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.2017年12月18:6:e30498。
doi:10.7554/eLife.30498。

LRP1调节少突胶质细胞中过氧化物酶体的生物生成和胆固醇的稳态，是中枢神经系统髓鞘发育和修复所必需的

林景平 1, 叶夫根尼娅·米罗诺娃 2, 彼得·什拉杰 三, 罗曼·吉格尔 1 2 4 5
附属公司

LRP1调节少突胶质细胞中过氧化物酶体的生物生成和胆固醇的稳态，是中枢神经系统髓鞘发育和修复所必需的

林景平等。 埃利夫. .

摘要

低密度脂蛋白受体相关蛋白-1（LRP1）是一种大的内吞和信号分子，广泛表达于神经元和胶质细胞。在成年小鼠中，全局诱导(Lrp1号机组flox/flox公司；冷却器CAG)或少突胶质细胞（OL）-谱系特异性消融(Lrp1号机组flox/flox公司；Pdgfra核心)第页，共页Lrp1号机组减弱受损白质的修复。在少突胶质前体细胞（OPC）中，Lrp1号机组是胆固醇稳态和分化为成熟OL所必需的。Lrp1号机组-OPC/OLs缺陷显示固醇调节元件结合蛋白-2显著增加，但无法维持正常胆固醇水平，表明全球代谢缺陷增多。机械研究表明，过氧化物酶体生物发生因子-2减少，OL过程中过氧化物酶减少。治疗Lrp1号机组-/-OPC与胆固醇或过氧化物酶体增殖物激活受体-γ与吡格列酮单独激活不足以促进分化；然而，当胆固醇和吡格列酮联合使用时，可增强OPC向成熟OL的分化。总之，我们的研究揭示了Lrp1号机组白质发育和修复过程中过氧化物酶体生物生成、脂质稳态和OPC分化。

关键词：中枢神经系统髓鞘修复；胆固醇平衡；LRP1；少突胶质细胞分化；过氧化物酶体生物发生；小鼠；神经科学。

PubMed免责声明

利益冲突声明

没有宣布竞争利益。

数字

图1。
图1.在成年小鼠中Lrp1号机组减弱白质修复。
(一)时间线（以周为单位），指示何时Lrp1号机组诱导消融(Lrp1号机组flox/flox公司；冷却器CAGTM公司,Lrp1号机组注射iKO）、溶血磷脂（LPC），并处死动物。(b条)漫画显示一侧胼胝体注射LPC，对侧注射PBS。冠状脑切片（6个系列，每个间隔120µm）探测兆比特通过就地杂交（ISH）。确定包含病变中心的脑切片并进行量化。(c（c）)LPC注射（21DPI）后21天通过CC进行冠状脑切片。病变区域的外缘（病变外面的)以高架线为界兆比特信号（白色虚线）。病变的无髓区由隆起的内缘界定兆比特信号（病变在里面)并用一条实心黄线圈定。比例尺=200µm。(d日)量化初始病变大小（病变外面的)英寸Lrp1号机组对照组（n=8）和iKO（n=6）小鼠。(e（电子）)白质修复的量化Lrp1号机组对照组（n=8）和iKO（n=6）小鼠。修复范围计算为（病变）的百分位数外面的-损伤整数)/（病变外面的)x 100。(（f）)时间线（以周为单位）显示OL-lineage特定的时间Lrp1号机组烧蚀，烧蚀(Lrp1号机组flox/flox公司；Pdgfra核心TM公司,Lrp1号机组iKO公司OL公司)诱导、注射LPC并处死动物。(克)LPC注射后21天通过CC的冠状脑切片Lrp1号机组控制和iKOOL公司老鼠。初始病变区域由白色虚线划分。一条实心黄线表示无髓区域。比例尺=200µm。(小时)中初始病变大小的量化Lrp1号机组控制（n=4）和iKOOL公司（n=4）只小鼠。(我)白质修复的量化Lrp1号机组控制（n=4）和iKOOL公司（n=4）只小鼠。结果显示为平均值±SEM，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，Student’st吨-测试。有关详细的统计报告，请参见图1—源数据1。
