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.2018年2月6日；8(1):2524.
doi:10.1038/s41598-018-2098-3。

肝X受体对周围神经氧化应激的保护作用

Mehdi Hichor公司 1, 文卡特·克里希南·桑达拉姆 1, 圣埃芬妮开斋节 1, 伦扎·阿卜杜勒·拉苏尔 1, Patrice X Petit公司 1, 迪迪埃·博代里 1, 让·巴斯廷 1, 阿萨德开斋节 2, 马林·曼纽尔 三, 朱利安·格雷尼尔 1, 夏贝尔·马萨德 4
附属公司

肝X受体对周围神经氧化应激的保护作用

Mehdi Hichor公司等。 科学代表. .

摘要

活性氧（ROS）修饰蛋白质和脂质，导致有害后果。因此，维持体内平衡水平至关重要。本研究强调了LXR（LXRα和β）在外周神经氧化应激调节中的内源性作用。我们报告称，尽管Nrf2依赖性抗氧化反应被激活，但小鼠LXR亚型的基因消融（LXRdKO）引发了与坐骨神经中阴离子超氧物生成、脂质氧化和蛋白质羰基化增强相关的显著运动缺陷。有趣的是，活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸可对抗LXRdKO小鼠的行为、电生理、超微结构和生化改变。此外，经LXR激动剂TO901317预处理的培养物中的雪旺细胞对叔丁基过氧化氢产生的氧化应激具有更好的防御能力，这意味着LXR在维持外周神经系统氧化还原稳态中发挥着重要作用。因此，LXR激活可能是一种很有前途的策略，可以保护外周髓磷脂免受施旺细胞氧化还原稳态紊乱引起的改变。

