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.2018年1月17日:8:1132。
doi:10.3389/fphys.2017.01132。 2017年电子收集。

天花粉果皮水提取物增强急性心肌缺血大鼠内皮祖细胞动员并上调VEGF、eNOS、NO和MMP-9的表达

附属公司

瓜蒌果皮水提取物增强急性心肌缺血大鼠内皮祖细胞动员并上调VEGF、eNOS、NO和MMP-9的表达

傅妮妮(Nini Fu)等。 前生理学. .

摘要

天花粉果皮2000年来,TP在中国被广泛用于治疗心血管疾病患者。本研究旨在扩展我们之前的工作,探讨茶多酚对急性心肌缺血(AMI)保护作用的机制。我们假设TP可能通过上调AMI大鼠血管内皮生长因子(VEGF)、内皮一氧化氮合酶(eNOS)、一氧化氮(NO)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平,促进内皮祖细胞(EPC)的动员,从而对AMI发挥保护作用。为了证实这一假设,我们用TP水提取物(TPAE)灌胃治疗AMI模型大鼠,并检测了这些大鼠心肌组织中CEPC数量、VEGF、eNOS、NO和MMP-9的表达水平及其血浆含量的变化。每组大鼠随机分为七个亚组。从AMI建模后的第1天到第7天,这些亚组的大鼠在被水合氯醛麻醉后依次从腹腔动脉进行静脉切开。我们发现,与AMI模型大鼠相比,经TPAE治疗的大鼠,心肌组织中的CEPC计数、VEGF、eNOS、NO和MMP-9的表达以及血浆含量在AMI后7天都迅速增加,并保持在较高水平(P(P)<0.05或P(P)< 0.01). 我们的结果表明,在AMI大鼠中,TPAE可显著促进EPC的动员,上调心肌中VEGF、eNOS、NO和MMP-9的表达水平及其血浆含量。因此,我们的结果表明,TAPE可能通过上调AMI大鼠心肌中VEGF、eNOS、NO和MMP-9的表达水平来调节EPC动员。

关键词:天花粉果皮;急性心肌缺血;内皮一氧化氮合成;内皮祖细胞;基质金属蛋白酶-9;血管内皮生长因子。

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数字

图1
图1
葫芦科天花粉和中草药天花粉果皮中草药天花粉果皮是葫芦科植物干燥成熟的果皮天花粉。购自中国中药与材料良好农业规范(GAP)基地天花粉,中国山东省长清区马山镇庄科村,经山东中医药大学药学院中药鉴定室鉴定评估。(A)葫芦科天花粉它的果实在天花粉SDTCM中;(B)干燥成熟的水果天花粉; (C)中草药天花粉果皮.凭证样本(编号:20160807005(B)编号:20160911003-006(C))存放在SDTCM中。
图2
图2
流式细胞仪测定大鼠外周血白细胞散布图。用EDTA.2Na抗凝的新鲜全血样本与PE结合的抗CD34抗体和FITC-结合的抗vWF抗体孵育。然后将溶血素溶解在蒸馏水中,并以最终浓度10%(v/v)应用于细胞。(A)前向散射(FSC)和侧向散射(SSC)图,栅极中的细胞代表单核细胞;(B)荧光强度散点图。通过PE免疫荧光染色阳性鉴定为CEPC的MNC+/FITC公司+或CD34+/vWF(vWF)+(P2-Q2)代表EPC。
图3
图3
TAPE对AMI大鼠EPC动员的影响,第3亚组大鼠血样荧光强度散射图。每组大鼠被随机分为7个亚组,即第1-7亚组。在AMI建模后的第1-7天,选择第1-7亚组大鼠,分别在水合氯醛麻醉后从腹腔动脉进行静脉切开。采用流式细胞仪对每只大鼠的新鲜全血样本进行CEPC定量。栅极P2-Q2(PE)中的电池+/FITC公司+或CD34+/vWF(vWF)+)代表EPC。这是第3亚组大鼠血样的荧光强度散射图。(A)对照组一只大鼠血样散点图;(B)模型或模型的一只大鼠的血液样本的散点图isch公司组;(C)一只大鼠血液样本的散点图组。
图4
图4
TAPE对AMI大鼠EPC动员的影响,AMI后7天各组大鼠CEPC含量的变化。每组大鼠被随机分为7个亚组,即第1-7亚组。在AMI建模的第1-7天,第1-7亚组的大鼠分别被水合氯醛麻醉后,从腹腔动脉进行静脉切开。采用流式细胞仪对每只大鼠的新鲜全血样本进行CEPC定量。Ctrl、Isch和Trich表示对照组、模型组和组;1 d−7 d,表示冠状动脉结扎或假手术后的第1−7天;#或##,P(P)<0.05或P(P)与对照组相比<0.01;***P(P)<0.05或P(P)与模型组比较<0.01。每个数据代表8只大鼠组的平均值,垂直线表示平均值的标准误差(SEM)。
图5
图5
TAPE对AMI后7天各组大鼠心肌VEGF、eNOS和MMP-9表达的影响。如上所述,每组大鼠被随机分为7个亚组,即第1-7亚组。在AMI建模的第1-7天,分别选择第1-7亚组的大鼠进行处死。动物在麻醉下从腹腔动脉进行静脉切开后,心脏被切除。左心室组织样本在结扎状态下于2 mm处采集,在液氮中冷冻,并在使用前储存在−80°C下。在处死所有大鼠并进行静脉切开后,同时检测所有心肌蛋白样品。Western Blot分析VEGF、eNOS和MMP-9的表达。(A1、B1、C1)Western blot分析各组大鼠心肌组织中VEGF、eNOS和MMP-9的蛋白表达;GAPDH是Western blot的内部参考蛋白。(A2、B2、C2)、各组大鼠心肌组织VEGF、eNOS和MMP-9的定量Western blot分析;Ctrl、Isch和Trich分别为对照组、模型组和Trich组;1 d−7 d,表示冠状动脉结扎或假手术后的第1−7天;■, ■■,P(P)<0.05或P(P)与对照组相比,<0.01;***P(P)<0.05或P(P)与缺血组相比,<0.01。Δ、ΔΔ,P(P)<0.05或P(P)与同一组的前一个亚组相比,<0.01。每个数据代表8只大鼠组的平均值,垂直线表示平均值的标准误差(SEM)。
图6
图6
TAPE对AMI后7天各组大鼠血浆VEGF、eNOS、NO和MMP-9水平的影响。每组大鼠被随机分为7个亚组,即第1-7亚组。在AMI建模的第1-7天,第1-7亚组的大鼠分别被水合氯醛麻醉后,从腹腔动脉进行静脉切开。新鲜全血样本以3000 r/min的速度离心10 min。上清液保存在4℃。在处死所有大鼠并进行静脉切开后,同时对所有样品进行测试。ELISA法检测血浆VEGF、eNOS、NO和MMP-9水平。协议参考了这些ELISA试剂盒的制造商说明。(A)各组大鼠血浆VEGF含量;(B)各组大鼠血浆eNOS活性;(C)各组大鼠血浆NO浓度;(D)各组大鼠血浆MMP-9活性。Ctrl、Isch和Trich分别为对照组、模型组和Trich组;1 d−7 d,表示冠状动脉结扎或假手术后的第1−7天;■, ■■,P(P)<0.05或P(P)与对照组相比,<0.01;***P(P)<0.05或P(P)与缺血组相比,<0.01。Δ, ΔΔ,P(P)<0.05或P(P)与前一亚组相比,<0.01。每个数据代表8只大鼠组的平均值,垂直线表示平均值的标准误差(SEM)。

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