跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2018年1月18日；553(7688):351-355.
doi:10.1038/nature25170。 Epub 2018年1月10日。

REV-ERBs的药理激活在癌症和癌基因诱导的衰老中是致命的

加布里埃尔·苏利 1, 艾米·隆美尔 2, 王晓杰 三, 马修·科拉尔 4, 弗朗西丝卡·普卡 5, 阿兰·萨哈泰利安 4, 马克西姆五世（Maksim V Plikus） 三, Inder M Verma公司 2, Satchidananda熊猫 1
附属公司

REV-ERBs的药理激活在癌症和癌基因诱导的衰老中是致命的

加布里埃尔·苏利等。 自然. .

摘要

生物钟控制着细胞增殖、新陈代谢、炎症和DNA损伤反应的每日节律。这些过程的干扰是癌症的标志，慢性昼夜节律紊乱会使个体容易患上肿瘤。这就提出了一个假设，即生物节律机制的药理调节可能是抗癌的有效治疗策略。REV-ERBs，即核激素受体REV-ERBα（也称为NR1D1）和REV-ERB-β（也称为NR1D2），是生物钟的基本组成部分。在这里，我们表明REV-ERBs-SR9009和SR9011的两种激动剂对癌细胞和癌诱导的衰老细胞（包括黑素细胞痣）具有特异性致死作用，并且对正常细胞或组织的生存能力没有影响。SR9009和SR9011的抗癌活性影响许多致癌因素（如HRAS、BRAF、PIK3CA等），并在缺乏p53和缺氧条件下持续存在。SR9009和SR9011对自噬和新生脂肪生成的调节在恶性细胞的凋亡反应中起着关键作用。值得注意的是，这些REV-ERB激动剂的选择性抗癌特性损害了胶质母细胞瘤在体内的生长并提高了生存率，而不会对小鼠造成明显毒性。这些结果表明，生物节律调节器的药理调节是一种有效的抗肿瘤策略，可识别出一类具有广阔治疗窗口的抗癌药物。我们认为REV-ERB激动剂是自噬和新生脂肪生成的抑制剂，对恶性和良性肿瘤具有选择性活性。

PubMed免责声明

数字

扩展数据图1
扩展数据图1。SR9011是一种额外的REV-ERBs激动剂，可选择性杀伤癌细胞株
a、，活性分析表明，SR9011在72小时内对癌细胞具有特异性细胞毒性，单向ANOVA星形胶质细胞，n=生物复制（n=7个模拟），（n=72.5µM），（n=95µM***P（P）=0.0004，星形细胞瘤（n=21模拟），（n=15 2.5µM），（n=7 5µM），（n=8 10µM），（n=7 20µM）****P（P）<0.0001，BTIC（n=10模拟），（n=8 2.5µM），（n=9 5µM），（n=13 10µM），（n=10 20µM）****P（P）<0.0001.b–d，增殖测定显示，SR9011治疗不影响BJ正常细胞，而对转化的BJ-ELR细胞、癌细胞系MCF-7、HCT116（20µM，7天）有害。shRNA耗尽REV-ERBs损伤REV-ERB激动剂SR9011诱导的细胞凋亡；n=3个生物独立实验）。e、，REV-ERB激动剂SR9011对人类急性T细胞白血病细胞的影响（72小时，Mann-Whitney单尾试验****P（P）< 0.0001; n=24个模拟，n=12个SR9011生物复制品）。f中，裂解Caspase 3的免疫印迹分析表明，REV-ERB激动剂触发A375黑色素瘤细胞系的凋亡（代表n=2个生物学独立实验）。g–j，裂解Caspase 3的免疫染色和TUNEL分析证实SR9011在癌细胞MCF-7和A375中诱导凋亡。h–j，量化g、 我（n=生物独立样本，MCF-7 n=5模拟，n=11 SR9011；A375 n=8模拟，n=16 SR9011）。；Mann–Whitney测试单尾MCF-7劈开Casp。3 *P（P）=0.0117; 隧道*P（P）= 0.0231; A375劈开Casp。3 ****P（P）<0.0001; 隧道****P（P）<0.0001. 标尺50µm。k、，电子显微镜证实了线粒体大量肿胀所指示的凋亡诱导（代表两个实验中的3个生物独立样本）。箭头表示线粒体正常，星号表示线粒体肿胀。Nu=细胞核。比例尺1µm。我qRT-PCR（A375）证实REV-ERBα和REV-ERPβ下调。n=3个生物独立样本；Mann–Whitney单尾检验*P（P）=0.05. 除非另有规定，否则所有小组均进行三项生物独立实验。所有数据均绘制为平均值±标准偏差。凝胶源数据见补充图1。