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利益冲突声明

作者声明，他们没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
LXR消融引起坐骨神经氧化应激。提取8周龄WT或LXRdKO小鼠的坐骨神经。(一)使用高效液相色谱法通过DHE分析定量阴离子超氧化物生成。(b条)WT和LXRdKO动物的GSH测定。(c（c）)检测Nrf2的神经裂解物的典型western blots（裁剪凝胶）(d日)Akt和P-Akt蛋白。所有定量均归一化为α-管蛋白。(e（电子）)通过RT-qPCR对抗氧化基因的mRNA进行定量。对照组和LXRdKO动物的转录水平均归一化为GAPDH表达。(如果)抗氧化基因的酶活性测定。这些酶的活性根据组织重量标准化。(克)通过RT-qPCR定量转染siLXRα和siLXR-的MSC80抗氧化反应基因的mRNA水平。在非靶向对照组和siLXR转染细胞中，转录水平均归一化为GAPDH表达。结果代表平均值 ± 至少三个独立转染实验的SEM，其他实验每组5只动物**P（P） < 0.01和*P < 0.05***P < 0.001由学生评估t吨测试。
图2
图2
LXR的消融不会改变发育过程中正常的髓鞘形成和氧化还原状态。实验使用21天龄WT或LXRdKO小鼠的坐骨神经。(一)使用高效液相色谱法通过DHE分析定量阴离子超氧化物的产生。检测Nrf2的神经裂解物的典型western blots（裁剪凝胶）(b条)、PMP22和MPZ(c（c）)蛋白质。所有定量均归一化为α-管蛋白。(d日)超薄（50–90）的电子显微镜图像 nm）WT和LXRdKO P21小鼠坐骨神经横截面。通过g比率（有髓轴突的内周长和外周长）估计髓鞘厚度。结果代表平均值 ± 每组至少5只动物的扫描电镜。统计显著性由一名学生的t吨测试。
图3
图3
N-乙酰半胱氨酸治疗显著减轻LXRdKO小鼠的髓鞘状态改变。这些实验使用了来自8周龄WT或LXRdKO或NAC处理的LXRd KO小鼠的坐骨神经。(一)使用高效液相色谱法通过DHE分析定量阴离子超氧化物生成。(b条)通过丙二醛（MDA）定量进行脂质过氧化分析。(c（c）)蛋白质羰基化分析。(d日)检测PMP22和MPZ蛋白的神经裂解物的代表性蛋白质印迹（裁剪凝胶）。所有定量均归一化为α-管蛋白。(e（电子）)超薄（50–90）的电子显微镜图像 nm）WT、LXRdKO或NAC处理的LXRd KO小鼠的坐骨神经横截面。(如果)用g比率估计髓鞘厚度。结果代表平均值 ± 每组至少5只动物的SEM。Tukey的帖子评估了统计显著性特殊试验方差分析后。(克)WT、LXRdKO和LXRd KO坐骨神经髓鞘轴突大小分布 + NAC公司。(小时)绘制g比率分析作为轴突周长的函数。线性回归曲线以黑色表示WT，灰色表示LXRdKO，白色虚线表示LXRodKO + NAC动物。结果代表平均值 ± 每组至少5只动物的扫描电镜。统计显著性由一名学生的t吨测试。
图4
图4
N-乙酰半胱氨酸治疗可抵消LXRdKO小鼠的功能缺陷。(一)WT、LXRdKO或LXRd KO的神经传导 + NAC动物。在不同刺激强度下电刺激WT小鼠、LXRdKO小鼠和经NAC治疗的LXRd KO小鼠的坐骨神经后，从L4背根（顶部迹线）和腹根（底部迹线）记录到的代表性反应。带星号的垂直虚线表示刺激时间。每个记录道是对强度增加的刺激的平均响应（平均10–15次扫描）（虚线记录道、阈值强度、较薄记录道、1.2刺激 × 阈值，痕迹稍厚，刺激为1.75 × 阈值，最厚的轨迹是2–3处的最大响应 × 阈值）。刺激伪影被截断。(b条)束流行走测试结果测量速度、故障次数和沿束流移动时的停车次数。(c（c）)握力测试结果测量了小鼠从水平杆上悬浮的总时间。通过三次试验获得结果。结果是平均值 +/− 每组5-7只动物的扫描电镜*P（P） < 0.05; **P（P） < 0.01; ***P（P） < 0.001由Tukey发布特殊试验方差分析后。
图5
图5
TO901317激活的LXR调节雪旺细胞中抗氧化酶的表达。用TO9（10 µM）或车辆（乙醇）2 h、 4个 h、 和8 h.在规定的时间点提取总蛋白，然后进行Western Blotting。(一)通过western blots（裁剪凝胶）量化Nrf2蛋白的表达谱。所有印迹均归一化为α-管蛋白表达。(b条)Akt蛋白的磷酸化特征（P-Akt/Akt比率）通过蛋白质印迹（裁剪凝胶）定量。所有印迹均归一化为α-管蛋白表达。(c（c）)72个抗氧化反应基因的mRNA表达谱 h.转录水平标准化为GAPDH表达。结果代表平均值 ± 至少三个独立实验的SEM*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01和***P（P） < 0.001由Tukey的岗位评估特殊试验方差分析后。(d日)抗氧化反应基因在48℃时的酶活性 h和72 h.酶活性标准化为组织重量。(e（电子）)用非靶向siRNA（NT）或针对LXRα和LXRß的siRNA转染MSC80细胞。48 转染后小时，用T09（10 µM）或车辆（乙醇）24 h.通过RT-qPCR评估G6PDH、6PGDH和IDH1的mRNA水平，并将其归一化为GAPDH表达。结果代表平均值 ± 至少三个独立实验的SEM*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01, ***P（P） < 0.001由学生评估t吨测试。
图6
图6
LXR激活可减少ROS生成和细胞毒性在体外MSC80细胞与TO9或载体对照预先孵育72 h，然后在2 小时(一)实验时间尺度示意图。(b条)每种条件的代表性FACS分析结果（车辆控制乙醇：EtOH，叔丁基过氧化氢：tBHP和TO9 + tBHP治疗）X轴代表DCFH-DA荧光，Y轴代表PI荧光。散点图用其各自的DCFH-DA和PI荧光表示整个细胞群。R1门仅考虑活细胞来量化DCFH-DA荧光，并排除死细胞。(c（c）)通过3个单独的FACS实验，通过DCFH-DA荧光评估氧化应激。(d日)tBHP处理后的GSH测定结果。通过3个单独的FACS实验通过PI荧光评估细胞死亡。结果显示为三个独立实验的平均+/-SD值*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01, ***P（P） < 与对照组相比，单向方差分析后Tukey的事后检验结果为0.001。
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