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.2017年9月22日；8(60):101345-101361.
doi:10.18632/oncotarget.21167。 eCollection 2017年11月24日。

MicroRNA-182通过靶向HOXA9下调人骨肉瘤细胞中Wnt/β-catenin信号传导，抑制增殖并促进凋亡

Zi-Feng Zhang先生 1, 王永健 1, 邵华凡 1, Shi-Xin Du先生 2, 李学东 2, 吴冬梅 1, 陆军 1, 郑元林 1
附属公司

MicroRNA-182通过靶向HOXA9下调人骨肉瘤细胞中Wnt/β-catenin信号传导，抑制增殖并促进凋亡

Zi-Feng Zhang先生等。 肿瘤靶点. .

缩回

摘要

我们研究了microRNA（miR）-182促进人骨肉瘤（OS）细胞凋亡和抑制增殖的机制。比较人类OS和正常细胞中miR-182和同源框A9（HOXA9）的表达水平。受试者分为OS组和正常组。我们分析了miR-182和Homeobox A9（HOXA9）的靶向关系。然后，将细胞分为空白组、阴性对照组、miR-182模拟物组、miR182抑制剂组、siRNA-HOXA9组或和miRNA-182抑制剂+siRNA-HOXA9组。采用CCK-8、流式细胞仪和伤口愈合试验检测细胞功能。此外，我们分析了异种移植小鼠模型中OS肿瘤的生长情况。双荧光素酶报告分析表明miR-182直接靶向HOXA9。与对照组相比，经miR-182模拟物或siRNA-HOXA9处理的骨肉瘤细胞中，反转录定量PCR和western blotting显示miR-182、WIF-1、BIM和Bax的表达增加，HOXA9、Wnt、β-catenin、Survivin、Cyclin D1、c-Myc、Mcl-1、Bcl-xL和蜗牛的表达减少。当使用miR-182模拟物或siRNA-HOXA9治疗时，骨肉瘤细胞也表现出细胞增殖、迁移和肿瘤生长减少，凋亡增加。相应地，在异种移植小鼠模型中，当细胞接受miR-182抑制剂治疗时，骨肉瘤的体积和生长增加，而接受miR-82模拟物或siRNA-HOXA9治疗时，肿瘤体积和生长减少。这些结果表明，miR-182通过抑制HOXA9的表达，下调Wnt/β-catenin信号传导，抑制细胞增殖，并促进骨肉瘤细胞凋亡。

关键词：同源盒A9；microRNA-182；骨肉瘤；wingless-type/β-catenin信号通路。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突作者声明不存在利益冲突。

数字

图1
图1。OS与正常组织HOXA9表达的免疫组化分析
(A类)正常组织；(B类)OS组织。*P（P）< 0.05.
图2
图2。与正常组织相比，OS中miR-182、WIF-1、BIM、Bax、HOXA9、Wnt、β-catenin、Survivin、Cyclin D1、c-Myc、Mcl-1、Bcl-xL和蜗牛表达的RT-qPCR分析
*P（P）< 0.05.
图3
图3。与正常组织相比，OS中WIF-1、BIM、Bax、HOXA9、Wnt、β-catenin、Survivin、Cyclin D1、c-Myc、Mcl-1、Bcl-xL和蜗牛表达的Western blot分析
(A类)直方图显示OS与正常组织相比WIF-1、BIM、Bax、HOXA9、Wnt、β-catenin、Survivin、Cyclin D1、c-Myc、Mcl-1、Bcl-xL和蜗牛的相对表达；(B类)OS与正常组织蛋白质表达的Western blot图像比较；*P（P）< 0.05.
图4
图4。MiR-182在SOSP-9607、U-2OS和MG63细胞中的表达
*P（P）与SOSP-9607细胞相比，<0.05；#P（P）与MG63细胞相比，<0.05。
图5
图5。HOXA9是miR-182的靶点
(A类)miR-182的预测结合位点HOXA9型3′UTR；(B类)NC和miR-182模拟组荧光素酶活性的比较；*P（P）与NC组相比，<0.05。
图6
图6。转染后miR-182、WIF-1、β-catenin、BIM、Bax、HOXA9、Survivin、Cyclin D1、c-Myc、Mcl-1、Bcl-xL和蜗牛表达的RT-qPCR分析
(A类)显示miR-182相对表达的直方图，HOXA9型β-catenin和无线网络-1在6组中；(B类)直方图显示Survivin公司,c-Myc公司,细胞周期蛋白D1，以及蜗牛在6组中；(C类)直方图显示比姆,Mcl-1型,Bcl-xL公司，以及Bax公司在六组中。*P（P）与NC组相比，<0.05。
图7
图7。转染后各组WIF-1、BIM、Bax、HOXA9、β-catenin、Survivin、Cyclin D1、c-Myc、Mcl-1、Bcl-xL和蜗牛表达的Western blot分析
(A类)评估所有蛋白质的Western blot图像；(B类)直方图显示了六组中HOXA9、WIF-1和β-连环蛋白的相对表达；(C类)显示六组中c-Myc、Survivin、Snail和Cyclin D1相对表达的直方图；(D类)显示六组BIM、Mcl-1、Bcl-xL和Bax相对表达的直方图；*P（P）与NC组相比，<0.05。
图8
图8。CCK-8分析六组细胞增殖的差异
图9
图9。PI染色分析六组细胞周期进展的差异
(A类)显示六组hFOB细胞细胞周期期差异的图像；(B类)六组中处于指定细胞周期阶段的hFOB细胞百分比；(C类)显示六组U-2OS细胞细胞周期期差异的图像；(D类)六组中处于所示细胞周期阶段的U-2OS细胞百分比；*P（P）与空白组和NC组相比，<0.05。
图10
图10。Annexin-V/PI染色分析OS细胞凋亡
(A类)hFOB细胞凋亡分析；(B类)六组hFOB细胞凋亡百分比的差异；(C类)U-2OS细胞凋亡分析；(D类)六组间凋亡U-2OS细胞百分比的差异；*P（P）与空白组和NC组相比，<0.05。
图11
图11。用伤口愈合试验分析细胞迁移
(A类)六组hFOB和U-2OS细胞迁移的图像比较；(B类)六组之间hFOB和U-2OS细胞伤口闭合的比较；伤口闭合：（距离0小时–距离48小时)/距离0小时;*P（P）与空白组和NC组相比，<0.05。
图12
图12。六组异种移植瘤大小和生长率的比较
(A类)细胞生长；(B类)肿瘤大小；(C类)六组HOXA9、WIF-1和β-catenin蛋白表达的Western blot分析；(D类)显示六个实验组裸鼠肿瘤组织中HOXA9、WIF-1和β-catenin相对表达的直方图；(E类)显示六组小鼠肿瘤组织中c-Myc、Survivin、Snail和Cyclin D1相对表达的直方图；(F类)显示六组小鼠肿瘤组织中BIM、Mcl-1、Bcl-xL和Bax相对表达的直方图；*P（P）与空白组和NC组相比，<0.05。
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