图1——图补充1。
图1-图补充1.生成Lrp1号机组全球iKO小鼠。
(一)Lrp1号机组野生型（wt）和条件性，LoxP侧翼（floxed），等位基因。显示了用于基因分型的PCR引物的位置、新霉素盒（Neo）和LoxP位点。(b条)对于全球可诱导基因消融冷却器CAGTM公司使用小鼠系，其中Cre重组酶与三苯氧胺（TM）反应性雌激素受体（Ers1）融合，并在普遍存在的鸡β-actin-CMV杂交（CAG）启动子的控制下表达。(c（c）)TM给药后，重组可导致仅Neo缺失或Neo和外显子1缺失。(d日)脑基因组DNA的PCR基因分型。的PCR产物分析Lrp1号机组+/+有（+）或无（-）cre等位基因的小鼠；Lrp1号机组弗洛克斯/+小鼠±Cre等位基因和±TM治疗；Lrp1号机组flox/flox公司小鼠±Cre等位基因和±TM治疗。F1/R1引物对扩增来自wt的约300bp的PCR产物Lrp1号机组如果Neo盒被删除，则为等位基因和约400 bp PCR产物。F2/R2引物对从wt扩增291 bp PCR产物Lrp1号机组等位基因和350 bp PCR产物Lrp1号机组flox等位基因。如果外显子1缺失，则F1/R2引物对扩增约500 bp PCR产物。IL-2pF/IL-2pR引物对扩增324 bp片段，作为PCR内部质量控制。如果Cre公司存在。(e（电子）)制备的全脑裂解物的免疫印迹Lrp1号机组flox/flox公司；冷却器CAGTM公司TM（+）或载体（-）治疗后31和52天。用抗LRP1β、抗GFAP、抗β-肌动蛋白、抗β-III微管蛋白和抗GAPDH检测代表性斑点。(（f）)成人冠状切片Lrp1号机组对照和iKO小鼠在i.p.TM给药后31天。切片用FM绿色染色或探测百万磅mRNA原位杂交。比例尺=1 mm。
图1—图补充2。
图1补充图2。LPC注入胼胝体导致局灶性白质损伤和髓磷脂相关基因产物上调。
(一)成人冠状前脑切片Lrp1号机组对照组（幼年）小鼠和接受立体定向注射PBS到胼胝体的小鼠。在注射后10天（10 DPI）和PBS的21 DPI时，收集大脑，连续切片，并用FM Green、抗GFAP和Hoechst染料33342染色。白色虚线划出胼胝体。注射部位很容易通过GFAP免疫反应性升高来确定。(b条)冠状前脑切片Lrp1号机组对照组和iKO小鼠LPC的10 DPI和21 DPI用FM Green、抗GFAP和Hoechst染料33342染色。白色虚线划出胼胝体。白质病变是通过没有FM绿色标记来确定的。比例尺=200µm。(c（c）)成年大脑胼胝体注射PBS和LPC后的连续冠状切片，探讨Pdgfra公司,第1页,美格、和兆比特mRNA表达以确定病变区域并检查OL谱系中的基因表达变化。注射PBS的部位用箭头标记，LPC注射部位用箭头标识。病变边界显示为第1页,美格和兆比特比例尺=200µm。(d日)成人连续脑切片Lrp1号机组对照小鼠注射21DPI的LPC。通过病变区域（间隔120µm）的连续切片进行探测磁性，Plp1、和Pdgfra公司，mRNA表达。比例尺=200µm。(e（电子）)通过CC的冠状脑切片，包括Lrp1号机组控制和Lrp1号机组iKO小鼠在21 DPI时注射LPC。对连续部分进行了探测Pdgfra公司,第1页、和美格mRNA表达。比例尺=200µm。
图2。
图2。。Lrp1号机组OL线消融导致髓鞘减少和淋巴结缺损。