扩展数据图2
扩展数据图2。REV-ERBs激动剂诱导细胞凋亡与p53和氧化应激无关
a–j，增殖试验显示，REV-ERBs激动剂治疗可独立于p53状态触发细胞凋亡（7天20µM；a、 c、f、h)和TUNEL分析(b、 i，j3天，20µM）在受不同类型p53改变影响的癌细胞系中表达。N=生物独立样本T47D N=8（模拟），N=6（SR9009），N=10（SR9011）单向方差分析检验****P（P）<0.0001，PANC-1 n=4（模拟），n=6（SR9009），n=7（SR9011）单向方差分析检验TUNEL*P（P）=0.0108，Cl.半胱氨酸蛋白酶3****P（P）<0.0001; SKMEL28 n=4（模拟），n=5（SR9009，SR9011）单向方差分析测试TUNEL****P（P）<0.0001，Cl.半胱氨酸蛋白酶3**P（P）=0.0035,).;d–e，WT和p53缺失的HCT116细胞均诱导凋亡（TUNEL试验4天，20µM平均值±s.e.M.，n=生物独立样本Mann–Whitney试验单尾HCT116 WT n=5（模拟，SR9009）**P（P）=0.004; HCT116 p53 KO n=8（模拟），n=6（SR9009）***P（P）=0.0003);f中，裂解Caspase 3的免疫印迹分析表明，REV-ERBs激动剂触发RIGH细胞系的凋亡（一个实验）。k、，与还原剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC 10mM）共处理并不能挽救A375的生存能力（20µM 7天，N=生物复制N=5（模拟NAC），N=6（所有其他点图）单向方差分析测试****P（P）<0.0001).我在低氧条件下（20µM，6天，n=生物复制n=3（模拟NAC，模拟低氧，09低氧），n=6（09常氧，011常氧和低氧）单向方差分析测试也获得了类似的结果****P（P）<0.0001).m–n，缺氧或与NAC联合治疗不会改变REV-ERBs激动剂诱导A375细胞凋亡的能力（单向方差分析测试，n=生物独立样本，n=3个模拟，n=5 SR9009，n=11 SR9011 TUNEL常氧*P（P）=0.0432，Cl.半胱氨酸蛋白酶3***P（P）=0.0004; n=6模拟，n=13 SR9009，n=14 SR9011缺氧TUNEL***P（P）=0.0005，Cl.半胱氨酸蛋白酶3*P（P）=0.0028; n=3模拟，n=4 SR9009，n=3 SR9011 NAC TUNEL*P（P）=0.0104，NAC Cl.半胱氨酸蛋白酶3**P（P）=0.0042; 所有比例尺50µm。除另有规定外，所有小组均进行了三项具有类似结果的生物独立实验。所有数据均绘制为平均值±标准偏差。标准偏差=标准偏差；低氧=低氧。凝胶源数据见补充图1。
扩展数据图3
扩展数据图3。氧化应激的减弱并不影响REV-ERBs激动剂的细胞毒性活性
