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.2017年10月25日；1(10):1099-1109.
doi:10.1002/hep4.1114。 eCollection 2017年12月。

Periostin通过诱导肝内胆管癌上皮-间质转化促进恶性潜能

马萨基·米诺 1, Keishi Kanno公司 1, 冈本孝介 1, 杉山明子 1, 纪川信介 1, 小林友子 1, 小野俊雅 2, 井原贤治 3, 小林筑桥 4, Toshikazu Ohigashi先生 5, Hideki Ohdan先生 4, Susumu Tazuma公司 1
附属公司

Periostin通过诱导肝内胆管癌上皮-间质转化促进恶性潜能

马萨基·米诺等。 肝素Commun. .

摘要

Periostin是一种分泌的基质细胞蛋白，据报道可诱导上皮-间充质转化（EMT），从而增加各种上皮癌细胞的运动性和侵袭性。Periostin在肝内胆管癌（ICC）中也过度表达，可能是肿瘤进展和预后不良的生物标志物；然而，它在国际刑事法院中的职能作用还没有完全被理解。在此，我们研究了骨膜炎是否通过诱导ICC中的EMT影响恶性潜能。对手术切除的ICC标本的分析表明，在ICC肿瘤中，骨膜抑素的基因表达显著高于邻近的非肿瘤肝组织，并且与间充质标志物的表达密切相关，包括N-钙粘蛋白、波形蛋白和纤维连接蛋白。然而，每种情况下骨膜蛋白的表达水平不同。一贯地，在HuH28（一个未分化的ICC细胞）中，骨膜蛋白的表达明显高于HuCCT-1（一个中度分化的ICC细胞）。此外，在HuH28培养基中观察到高水平的骨膜炎素分泌，但在HuCCT-1中未观察到。为了确定骨膜炎在EMT中的生物学意义，在HuH28细胞中用小干扰RNA沉默骨膜炎基因。HuH28细胞中Periostin的敲除显著下调间充质标记物和上调上皮标记物，提示EMT的逆转，即间充质-上皮转变。随着这些变化，细胞增殖被显著抑制了52%。此外，细胞迁移和侵袭分别被显著抑制62%和61%，基质金属蛋白酶2的基因表达降低。有趣的是，骨膜炎素耗竭也显著提高了吉西他滨的化疗敏感性。结论：Periostin通过EMT在调节恶性潜能方面发挥着重要作用，并被认为是治疗ICC的新靶点。(肝病传播2017;1:1099-1109).

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数字

图1
图1
ICC组织中骨膜蛋白和间充质标记物的表达水平。手术ICC组织（n=11）接受实时PCR，以量化骨膜抑素和EMT相关标记物。（A） 比较骨膜抑素在ICC组织和邻近非肿瘤组织中的基因表达。数据显示为方框图，表示最小值、第一个四分位数、中间值、第三个四分位和最大值。使用双侧配对学生完成统计比较t吨测试**P（P）< 0.01. （B） 骨膜炎水平之间的相关性(x个轴）和每个EMT相关标记(年轴）显示在散点图中。缩写：RPS18，核糖体蛋白S18。
图2
图2
ICC细胞系中骨膜蛋白和间充质标志物的表达水平。（A） 使用实时PCR（n=6）（上面板）和免疫印迹（左下面板）研究MMNK1、HuH28和HuCCT1细胞中的骨膜抑素表达。使用ELISA（n=6）测量72小时后培养基中的Periostin浓度（右下图）。数据通过双向方差分析进行分析，并表示为平均值±SEM。（B）使用实时PCR（n=6）和免疫印迹法评估HuH28和HuCCT1细胞中EMT相关标记的表达。对一名双方未配对的学生进行了统计比较t吨测试。数据表示为平均值±SEM**P（P）< 0.01. 缩写：GAPDH，甘油醛‐3磷酸脱氢酶；mRNA，信使RNA。
图3
图3
在HuH28细胞中由骨膜蛋白击倒诱导的EMT逆转。将靶向人骨膜蛋白或非靶向干扰对照的siRNA转染HuH28细胞。（A） 使用实时PCR（n=6）证实了骨膜炎蛋白的敲除。转染7天后，用ELISA定量培养基中的骨膜炎素浓度（n=3）。（B） siRNA转染7天后，使用实时PCR分析上皮（E-cadherin和CK19）和间充质（N-cadherin、vimentin和fibronectin）标记物的基因表达。（C） 使用免疫印迹法测定骨膜蛋白和EMT相关标记物的蛋白表达。数据表示为平均值±SEM*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01. 缩写：GAPDH，甘油醛‐3磷酸脱氢酶；Scr，加扰控制；siPN，siRNA靶向人骨膜蛋白。
图4
图4
骨膜蛋白对ICC细胞恶性潜能的调节。将靶向人骨膜蛋白或非靶向干扰对照的siRNA转染HuH28细胞。（A） 在转染7天后（n=11-12）（左面板）使用BrdU分析和实时PCR评估细胞增殖Ki67号机组和PCNA公司表达式（中间和右侧面板）。（B） 将转染siRNA（siPN或Scr）的HuH28细胞接种到无血清条件下的上腔中，观察细胞向充满含有10%FBS的培养基的下腔迁移的情况（左侧面板）并进行量化（右侧面板）。（C） 在无血清条件下，将转染细胞接种到基底膜覆盖的上腔。将含有10%FBS的培养基用于下室。对侵入细胞进行可视化（左侧面板）和量化（右侧面板）。的表达式基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9使用实时PCR定量（n=6）。为了量化迁移和入侵，进行了四个独立的实验，将每个控制值设置为1.0进行比较。（D） 在siRNA转染7天后比较Gem的化学敏感性。使用细胞计数试剂盒-8（n=3）在Gem治疗72小时后评估相对细胞活力。数据表示为平均值±SEM*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01. 缩写：arb，任意；PCNA公司增殖细胞核抗原；Scr，加扰控制；靶向人periostin的siPN、siRNA。
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