(一)P10、P21和P56对照组和Lrp1号机组flox/flox公司；Olig2-Cre公司条件敲除小鼠(Lrp1号机组cKO公司OL公司). 比例尺=1µm。(b条)视神经中有髓轴突的定量Lrp1号机组控制和cKOOL公司P10、P21和P56的小鼠（每三个时间点每个基因型4只小鼠）。(c（c）)平均g比率Lrp1号机组控制和cKOOL公司在三个时间点中，每个基因型四只小鼠的视神经纤维。P10时，对照组n=488个有髓轴突，cKO组n=261个OL公司; 在P21，n=1015用于控制，n=997用于cKOOL公司; 在P56，n=1481用于控制，n=1020用于cKOOL公司老鼠。(d日)兰维尔P21视神经节Lrp1号机组控制和cKOOL公司用抗PanNaCh（绿色，node）和抗Caspr（红色，paranide）染色标记小鼠。比例尺=1µm。(e（电子）)检测到的节点缺陷包括延长节点、半节点和缺失节点（Na+通道缺失）。(（f）)按轴突直径分类的代表性淋巴结染色。(克)P21中节点密度的量化Lrp1号机组控制（n=6）和cKOOL公司（n=5）视神经。(小时)Ranvier异常节点的量化Lrp1号机组控制（n=6）和cKOOL公司（n=5）视神经。(我)与大（>1μm）、中（0.5-1μm）和小口径光纤（<0.5μm）相关的节点的量化Lrp1号机组控制（n=6）和cKOOL公司（n=5）视神经。结果显示为平均值±SEM，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，Student’st吨-测试。有关详细的统计报告，请参见图2源数据1。
图2——图补充1。
图2——图补遗1。。Lrp1号机组OL谱系的消融导致中枢神经系统髓鞘减退。
(一)Lrp1号机组flox/flox公司小鼠与Olig2-Cre公司条件性消融小鼠Lrp1号机组在OL谱系中（cKOOL公司). (b条)确保Olig2-Cre公司等位基因不会导致大脑髓磷脂相关蛋白或LRP1、P21的表达改变Lrp1号机组弗洛克斯/+和Lrp1号机组弗洛克斯/+；Olig2-Cre公司对小鼠进行裂解并进行SDS-PAGE。显示了用抗LRP1β、抗MAG、抗CNP、抗MBP和抗β-肌动蛋白探针探测的代表性Western blot。(c（c）)蛋白质水平的定量检测Lrp1号机组弗洛克斯/+（n=3）和Lrp1号机组弗洛克斯/+；Olig2-Cre公司（n=3）脑裂解物显示在是否存在Olig2-Cre公司等位基因。(d日)由P10、P21和P56制备的全脑裂解物的免疫印迹Lrp1号机组控制（Ctrl）和cKOOL公司老鼠。用抗LRP1β和抗β-肌动蛋白探针检测代表性斑点。(e（电子）)有髓视神经轴突的平均g比率Lrp1号机组控制和cKOOL公司小鼠，在三个时间点中，每个基因型4只小鼠。(f、 我和我)图表显示了视神经中P10、P21和P56处有髓轴突的百分比与轴突口径的关系Lrp1号机组对照（每个时间点n=4）和cKOOL公司（每个时间点4只）小鼠。Axon卡尺被分为9组，间隔0.2μm，范围0.1至1.7μm。(g、 j和m)散点图显示了视神经P10、P21和P56处单个纤维的g比率分布Lrp1号机组控制和cKOOL公司老鼠。P10，n=488轴突Lrp1号机组对照小鼠和来自cKO的n=261个轴突OL公司老鼠；P21，n=1015轴突Lrp1号机组对照组小鼠和来自4 cKO的n=997轴突OL公司老鼠；P56，n=1481轴突Lrp1号机组对照组小鼠和n=1020个来自4 cKO的轴突OL公司老鼠。(h、 k和n)P10、P21和P56视神经轴突口径分布的形态计量学评估Lrp1号机组控制（n=4）和cKOOL公司（n=4）只小鼠。