a–b，REV-ERBs激动剂在与NAC联合治疗和缺氧条件下也能诱导细胞凋亡，HCT-116增殖试验显示；n=生物复制n=3（模拟±NAC），n=6（09-011±NAC****P（P）<0.0001).c–d码缺氧或与NAC联合治疗后HCT116细胞凋亡诱导保持不变；20µM 6天，单向方差分析测试，n=生物独立样本n=5（模拟），n=6（SR9009），n=8（SR9011）常氧TUNEL***P（P）=0.0003；常氧Cl.Caspase 3**P（P）=0.0021；n=3（模拟），n=5（SR9009），n=4（SR9011）缺氧TUNEL**P（P）=0.0015; 缺氧Cl.半胱氨酸蛋白酶3**P（P）=0.0046; NAC隧道****P（P）<0.0001; NAC Cl.半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3****P（P）<0.0001)e、，同样，在由REV-ERBs激动剂触发的MCF-7细胞凋亡与氧化状态无关，如增殖试验所示（20µM n=生物复制n=6（模拟常氧/缺氧），n=4（09-011常氧），n=7（09缺氧），n=5（011缺氧）单向方差分析测试****P（P）<0.0001;f–gTUNEL分析和Cleaved Caspase 3的免疫荧光分析证实了先前的结果；n=生物独立样本n=3（模拟常氧），n=5（模拟缺氧），n=11（09常氧）、n=8（09缺氧）、n=10（011常氧/缺氧），单向方差分析测试TUNEL常氧**P（P）=0.0049; Cl.案例。3常氧**P（P）=0.0054; TUNEL缺氧****P（P）<0.0001; Cl.案例。3缺氧****P（P）<0.0001; 所有小组进行了三个生物独立实验，结果相似。所有数据均绘制为平均值±标准偏差。标准偏差=标准偏差；低氧=低氧。
扩展数据图4
扩展数据图4。REV-ERB激动剂抑制从头开始脂肪生成
a–b，通过qRT-PCR检测，REV-ERBs诱导FASN和SCD-1 mRNA的下调（A172胶质母细胞瘤细胞系48h，20µM，FASN及SCD-1（n=3个生物独立样本****P（P）<0.0001); 此外，FASN和SCD-1蛋白水平(b条)治疗后减少。c–i类REV-ERB激动剂降低LC-MS定量的游离脂肪酸（FFA）浓度。c（c）在SR9009处理的样品中，FASN（C16:0，C18:0）和SCD-1（C16:1，C18:1）的初级产品FFA的相对水平较低。d日SR9009处理过的样品中，由于单不饱和油酸盐浓度下降较大，因此不饱和指数、油酸盐与硬脂酸盐的比值变化减小；e–f，对多不饱和脂肪酸的分析表明，这些脂肪酸的含量呈下降趋势；g–i，FFA水平的降低会影响含有这些脂肪酸的磷脂的浓度。REV-ERB激动剂治疗可减少含棕榈酸的磷脂酰胆碱、含花生四烯酸和油酸的磷脂酰肌醇、单不饱和和二不饱和磷脂酰甘油，以及h–i磷脂酰乙醇胺；（A172胶质母细胞瘤细胞系48h，20µM，*P=0.05。j个、FASN和SCD-1代谢产物图解；k个，补充油酸部分改善REV-ERBs激动剂的细胞毒性（20µM，A172 4天）；我，补充棕榈酸不会损害REV-ERBs激动剂的细胞毒性（20µM，A172 4天）。所有数据均绘制为平均值±标准偏差。P（P）-在面板中使用单向方差分析计算值一以及在其余面板中进行单尾Mann–Whitney测试。d–i日n=3个生物独立样本。凝胶源数据见补充图1。
扩展数据图5
扩展数据图5。REV-ERB激动剂SR9011抑制自噬
a–b，SR90011治疗降低了MCF7和T47D中自噬体的数量，n=生物独立样本MCF7 20µM 24h n=9（模拟），n=4（SR9011）**P（P）=0.0056，T47D 48小时20µM n=5（模拟），n=4（SR9011）**P（P）=0.0079;c–d，SR9011诱导MCF7和T47D中p62的累积，如免疫荧光所示n=生物独立样本48h MCF7 p62 n=3（模拟），n=4（SR9011）*P（P）=0.0286; 48小时T47D n=5（模拟，SR9011）**P（P）=0.004;e、，通过免疫印迹（48h，20µM A375）确认p62的积累；f–g，自噬抑制先于凋亡诱导，如p62的免疫荧光、裂解Caspase 3和TUNEL分析所示（n=生物独立样本n=4 mock 48h，n=5 SR9011 p62，n=3 48h SR9011；n=6（mock，SR9011 72h p62），n=10（mock 72h），n=8（SR9011 72 h）A375 20µM，Cl.Casp。