跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2018年1月19日；8(1):1263.
doi:10.1038/s41598-018-19750-y。

肾散在的小管样细胞通过释放细胞外小泡在狭窄的小鼠肾脏中发挥保护作用

邹香玉 1 2, Soon Hyo Kwon先生 1 三, 开江 1, 克里斯托弗·M·弗格森 1, Amrutesh S Puranik公司 1, 朱向阳 4, 利拉赫·O·勒曼 5
附属公司

肾散射管状样细胞通过释放细胞外小泡介导对狭窄小鼠肾脏产生保护作用

邹香玉等。 科学代表. .

摘要

验证固有肾散在小管细胞（STC-like cells）通过释放细胞外囊泡（EV）帮助修复受损小管上皮细胞（TEC）的假说。原代培养猪STC样细胞释放的EV经电镜证实。抗肌球蛋白A（AMA）诱导的损伤近端TEC（PK1细胞）与STC-样细胞、STC-类细胞衍生EV或无EV条件介质共培养3天。评估细胞损伤、氧化应激和线粒体功能。使用线粒体示踪剂评估线粒体从STC样细胞向TEC的转移，并通过线粒体膜电位测定评估其活力。在诱导单侧肾动脉狭窄2周后，将STC样细胞衍生的EV动脉注射到小鼠体内。两周后，使用磁共振成像技术研究肾血流动力学，并通过体外评估肾纤维化。培养的STC-like细胞释放的EV被TEC摄取。STC-样细胞在AMA诱导的TEC损伤中的保护作用部分被其EV所模仿。此外，STC-类细胞EV携带线粒体物质并将其转移到受损的TEC，从而部分恢复线粒体功能。在体内，STC样细胞衍生的EV植入狭窄的肾脏，并改善其灌注和氧合。STC-like cells-EV在体内外对受损的肾小管细胞具有保护作用，部分是通过转移STC-lise cells线粒体实现的，线粒体在受体TEC中至少保持部分功能。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明，他们没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
分散管状细胞（STC-like细胞）的特征。上图：免疫细胞化学染色证实STC样细胞表达CD133、KIM1、波形蛋白、CD24和OCT4。底部：冷冻猪肾切片的免疫组织学染色显示CD133的存在+/CD24型+近端小管中的细胞现场.
图2
图2
分散管状细胞（STC-like cells）衍生细胞外小泡（EV）的特征。(A类)Western Blot分析显示EV对CD24、CD133、CD9、CD29和CD81呈阳性反应。(B类)对纯化EV进行纳米级分析，以评估EV的尺寸分布(C类)培养的STC-like细胞的透射电镜显示EV从细胞表面脱落，在纯化的EV中证实了它们的球形和线粒体包裹颗粒的存在。(D类)Western Blot分析显示，STC-like cells EV表达与MSC EV相似的蛋白，但更多的是TGF-β1和IL-6。
图3
图3
分散的管状细胞（STC样细胞）和细胞外小泡（EV）影响细胞损伤。(A类)PK1肾小管上皮细胞（TEC）活性测定表明，抗霉素A（AMA）剂量依赖性地降低细胞活性。(B类)与STC-like细胞共培养可提高细胞活力，但与EV或无EV条件培养基（CM-EV）共培养则不能提高细胞活力。(C类)AMA增加了乳酸脱氢酶（LDH）活性，STC-like细胞和EV中LDH活性降低，但CM-EV中LDH活力没有降低(D类)与单独的AMA相比，与STC-like细胞和STC-lize细胞共同培养EV可以部分恢复能量生产，但不能恢复CM-EV(E类)AMA显著增强了TEC中的DHE染色，STC-样细胞和STC-状细胞EV可逆转这种染色，但CM-EV不能逆转这种染色。线粒体氧化应激（*P < 0.05 vs PK1，#P（P） < 0.05与PK1 + AMA、+P < 0.05对PK1 + STC样细胞& < P（P） < 0.05与PK1 + AMA公司 + EV）。(F类)免疫细胞化学染色显示PK1细胞表达CD24、KIM1和Vimentin，但不表达CD133或OCT4。
图4
图4
通过细胞外小泡（EV）将线粒体输送至肾小管上皮细胞（TEC）。(A类)用红色细胞膜染料标记的STC样细胞与未标记的PK1在非接触条件下共同培养。随后在未标记的PK1 24中观察到红色信号 孵育后h，并使用未标记的STC样细胞作为对照。(B类)分离的EV用Mito-Tracker红色标记。与绿色标记的TEC共培养24小时后 h、 未标记的PK1（白色箭头）可见红色和黄色染色。对照组为未标记EV。(C类)Mitotracker绿色标记EV与PK1孵育24小时 小时。TMRE染色显示转移的线粒体也被染色（白色箭头），表明受损的PK1保持活性。