通过电子显微镜图像测量轴突直径。(o个)P56全脑裂解物的免疫印迹Lrp1号机组控制（Ctrl）和cKOOL公司老鼠。用抗LRP1β、抗CNP、抗MAG、抗MBP、抗β-III微管蛋白、抗GFAP和抗β-肌动蛋白探测代表性斑点。(第页)蛋白质水平的定量检测Lrp1号机组控制（n=3）和cKOOL公司（n=3）脑溶解。(q个)P21视神经横截面和纵截面的电镜图像Lrp1号机组控制和cKOOL公司老鼠。直径大于1μm的轴被涂成浅蓝色。比例尺=1μm。(第页)P21视神经轴突密度的定量研究Lrp1号机组控制（n=4）和cKOOL公司（n=4）只小鼠。(秒)小于0.5µm、介于0.5–1.0µm和大于1µm的视神经轴突的量化Lrp1号机组控制（n=4）和cKOOL公司（n=4）只小鼠。结果显示为平均值±SEM，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，Student’st吨-测试。有关详细的统计报告，请参见图2源数据1。
图2——图补充2。
图2-图补充2..损失Lrp1号机组OL谱系导致视神经传导缺陷。
(一)描述为复合动作电位（CAP）记录准备的视神经方向的方案。显示了刺激电极、记录电极和伪影消除电极的位置。(b条)左：P21视神经的典型原始CAP痕迹。右：对于每个记录，记录道都拟合了四个高斯曲线，分别代表峰1（红色）、峰2（绿色）、峰3（蓝色）、峰4（青色）和四个峰的总和（洋红）。(c（c）)年的峰值种群分布Lrp1号机组控制和cKOOL公司老鼠。(d日)峰值1、2、3和4的振幅（mV）量化Lrp1号机组控制和cKOOL公司视神经。(e（电子）)峰1、2、3和4的传导速度（m/sec）的量化Lrp1号机组控制和cKOOL公司视神经。(（f）)重构平均峰值1-4振幅作为时间的函数。Lrp1号机组对照组（n=21条神经/14只小鼠）和cKOOL公司（n=9条神经/7只小鼠）。结果显示为平均值±SEM，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，Student’st吨-测试。有关详细的统计报告，请参见图2源数据1。
图3。
图3.损失Lrp1号机组OL-lineage减弱OL分化。
(一)的横截面Lrp1号机组控制和cKOOL公司用抗PDGFRα（OPC标记）、抗Olig2（pan-OL标记）、CC1（成熟OL标记物）和Hoechst染料33342染色的视神经。比例尺=100µm。(b条)横截面和纵截面Lrp1号机组控制和cKOOL公司探测视神经Pdgfra公司,美格、和Plp公司mRNA表达。比例尺=100µm。(c（c）)每个神经横截面标记细胞的定量。对照组（n=8）和cKO中的抗PDGFRαOL公司（n＝6）只小鼠；对照组（n=11）和cKO中的抗Olig2和抗CC1抗体OL公司（n＝12）只小鼠。(d日)每个神经横截面标记细胞的定量。Pdgfra公司，控制（n=8）和cKOOL公司（n=6）只小鼠；美格，控制（n=11）和cKOOL公司（n＝11）只小鼠；Plp公司，控制（n=11）和cKOOL公司（n=10）只小鼠。(e（电子）)OPC分离和培养的工作流程，以及添加生长介质（GM）或分化介质（DM）并采集细胞时的时间表。(（f）)在DM中用抗NG2（前髓鞘标记）、抗CNP（分化OL标记）和Hoechst染料33342染色，3天后进行OPC/OL培养。比例尺=100µm。(克)从以下物质制备的OL裂解物的免疫印迹Lrp1号机组控制和cKOOL公司在DM中培养3天后，用抗LRP1β和抗β-肌动蛋白进行检测。