348小时*P（P）=0.0286; Cl.案例。372小时****P（P）<0.0001; 隧道48小时*P（P）=0.0286; 隧道72h****P（P）<0.0001; 第62页48小时**P（P）=0.0079; p62 72小时**P（P）=0.0011）。所有小组都进行了三次生物独立实验，结果相似。所有数据均绘制为平均值±标准偏差。P（P）-该值是通过所有面板中的Mann–Whitney单尾测试计算得出的。凝胶源数据见补充图1。
扩展数据图6
扩展数据图6。REV-ERB激动剂SR9009和SR9011阻断自噬
a、，REV-ERBs激动剂阻断自噬导致自噬流量减少；b、，LC3点的量化；n=生物独立样本n=6（模拟，CQ±SR9011），n=11（SR9009）n=5（SR9011**P（P）=0.0049; 单向方差分析CQ与CQ+SR9009/011****P（P）<0.0001.c、，在SR9009和SR9011治疗后，通过电子显微镜甚至在饥饿状态下也可以观察到自噬堵塞。箭头表示具有代表性的自噬体。Nu=细胞核。比例尺1uM（n=两个独立实验的3个生物独立样本，结果相似（模拟±SR9009和SR9011），一个实验（模拟，SR9009与SR9011±饥饿）。日期：，REV-ERB激动剂诱导溶酶体聚集，如溶酶体标记LAMP1的免疫荧光分析所示（n=生物独立样本，n=11个模拟，n=6个SR9009，n=SR9011 T47D，72h 20µM，单向方差分析****P（P）<0.0001.e、，溶酶体积累也通过溶酶体裂解器（MCF-7，72h 20µM；标尺50µM。f中，在电子显微镜上也可以观察到溶酶体转化缺陷（n=两个独立实验的3个生物独立样本，结果相似）。箭头表示溶酶体。CQ=氯喹；Nu=细胞核。比例尺1uM。g–h，饥饿与REV-ERBs激动剂SR9009治疗协同作用（MCF-7 48h，20µM；A375，3天，20μM）。i–j，如qRT-PCR所示，饥饿对REV-ERBs的表达没有影响；Mann-Whitney双尾检验P（P）=ns；k–l，ULK3、ULK2和LKB1的过度表达会损害SR9011诱导的凋亡（MCF-7、A375，6天20µM）；米，WST-1活性测定显示ULK2过度表达细胞的凋亡消失；n=生物复制，n=12（大肠杆菌模拟，ULK2模拟，ULK 2 SR9011），n=27（大肠杆菌SR9011，A375），6天20µM；Mann–Whitney测试单尾E.V.Mock vs E.V.011****P（P）< 0.0001; ULK2模型与ULK2 011*P（P）=0.0225）。n.（名词）。qRT-PCR显示ULK3过度表达（单尾Student t检验**P（P）=0.0031);o–p免疫荧光分析证实LKB1和ULK2过度表达。i–j，nn=3个生物独立样本。标尺50µm。E.V.=空矢量；CQ=氯喹。BF=亮场。Ns=不显著。除另有规定外，所有小组均进行了三项具有类似结果的生物独立实验。所有数据均绘制为平均值±标准偏差。
扩展数据图7
扩展数据图7。核心自噬基因是REV-ERBs的新靶点
a、，对可用ChIP-seq数据的分析表明，在ULK3、ULK1、BECN1和ATG7中存在REV-ERBs峰值(P（P）<1e-05，由MACS使用泊松分布计算，FDR≤0.05）；b–e，使用HOMER对REV-ERBs结合基序进行的分析表明，在Ulk3、Ulk1、Beclin1和Atg7基因中存在REV-ERB结合位点；f–i，REV-ERBs激动剂治疗导致自噬中枢调节器下调（MCF-7 72h 20µM；单向方差分析****P（P）<0.0001);j个自噬基因在REV-ERBs shRNA（A375，n=6个生物独立样本，Mann-Whitney测试单尾ULK3）上上调**P（P）=0.0011; ATG7和BECN1**P（P）=0.0011，ULK1**P（P）=0.0043).k、，A375 shREV-ERBs细胞中SR9009和SR9011对自噬基因的抑制被消除；shCTRL+/-SR9009-SR9011单向方差分析ULK1*P（P）=0.0162，ATG7**P（P）=0.0036; shREV-ERBs单向方差分析ULK1和ATG7P（P）=纳秒。