780细胞中E-cadherin的表达增加，N-cadherin、Slug和Twist1的表达减少。但是，用Wnt信号激活剂LiCl（20 mM）处理24小时（20 mM-NaCl作为对照）可逆转这种情况。给出了（A）SKOV3和（B）A2780的典型蛋白质印迹分析图像。数据表示三个独立实验的平均值±标准偏差。控制值设置为1*与NC组相比P<0.05；#与SI+NaCl组相比，P<0.05（Student t检验）。CCAT2，结肠癌相关转录物2；氯化锂、氯化锂；NC，阴性对照；小干扰RNA；上皮钙粘附素；N-钙粘蛋白、神经钙粘蛋白；Slug、锌指蛋白SNAI；扭曲1，扭曲相关蛋白1。
图5。
图5。
CCAT2参与Wnt/β-catenin信号通路。（A） TOP-FLASH荧光素酶报告子分析显示，CCAT2基因敲除下调SKOV3和A2780的TCF/LEF活性。（B） 通过LiCl处理（20 mM，持续24 h），CCAT2的表达增加，以进一步激活典型Wnt/β-catenin信号。（C） 在SKOV3和（D）A2780细胞中，CCAT2基因敲除降低了细胞核和细胞质中蛋白质水平的β-catenin表达。数据代表三个独立实验的平均值±标准差。控制值设置为1*与NC组相比P<0.05；#与SI+NaCl组相比，P<0.05（Student t检验）。CCAT2，结肠癌相关转录物2；NC，阴性对照；小干扰RNA；氯化锂、氯化锂；TOP-FLASH，TCL/LEF-萤火虫荧光素酶；氯化锂、氯化锂。
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