(小时)NG2的量化+（n=3）和CNP+（n=3）个单元格Lrp1号机组控制和cKOOL公司文化。(我)控制和Lrp1号机组DM患者5天后OL培养不足，用抗MAG、抗PLP和抗MBP染色。比例尺=100µm。(j个)制备的OL裂解物的免疫印迹Lrp1号机组控制和cKOOL公司在DM中培养5天后，用抗LRP1β、抗CNP、抗MAG、抗PLP、抗MBP和抗β-肌动蛋白进行检测。(k个)MAG的量化+、PLP+和MBP+中的单元格Lrp1号机组控制（n=3）和cKOOL公司（n=3）培养基。(我)免疫印迹法检测OL裂解物中蛋白质水平的定量。抗-LRP1、CNP和PLP，每种情况n=3；抗MAG，每种情况n=4；抗MBP n=5每种条件。结果显示为平均值±SEM，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，Student’st吨-测试。有关详细的统计报告，请参见图3源数据1。
图3——图补充1。
图3-图补充1..损失Lrp1号机组不会改变视神经大小和OPC增殖。
(一)视神经直径的量化Lrp1号机组对照（n＝5）和cKO（n＝5）小鼠。(b条)确保Olig2-Cre公司等位基因不会导致从Lrp1号机组弗洛克斯/+或Lrp1号机组弗洛克斯/+；Olig2-Cre公司裂解幼崽、细胞并进行蛋白质印迹分析。OPC/OLs在分化培养基（DM）中培养5天。用SDS-PAGE分离细胞裂解产物，并用抗LRP1β、抗CNP、抗MAG、抗PLP和抗β-肌动蛋白探针进行蛋白印迹。每条车道上装载了等量的总蛋白质。(c（c）)通过免疫印迹法检测LRP1、MAG和PLP蛋白水平的定量Lrp1号机组弗洛克斯/+和Lrp1号机组弗洛克斯/+；Olig2-Cre公司OPC/OL培养裂解物（每个基因型3个）显示在是否存在Olig2-cre公司等位基因。(d日)时间轴（以天为单位），指示何时向细胞中添加生长介质（GM）以及何时收获细胞（H）以评估增殖。(e（电子）)使用抗Ki67（增殖标记）和Hoechst染料33342染色GM，1或2天后进行OPC/OL培养。比例尺=100µm。(（f）)OPC/OL培养物中细胞增殖的量化Lrp1号机组控制和cKOOL公司老鼠。Ki67的百分位数+/赫赫斯特+在第1天计算细胞数Lrp1号机组控制（n=5）和cKOOL公司（n=5）培养，第2天Lrp1号机组控制（n=4）和cKOOL公司（n=4）培养基。(克)制备的细胞裂解物的免疫印迹Lrp1号机组控制和cKOOL公司在分化培养基（DM）中培养3天后的OPC/OL培养物。用抗LRP1β、抗CNP、抗MAG、抗PLP和抗β-肌动蛋白探针检测印迹。(小时)制备的裂解物的免疫印迹Lrp1号机组控制和cKOOL公司在DM中培养3天后进行OPC/OL培养。用抗pAKT（S473）、抗AKT、抗pERK（1/2）、抗ERK（1/2）和抗GAPDH检测代表性印迹。(我)免疫印迹法检测蛋白质水平的定量Lrp1号机组控制和cKOOL公司细胞培养裂解物。每个基因型的抗-LRP1β（n=3）、抗MAG（n=3）、抗CNP（n=4）和抗PLP（n=4）。(j个)免疫印迹法检测蛋白质水平的定量Lrp1号机组控制和cKOOL公司细胞裂解物。pAKT/AKT，n=5Lrp1号机组控制和cKOOL公司文化；pERK/ERK，n=3用于Lrp1号机组控制和cKOOL公司文化。结果显示为平均值±SEM，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，Student’st吨-测试。有关详细的统计报告，请参见图3源数据1。
图4。
图4：缺乏Lrp1号机组.