f–I，kn=3个生物独立样本。所有数据绘制为平均值±s.e.m.shREVs=shREV ERBα/β。
扩展数据图8
扩展数据图8。REV-ERBs调节自噬核心基因并阻断缓慢增殖的肿瘤干细胞中的自噬
a–b，免疫印迹分析显示，经REV-ERBs激动剂（MCF-7 72h 20µM）治疗后，ULK1、ATG7、ULK3和Beclin1蛋白水平降低。c–e，REV-ERBs shRNA导致自噬调节因子的蛋白质水平增加（A375）。f中，在shREV-ERBs细胞上，ATG7的SR9009和SR9011减少被废除。克，WST-1活性测定表明，REV-ERB激动剂SR9009和SR9011治疗对患者源性胶质母细胞瘤干细胞具有特异性细胞毒性；平均值±标准偏差，5天，单因素方差分析；n=生物复制GSC 272 n=4（模拟，SR9009），n=6（SR9011）***P（P）=0.0002; GSC 6.27 n=5（模拟），n=10（SR9009）**P（P）=0.003; GSC 8.11 n=8（模拟），n=5（SR9009），n=7（SR9011）****P（P）<0.0001; GSC 7.11 n=9（模拟，SR9009），n=7（SR9011）****P（P）<0.0001.b–e类免疫印迹分析显示p62在患者源性胶质母细胞瘤干细胞中积聚（一项独立实验）。f中，Mts分析表明，GSC 6.27、7.11和272的特点是增殖速度较慢（n=4个生物独立样本，4个实验，平均值±标准差）。除另有规定外，所有小组均进行了三项具有类似结果的生物独立实验。凝胶源数据见补充图1。
扩展数据图9
扩展数据图9。REV-ERBs激动剂不影响正常增殖和静止细胞OIS的活性
a、，RAS免疫荧光分析证实RAS在OIS细胞中过度表达。b、，SA-β-Gal分析显示衰老诱导（n=3个生物独立样本Student’s t检验单尾****P（P）<0.0001).c、，细胞周期抑制剂p15的诱导墨水4b，第16页INK4a公司通过qRT-PCR分析；n=5个独立的生物样品；Mann–Whitney检验单尾p15墨水4b**P（P）=0.004，第16页INK4a公司**P（P）=0.0079.d–e，REV-ERBs激动剂不诱导增殖和静止的正常二倍体成纤维细胞BJ凋亡(d–g)如增殖试验所示(日期：，7天，20µM）和裂解Caspase 3的免疫荧光(e–f，7天20µM，单因素方差分析；n=生物独立样本，n=7（模拟）n=5（SR9009，SR9011）P（P）=ns。在额外的正常二倍体细胞系WI38中，细胞活力也不受影响(克，10天20µM）。h–I型SR9009和SR9011抑制OIS细胞中的自噬，表现为大量溶酶体（溶酶体裂解器）积聚和LC3点缺失（3天20µM）。所有比例尺50µm。中的数据a–i是三个具有类似结果的独立实验的代表，除非另有规定。所有数据均绘制为平均值±标准偏差。
扩展数据图10
扩展数据图10。SR9009抑制肿瘤生长并提高胶质母细胞瘤患者异种移植物的生存率