图5
图5
线粒体调节蛋白和线粒体DNA。(A类)抗霉素A（AMA）暴露后，PK1线粒体中动态相关蛋白1（DRP1）的表达显著增加，但被STC-like cells-EV抑制。融合相关蛋白Mitofusin 2（Mfn2）和Optic Atrophy 1（OPA1）无明显变化。(B类)AMA处理PK1后评估前凋亡caspase3，EV下调其表达。Bax/Bcl-XL比值无变化。(C类)PK1经AMA处理后，ND1和COXIII DNA显著下降。STC-like cells-EV含有mtDNAs并改善其在受损PK1中的表达（*P < 0.05 vs PK1，#P（P） < 0.05与PK1 + AMA）。代表性的Western印迹是从同一凝胶的不同部分切下的，全长印迹可以在补充信息文件中找到。
图6
图6
小鼠狭窄肾脏（STK）的肾脏血流动力学。(A类)与Sham相比，RAS后4周STK体积显著下降，与RAS相比无显著差异 + 企业价值(B类)STK皮质和髓质灌注明显减少，EV改善了这种情况(C类)术后4周，RAS患者的血清肌酐高于Sham患者，EV使其恢复(D类)肾小管周围毛细血管密度在RAS中显著降低 + 车辆，但经过电动汽车处理后有所改善。(E类)在RAS中观察到STK氧合减少 + Vehicle与Sham在皮层和髓质中的对比，后者通过EV恢复（*P < 0.05 vs SHAM，#P（P） < 0.05与RAS + 车辆）。
图7
图7
狭窄肾脏（STK）的线粒体调节。(A类)Mito-Tracker-Red标签EV（白色箭头）在分娩2周后STK中的代表性图像。绿色显示内源性线粒体染色。(B类)Tom-20染色用于评估肾线粒体密度，RAS STK中线粒体密度降低，EV改善线粒体密度(C类)RAS小鼠STK表现出COXI表达下降，EV逆转了COXI的表达。COXII和COXIV没有明显变化。(D类)STK中磷酸化Drp1/总Drp1的比率增加，EV则相反。STK中caspase3、Bax/Bcl-XL的比率没有显著变化，但EV下调caspase2和Bax/Bcl-XL比率（*P < 0.05 vs SHAM，#P（P） < 0.05与RAS + 车辆）。代表性的Western印迹是从同一凝胶的不同部分切下的，全长印迹可以在补充信息文件中找到。
图8
图8
EV减轻狭窄性肾纤维化，改善其功能。(A类)肾纤维化在RAS中显著增加 + 载体，而EV可减轻肾纤维化。(B类)分娩后2周STK中CM-Dil标记EV（红色）和CD3-阳性T细胞（绿色）的代表性图像。洋红色显示管状细胞染色（细胞角蛋白）。（*P < 0.05 vs SHAM，#P（P） < 0.05与RAS + 车辆）。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Devarajan P.缺血性急性肾损伤机制更新。《美国肾脏病杂志》。2006;17:1503–1520. doi:10.1681/ASN.2006010017。-内政部-公共医学
    1. Emma，F.、Montini，G.、Parikh，S.M.和Salviati，L.遗传性肾病和急性肾损伤中的线粒体功能障碍。Nat Rev Nephrol（2016）。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Maeshima A、Yamashita S、Nojima Y。参与肾脏再生过程的肾祖样小管细胞的鉴定。《美国肾脏病杂志》。2003;14:3138–3146. doi:10.1097/01.ASN.0000098685.43700.28。-内政部-公共医学
    1. 易卜拉希米B等。间充质干细胞改善猪动脉粥样硬化性肾动脉狭窄血运重建后的骨髓炎症和纤维化。公共科学图书馆一号。2013;8:e67474。doi:10.1371/journal.pone.0067474。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Smeets B等人。近端肾小管细胞包含参与肾小管再生的表型不同的分散细胞群。病理学杂志。2013;229:645–659. doi:10.1002/path.4125。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型