(一)通过抗PDGFRα免疫淘金法从P8脑中分离OPC，并进行超声处理和胆固醇（Chol）测定。(b和c)游离胆汁的定量(b条)和总胆固醇（胆固醇和胆固醇酯）(c（c）)OPC与Lrp1号机组控制（n=5）和cKOOL公司（n=5）小白鼠幼崽。(d日)Lrp1号机组控制和cKOOL公司DM患者5天后OLs用filipin和抗MBP染色。比例尺=10µm。(e–g)OL尺寸的量化（单位：µm）2(e（电子）)，每个细胞的filipin和MBP标记强度(（f）)以及每µm的filipin和MBP染色强度2(克). 对于Lrp1号机组控制和cKOOL公司OLs，n=每组三只小鼠的29个细胞。(小时)显示何时添加含有（+）或不含有（-）Chol的生长培养基（GM）或分化培养基（DM）以及何时收获细胞的时间线（以天为单位）。(i和k)制备的OL裂解物的免疫印迹Lrp1号机组控制和cKOOL公司在DM中培养3天后，用抗LRP1β、抗SREBP2、抗β-肌动蛋白、抗PLP、抗MAG、抗CNP和抗GAPDH检测代表性印迹。(j、 l–n（l–n）)SREBP2的量化(j个)，磅/平方英寸(我)、MAG(米)和CNP(n个)英寸Lrp1号机组控制和cKOOL公司培养±浴用胆汁。独立免疫印迹的数量：抗PLP和MAG，n=3/例；抗SREBP2和抗CNP，每种情况n=4。(o个)制备的OL裂解物的免疫印迹Lrp1号机组控制和cKOOL公司在DM±浴中培养5天后，应用Chol。用抗LRP1β、抗PLP/DM20和抗β-肌动蛋白探针检测代表性印迹。(第页)PLP的量化（每种情况n=4）Lrp1号机组控制和cKOOL公司培养物±浴用胆汁(q个)在DM±浴中应用Chol 5天后对OLs进行免疫染色。初级OLs用抗MBP和Hoechst染料33342染色。比例尺=100µm。(第页)量化显示MBP的相对数量+中的单元格Lrp1号机组控制和cKOOL公司培养物（每种情况下n=3–5）。结果显示为平均值±SEM，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，双向方差分析，事后t吨-测试。有关详细的统计报告，请参见图4源数据1。
图4——图补充1。
图4——图补充1。。Lrp1号机组-有缺陷的OLs对他汀类药物敏感，但对甲羟戊酸盐不敏感。
(一)主要OPC通过抗PDGFRα免疫筛选从Lrp1号机组弗洛克斯/+和Lrp1号机组弗洛克斯/+；Olig2-Cre公司幼崽在分化培养基（DM中的D3）中培养3天。细胞被裂解并用抗SREBP2和抗β-肌动蛋白进行免疫印迹。(b条)细胞裂解物中SREBP2蛋白水平的定量Lrp1号机组弗洛克斯/+（n=4）和Lrp1号机组弗洛克斯/+；Olig2-Cre公司（n=4）培养物显示出可比水平。这表明Olig2-Cre公司等位基因不影响SREBP2水平。(c（c）)胆固醇生物合成途径和他汀类药物（辛伐他汀）的作用部位，其作用是抑制3-羟基-3-甲基-谷氨酸辅酶A还原酶（HMG-CoA），即甲羟戊酸途径的速率控制酶。(d日)以天为单位的时间线显示了向培养物中添加含有辛伐他汀或甲羟戊酸盐（M/S）的生长培养基（GM）和分化培养基（DM）的时间，以及采集细胞（H）进行免疫荧光标记的时间。(e（电子）)对照和Lrp1号机组-用载体或他汀类药物治疗糖尿病5天后OL培养不足。细胞培养物用抗MBP和Hoechst染料33342标记。比例尺=50µm。(（f）)MBP的量化+中的单元格Lrp1号机组用载体处理的对照培养物（n=4），Lrp1号机组用他汀类药物处理的对照培养物（n=3），Lrp1号机组cKO公司OL公司用载体处理的培养物（n=4），以及Lrp1号机组cKO公司OL公司用他汀类药物处理的培养物（n=3）。(克)对照和Lrp1号机组DM患者经赋形剂或甲羟戊酸治疗5天后OL培养不足。细胞培养物用抗MBP和Hoechst染料33342标记。比例尺=50µm。(小时)MBP的量化+中的单元格Lrp1号机组用载体处理的对照培养物（n=3），Lrp1号机组用甲羟戊酸处理的对照培养物（n=3），Lrp1号机组cKO公司OL公司培养物处理载体（n=3），以及Lrp1号机组cKO公司OL公司甲羟戊酸处理的培养物（n=3）。结果显示为平均值±SEM，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，双向方差分析，事后t吨-测试。有关详细的统计报告，请参见图4源数据1。
图5。
图5.在初级OL中，过氧化物酶体密度和分布受以下因素调节Lrp1号机组.