一通过免疫印迹分析，SR9009治疗NRAS痣后，自噬基因的蛋白质水平降低（n=4只小鼠，一个实验）。b、，TUNEL分析显示，经SR9009治疗后，正常皮肤无凋亡诱导（n=4只小鼠，一次实验，12天SR9009 20µM）。比例尺10µm。（BF=亮场）c、，TUNEL分析显示，经SR9009治疗（6天，200mg/kg b.i.d.，n=5只小鼠，一次实验）后，正常脑组织中没有凋亡诱导。d日根据体重变化%的测量结果显示，服用SR9009（100mg/kg b.i.d）的耐受性优于服用TMZ（82.5 mg/kg q.d，持续5天）。Mann–Whitney单尾试验（第2天、第4天P（P）=ns；第6,8,10天*P（P）=0.0411，平均值±s.e.m，SR9009 n=5，TMZ n=6只小鼠。Ns=不显著。e、，胶质瘤细胞株A172对SR9009和SR9011处理敏感（6天20µM，三个具有类似结果的生物学独立实验）。f中，对Brennan等人（Cell 2013）提出的TCGA数据的分析表明，缺乏影响REV-ERBα（NR1D1）和REV-ERPβ（NR1D2）的遗传改变。此外，基因表达分析表明，没有REV-ERB下调的病例，只有一小部分上调。n=574个生物独立样本。NR1D1：上调1.56%；纯合子缺失（Hom Del）0.17%；未改变98.27%。NR1D2：上调4.54%；未改变95.46%。克,体内SR9009治疗导致ATG7蛋白水平降低（6天，200mg/kg体重，一次实验，n=5只小鼠）。h时，SR9009治疗损伤体内胶质母细胞瘤患者来源异种移植物的生长（6天，200mg/kg b.i.d，n=5只小鼠）。我，肿瘤大小的量化体内荧光素酶分析（平均值±s.e.m n=10只小鼠，Mann-Whitney试验单尾**P（P）=0.0057）。j中，SR9009提高了携带胶质母细胞瘤患者来源异种移植物的小鼠的存活率。SR9009 200mg/kg，赋形剂n=11，SR9009 n=11，TMZ（82.5 mg/kg q.d.，持续5天）n=11只小鼠；进行了双尾对数-秩分析。凝胶源数据见补充图1。
图1
图1。SR9009在不同致癌信号驱动的癌细胞系中选择性致死
a、，SR9009治疗对癌细胞具有特异性细胞毒性（72小时，单向方差分析，n=生物复制，星形胶质细胞（n=12个模拟），（12 2.5µM），（12.5µM，P（P）=ns，星形细胞瘤（n=8个模拟），（n=9 2.5µM），（n=10 5µM*P（P）=0.037，BTIC（n=10模拟），（n=9 2.5µM）****P（P）<0.0001.b、，SR9009治疗会损害BJ-ELR的活性，但不会损害BJ细胞的活性（20µM，7天）；c（c）BJ和BJ-ELR中REV-ERBs的表达水平；（qRT-PCR n=3个生物独立样本，双尾Mann-Whitney检验P（P）=ns）。日期：，Jurkat细胞受到SR9009的影响（n=12个生物复制品72h 20µM，Mann-Whitney试验，单尾****P（P）< 0.0001).e–f，半胱天冬酶3/TUNEL裂解免疫染色（72h，20uM）；中的量化（f）; n=5（模拟）n=6（SR9009）个生物独立样本，Mann-Whitney试验，单尾裂解Caspase 3**P（P）=0.0022; 隧道**P（P）=0.0022.克，MCF-7存活率受SR9009影响（n=12模拟，n=8 SR9009生物复制品72h 20µM，Mann-Whitney试验单尾****P（P）<0.0001).h–i，裂解半胱天冬酶3/TUNEL免疫染色（72h，20uM）。中的量化我（n=5个生物独立样本Mann–Whitney测试单尾、裂解Caspase 3**P（P）=0.004; 隧道**P（P）=0.004).j个HCT116的存活率受SR9009的影响（n=8个生物复制品，WST-1试验，72小时，Mann-Whitney试验，单尾****P（P）< 0.0001.k–l，裂解Caspase 3/TUNEL染色显示诱导凋亡（72h，20µM）；面板上的量化我; n=8（模拟）n=5（SR9009）个生物独立样本，Mann-Whitney试验单尾裂解半胱氨酸蛋白酶3***P（P）=0.0008; TUNEL分析**P（P）=0.0021。米-米延长SR9009治疗可根除癌细胞（7天，20µM），但不影响REV-ERBα/βshRNA表达细胞；第页、REV-ERBα和REV-ERPβqRT-PCR；n=4个生物独立样本；Mann–Whitney单尾检验*P（P）=0.0286. NS=不显著。a.u=任意单位。标尺50µm。所有小组三个生物独立实验，平均值±标准误差c（c）（平均值±标准差）。
图2
图2。REV-ERBs激动剂SR9009抑制自噬
a–b，SR9009治疗减少自噬体的数量，如LC3B的免疫荧光所示，（n=生物独立样本MCF7（n=6 mock），（n=5 SR9009）和T47D（n=5 mock）（n=4 SR9009，）Mann-Whitney试验单尾MCF7 20µM 24h*P（P）=0.0152，T47D 20µM 48小时**P（P）=0.0079;c–d码免疫荧光显示SR9009诱导p62积聚；n=生物独立样本MCF7（n=3个模拟），（n=8个SR9009）和T47D（n=5个模拟）**P（P）=0.0061; 48小时T47D**P（P）=0.0079;e、，p62（20µM 48h，A375）的免疫印迹证实了自噬的抑制作用；f–g，p62免疫荧光、裂解Caspase 3和TUNEL分析显示，抑制自噬先于诱导凋亡；n=生物独立样本，Mann-Whitney单尾试验，A375 20µM Cl.Casp。348小时（n=3）*P（P）=0.0179; Cl.案例。372小时（n=7）****P（P）<0.0001; 隧道48小时（n=3）*P（P）=0.0179; 隧道72h（n=7）****P（P）<0.0001; 第62页48小时****P（P）<0.0001（n=8）；p62 72小时（n=9）****P（P）<0.0001;h时，饥饿显著加速REV-ERB激动剂SR9009的细胞毒性作用（A375，3天20µM，饥饿时间24小时；我，ULK3的过表达损害SR9009对细胞凋亡的诱导（MCF-7，6天20µM）；j中，ULK2和LKB1的过度表达会损害SR9009诱导的凋亡（A375，6天20µM）。k、，WST-1活性测定显示ULK2和LKB1过度表达细胞的凋亡消失（n=生物复制品A375，6天20µM；Mann-Whitney试验单尾n=12，E.V.Mock vs E.V.09****P（P）<0.0001; ULK2模拟（n=12）vs ULK2 09（n=10）****P（P）<0.0001; n=12电动汽车模拟与电动汽车09****P（P）<0.0001和LKB1模拟与LKB1 09**P（P）=0.0028. 所有比例尺50µm。所有小组进行了三项生物独立实验，结果相似。所有数据均绘制为平均值±标准偏差。凝胶源数据见补充图1。
图3
图3。SR9009和SR9011治疗引起OIS细胞的凋亡反应并诱导自噬抑制
a、，增殖试验表明，REV-ERBs激动剂损害OIS细胞的生存能力（6天，20µM）。b–c，裂解Caspase 3的免疫荧光分析和TUNEL分析显示OIS中特异性的凋亡诱导（n=生物独立样本，n=7个模拟，n=9个SR9009，n=14个SR9011，72h，20µM；单向方差分析，Cl.Casp 3****P（P）<0.0001，隧道****P（P）<0.0001，平均值±标准偏差）。d–e，经REV-ERBs激动剂治疗后，p62累积，通过p62的免疫荧光测定（n=生物独立样本，n=11个模拟，n=10个SR9009，n=8个SR9011单向方差分析，72小时-天，20µM****P（P）<0.0001; 平均值±标准误差）。f、 ULK3过表达保护OIS细胞免受REV-ERBs激动剂诱导的细胞毒性（6天20µM，平均值±标准偏差）。所有比例尺50µm。所有小组进行了三项生物独立实验，结果相似。
图4
图4。SR9009损害NRAS驱动的痣、胶质母细胞瘤的生存能力并延长生存期