(一)主要OL制备自Lrp1号机组控制和cKOOL公司在DM中培养5天的OL幼犬用抗MBP和抗PMP70染色。比例尺=10µm。(b–d段)每个细胞PMP70标记强度的量化(b条)，PMP70+每个细胞的穿孔数(c（c）)和散点图，显示PMP70的数量+过氧化物酶体作为MBP细胞大小的函数+的OLLrp1号机组控制和Lrp1号机组cKO公司OL公司文化(d日). 对于Lrp1号机组对照组OLs，n=112个来自三只小鼠的细胞。对于Lrp1号机组cKO公司OL公司OLs，n=来自三只小鼠的60个细胞。(e（电子）)PMP70的代表性分布+的点Lrp1号机组控制和cKOOL公司其他。为了量化，细胞的中心用红十字标记。对距离中心25µm半径范围内的点滴（虚线圆圈）进行量化。(（f）)过氧化物酶体数相对于距中心的距离的定量Lrp1号机组对照组（n=113个细胞，三只小鼠）和cKOOL公司（n=63个细胞，三只小鼠）OLs。(g和h)PMP70的代表性高放大视图+面板中装箱区域的穿孔(一). 比例尺=1µm。结果显示为平均值±SEM，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，Student’st吨-测试。有关详细的统计报告，请参见图5源数据1。
图5——图补充1。
图5-图补充1.的基因本体（GO）分析Lrp1号机组-OPC缺陷表明过氧化物酶体基因富集。
将OPC与Lrp1号机组+/+和Lrp1号机组flox/flox公司；Olig2-Cre公司小鼠幼崽接受微阵列分析。(一)生物过程模块的GO结构与过氧化物酶体功能相关。每个框显示GO术语ID，第页-值、GO项和与GO项相关的输入列表中的基因。每个框的颜色显示每个GO项的丰富程度。使用小鼠基因组信息学（MGI）GO浏览器查询特定GO术语。p值通过Fisher精确检验计算。通过将输入列表中与每个GO术语相关的基因比率除以数据库中预期的基因比率来计算折叠富集。(b条)与下列特定GO术语相关的基因产物相对表达水平的量化(一). mRNA是从急性分离的Lrp1号机组控制（n=4）和cKOOL公司（n=4）只幼鼠，用Affymetrix小鼠基因2.1 ST阵列进行分析。不同调节的基因产物包括派克斯2（过氧化物酶体生物发生因子2），Pex5l公司（过氧化物酶体生物发生因子5样），赫拉斯尔（类hRas抑制器），Ptgis公司（前列腺素I2合成酶），小牛队（线粒体抗病毒信号），以及标准10（StAR-related lipid transfer protein 10）。(c（c）)制备的裂解物的免疫印迹Lrp1号机组控制和cKOOL公司在DM中培养5天后进行OL培养。用抗LRP1β、抗PEX2和抗β-肌动蛋白检测代表性斑点。(d日)PEX2的量化Lrp1号机组控制（n=3）和cKOOL公司（n=3）培养基。结果显示为平均值±SEM，*p<0.05和**p<0.01，学生t吨-测试。有关详细的统计报告，请参见图5源数据1。
图6。
图6..InLrp1号机组-OPC缺陷，PPARγ激活增加过氧化物酶体密度，但不促进细胞分化。
(一)以天为单位的时间线，显示了提供含吡格列酮（Pio）的生长培养基（GM）或分化培养基（DM）并采集细胞进行分析的时间。(b条)制备的OL裂解物的免疫印迹Lrp1号机组在含有（+）或不含（-）Pio的DM中培养5天后，用抗LRP1β进行检测。抗β-肌动蛋白显示为负荷控制。(c（c）)免疫染色Lrp1号机组控制和cKOOL公司在DM中培养5天后。用抗MBP和Hoechst染料33342染色的代表性细胞培养物。比例尺=50µm。(d日)MBP的量化+中的单元格Lrp1号机组用载体控制培养物（n=6），Lrp1号机组用Pio（n=6），cKO控制培养物OL公司培养基与载体（n=4）和cKOOL公司Pio文化（n=4）。(e–f)使用抗MBP和抗PMP70探测主OL。比例尺=10µm。(g–i)OL尺寸的量化（单位：µm）2(克)，PMP70的数量+点(小时)以及每个细胞MBP染色的强度(我). (j个)过氧化物酶体的分布与细胞中心距离的关系Lrp1号机组控制和cKOOL公司OLs治疗±Pio。PMP70的数量+6–15µm in之间的过氧化物酶体Lrp1号机组控制和cKOOL公司对培养物进行统计分析(k个).Lrp1号机组对照组（n=112个细胞，三只小鼠），Lrp1号机组用Pio（n=180个细胞，三只小鼠）、cKO进行对照培养OL公司（n=60个细胞，三只小鼠）和cKOOL公司与Pio的文化。（n=110个细胞，三只小鼠）(k个). (我)用抗MBP和Hoechst染料33342对DM±GW9662中5天后的OLs进行免疫染色。比例尺=50µm。(米)MBP的量化+四种不同条件下的细胞（每种条件下n=3个）。结果显示为平均值±SEM，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，双向方差分析，事后t吨-测试。有关详细的统计报告，请参见图6来源数据1。
图7。
图7：胆固醇和吡格列酮联合治疗可缓解分化障碍Lrp1号机组OPCs缺乏。
(一)以天为单位的时间线，显示何时提供含有吡格列酮（Pio）和胆固醇（Chol）的生长培养基（GM）或分化培养基（DM），并采集细胞进行分析。(b条)免疫染色Lrp1号机组控制和cKOOL公司在DM中培养5天后，用抗MBP和Hoechst染料33342进行探测。比例尺=50µm。(c（c）)MBP的量化+中的单元格Lrp1号机组用载体处理的对照培养物（n=4），Lrp1号机组用Pio和Chol（n=3）处理的对照培养物，cKOOL公司用载体（n=4）和cKO处理的培养物OL公司用Pio和Chol处理的培养物（n=3）。(d和e)使用抗MBP和抗PMP70探测主OL。比例尺=10µm。(f–h)OL尺寸的量化（单位：µm）2(（f）)，PMP70的数量+punta和(克)每个细胞MBP染色强度(小时). (我)过氧化物酶体的分布与细胞中心距离的关系Lrp1号机组控制和cKOOL公司含有（+）或不含（-）Pio和Chol联合治疗的培养物。PMP70的数量+5–15µm in之间的过氧化物酶体Lrp1号机组控制和cKOOL公司对培养物进行统计分析(j个).Lrp1号机组用载体控制培养物（n=210个细胞，三只小鼠），Lrp1号机组用Pio和Chol处理的对照培养物（n=208个细胞，三只小鼠），cKOOL公司用载体（n=199个细胞，3只小鼠）和cKO处理的培养物OL公司用Pio和Chol处理的培养物（n=190个细胞，3只小鼠）(k个). 结果显示为平均值±SEM，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，双向方差分析，事后t吨-测试。有关详细的统计报告，请参见图7源数据1。
图8。
图8：生长OL中LRP1调控途径的工作模型。
(一)OL线中的LRP1对于中枢神经系统髓鞘的正常发育和化学诱导的局灶性白质损伤的及时修复是必要的。在OPC中，Lrp1号机组缺乏导致胆固醇平衡失调和过氧化物酶体生物生成受损。(b条)LRP1是OPC分化为成熟髓磷脂生成OLs的多条重要途径的关键调节器：（I）LRP1调节胆固醇稳态；（二） LRP1调节过氧化物酶体的生物发生；和（III）Lrp1号机组含有胆固醇和吡格列酮的原发性OPC缺乏足以促使成熟为MBP+产生OL的髓磷脂片。
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    1. Auderset L，Cullen CL，Young KM。低密度脂蛋白受体相关蛋白1在发育和成熟小鼠中枢神经系统中的神经元和胶质细胞群体中有差异表达。公共科学图书馆一号。2016;11:e0155878。doi:10.1371/journal.pone.0155878。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Baes M，Aubourg P.《中枢神经系统中的过氧化物酶体、髓鞘化和轴突完整性》。神经科学家。2009;15:367–379. doi:10.1177/1073858409336297。-内政部-公共医学
    1. Berger J，Moller DE。PPAR的作用机制。医学年鉴。2002;53:409–435. doi:10.1146/annurev.med.53.082901.104018。-内政部-公共医学
    1. Berger J、Dorninger F、Forss-Petter S、Kunze M.脑发育和功能中的过氧化物酶体。生物化学与生物物理学报（BBA）-分子细胞研究。2016;1863:934–955. doi:10.1016/j.bbamcr.2015.12.005。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

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