a–b，SR9009治疗诱导细胞凋亡体内通过免疫荧光分析测定的NRAS痣（两个具有类似结果的独立实验的代表性图像，Trp2黑素细胞标记物和TUNEL，Mann-Whitney单尾试验**P（P）=0.0058，n=生物独立样本，n=7个模拟，n=6个SR9009，12天SR9009 20µM，四只小鼠）。比例尺10µm。c、，NRAS naevi n=4小鼠治疗后自噬基因下调；Mann–Whitney单尾ULK1*P（P）=0.0249，ATG7**P（P）=0.007.日期：，REV-ERBβ表达与脑癌患者的生存率相关（n=生物独立样本，黄线中间表达n=224，绿线下调n=119 NIH Rembrandt数据库；对数-秩双侧****P（P）<0.0001；）。e–f，SR9009治疗损害体内胶质母细胞瘤的生长（一个实验的代表性图像n=5只小鼠，6天，200mg/kg b.i.d.；Mann-Whitney试验单尾**P（P）=0.004).g–h，TUNEL分析显示SR9009诱导胶质母细胞瘤细胞凋亡；肿瘤细胞为GFP阳性（一项独立实验的代表性图像，6天200mg/kg b.i.d.，Mann-Whitney单尾试验*P（P）=0.02; n=生物独立样本，n=7个模拟，n=8个SR9009，5只小鼠）。我， 体内SR9009治疗导致主要自噬基因下调（6天，200mg/kg b.i.d.，n=5只小鼠，Mann-Whitney单尾试验*P=0.0476）。j中，SR9009提高了受胶质母细胞瘤影响的小鼠的生存率。SR9009 100mg/kg，载具n=8只SR9009 n=9只小鼠；对数双尾***P（P）=0.0009.k、，说明REV-ERB激动剂如何选择性影响OIS和癌细胞的方案。所有面板的平均值为±s.e.m。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

中的注释

  • REV-ERB激动剂阻断癌细胞自噬。
    [未列出作者] [未列出作者] 癌症迪斯科。2018年3月；8(3):261. doi:10.1158/2159-8290.CD-RW2018-011。Epub 2018年1月19日。 癌症迪斯科。2018 PMID：29352049
  • 复杂生物系统中癌基因诱导的衰老和肿瘤控制。
    Galluzzi L，Vitale I。 Galluzzi L等人。 细胞死亡不同。2018年6月；25(6):1005-1006. doi:10.1038/s41418-018-0102-y.Epub 2018年4月17日。 细胞死亡不同。2018 PMID：29666473 免费PMC文章。 没有可用的摘要。

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Fu L，Lee CC。生物钟：起搏器和肿瘤抑制物。自然评论。癌症。2003;3:350–361.-公共医学
    1. Schiermann C，Kunisaki Y，Frenette PS。免疫系统的昼夜节律控制。自然评论。免疫学。2013;13:190–198. doi:10.1038/nri3386。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Hanahan D，Weinberg RA。癌症的标志：下一代。单元格。2011;144:646–674.-公共医学
    1. Straif K等人。轮班工作、绘画和消防的致癌性。《柳叶刀》。肿瘤学。2007;8:1065–1066.-公共医学
    1. Cho H等人。REV-ERB-alpha和REV-ER-beta对昼夜行为和代谢的调节。自然。2012;485:123–127. doi:nature11048[pii]10.1038/nature11048。-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语