EBI2 receptor regulates myelin development and inhibits LPC-induced demyelination

doi:10.1186/s12974-017-1025-0

.2017年12月16日；14(1):250.

doi:10.1186/s12974-017-1025-0。

EBI2受体调节髓鞘发育并抑制LPC诱导的脱髓鞘

亚历山大·鲁特科夫斯卡^1 2, 安德烈亚斯·W·赛勒^三, Kumlesh K开发⁴

附属公司

¹爱尔兰都柏林三一学院医学院药物开发。kowalcza@tcd.ie。
²波兰哥丹斯克医学大学，M.skłodowskiej-Curie 3a。kowalcza@tcd.ie。
^三瑞士巴塞尔诺华制药股份有限公司诺华生物医药研究所化学生物学与治疗学。
⁴爱尔兰都柏林三一学院医学院药物开发。

PMID： 29246262
预防性维修识别码：项目编号：5732472
内政部： 10.1186/s12974-017-1025-0

EBI2受体调节髓鞘发育并抑制LPC诱导的脱髓鞘

亚历克桑德拉·鲁特科夫斯卡等。 J神经炎症. 2017.

.2017年12月16日；14(1):250.

doi:10.1186/s12974-017-1025-0。

作者

亚历克桑德拉·鲁特科夫斯卡^1 2, 安德烈亚斯·W·赛勒^三, Kumlesh K开发⁴

附属公司

¹爱尔兰都柏林三一学院医学院药物开发。kowalcza@tcd.ie。
²波兰哥丹斯克医学大学，M.skłodowskiej-Curie 3a。kowalcza@tcd.ie。
^三瑞士巴塞尔诺华制药股份有限公司诺华生物医药研究所化学生物学与治疗学。
⁴爱尔兰都柏林三一学院医学院药物开发。

PMID： 29246262
预防性维修识别码：项目编号：5732472
内政部： 10.1186/s12974-017-1025-0

摘要

背景：G蛋白偶联受体EBI2（Epstein-Barr病毒诱导基因2）被7α，25-二羟胆固醇（7α25HC）激活，并在T细胞依赖性抗体反应和B细胞迁移中发挥作用。异常EBI2信号与一系列自身免疫性疾病有关；然而，对其在中枢神经系统中的作用仍知之甚少。

方法：在这里，我们利用小脑器官型切片培养和EBI2敲除（KO）动物，在正常和病理生理条件下描述了EBI2在髓鞘形成中的作用。

结果：我们发现，与野生型（WT）小鼠相比，EBI2 KO小鼠大脑中MBP的表达延迟。与体内研究结果一致，我们发现EBI2的拮抗作用降低了体外MBP的表达。重要的是，我们证明EBI2激活可减弱小鼠器官型切片培养中溶血磷脂（LPC）诱导的脱髓鞘。此外，EBI2激活还抑制LPC介导的小脑切片中IL6和IL1β等促炎细胞因子的释放。

结论：这些结果首次显示了EBI2在髓鞘发育和病理生理条件下防止脱髓鞘形成中的作用，并表明该受体的调节可能有益于神经炎症和脱髓鞘疾病，如多发性硬化。

关键词：脱髓鞘；EB病毒诱导基因2（EBI2受体）；多发性硬化；髓鞘化；神经炎症；器官类型切片。

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所有动物程序均由瑞士巴塞尔诺华制药公司和爱尔兰都柏林三一学院的机构伦理委员会批准。

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不适用。

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出版商备注

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数字

图1
器官型小脑切片维持宿主组织的细胞结构和生理学。共聚焦图像显示从P10小鼠制备并培养14个DIV的器官型切片培养物中保存的细胞结构。一保存的血管结构显示为CD31/PECAM-1（红色），内皮细胞标记物。图像还显示整个切片中的星形胶质细胞（GFAP，绿色）染色，以及星形胶质细胞末端足完全包裹血管（放大倍数更高的图像）。细胞核用Hoechst染色（蓝色，合并图像）。b条图像显示完整的轴突（NF，红色）髓鞘化和髓鞘（MBP，绿色）。**c（c）**此处显示免疫细胞与抗F4/80抗体（绿色）的存在，这是小胶质细胞、成熟巨噬细胞、树突状细胞和单核细胞的标记。高倍镜（×10和×40）图像显示，巨噬细胞和单核细胞沿着血管排列，与内皮细胞和星形胶质细胞一起形成血脑屏障。细胞核用Hoechst染色（蓝色，合并图像）。在×10（标尺100μM）、×40（标尺50μM）和×5（标尺200μM）放大倍数下拍摄的图像

图2
EBI2缺乏导致MBP表达的短暂延迟。一典型的共焦图像显示了从P10小鼠制备的小脑切片，并进行了1、2、4至5、7至9和14 DIV培养。显示了髓磷脂（MBP，绿色）染色。通过定量MBP染色密度测定髓鞘发育。分析显示，一到两张放大倍数为10倍的DIV图像中髓鞘发育存在显著差异。比例尺，100μM。b条图像中显示MBP免疫荧光定量的图表，如(一). 数据表示为平均值± SD（每组5至6只动物），未配对t吨测试**对 < 0.01, ***对 < 0.001与相应的对照。**c（c）**代表性白细胞显示MBP在胚胎（E14和E18）和出生后（P1、P7、P14和P30）WT和EBI2 KO小鼠的全脑裂解物中的差异表达。**d、 e（电子）**斑点的密度定量，如(**c（c）**). 标准化WB数据表示为平均值±标准偏差（每个时间点三到四个WB数据；每个印迹一只动物），未配对t吨测试***对 < 0.001与相应控制

图3
EBI2信号的下调或拮抗会使髓鞘形成参差不齐。典型的共焦图像显示了从P10小鼠制备的WT小脑切片中MBP表达（绿色）和NF轻链（红色），并培养用于一9类，b条14 DIV，以及**c（c）**20 DIV，带或不带7α25HC（1μM）和NIBR189（1µM）。相应的条形图显示MBP染色的量化。未处理和处理的9和14 DIV切片之间没有差异。然而，用7α25HC或NIBR189处理20 DIV切片会抑制WT小脑切片中正常髓鞘的发育，这是通过MBP染色测定的。数据表示为平均值±SD(n个 = 4和6），单向方差分析和Dunnett的后验**对 > 0.01, ***对 < 0.001与相应的对照。放大10倍拍摄的图像。比例尺100μm(d日). 用7α25HC（10μM）处理人单核细胞（U937）1小时可诱导EBI2（绿色）内化。NIBR189（10μM）不诱导受体内化。图像以40倍放大率拍摄。比例尺20μM

图4
7α25HC保护LPC诱导的脱髓鞘。典型共焦图像显示WT(一)和EBI2 KO(b条)用7α25HC（1μM）和/或NIBR189（1µM）±LPC（0.4 mg/ml）处理小鼠小脑切片。显示抗-MBP（绿色）和抗神经丝（NF，红色）免疫染色。图像以10倍放大率拍摄。比例尺，100μM。**c（c）**相应的条形图显示了WT切片中髓磷脂染色的量化，如(一). 7α25HC显著保护LPC诱导的脱髓鞘，EBI2拮抗剂NIBR189抑制了这种保护作用，表明EBI2介导的脱髓磷脂保护作用。数据表示为平均值±SD(n个 = 4和8），单向方差分析和Tukey多重比较后测试**对 < 0.01与相应的对照。d日条形图显示，在EBI2 KO动物制备的切片中，7α25HC不能保护LPC诱导的脱髓鞘，证实了EBI2依赖机制，如(一和**c（c）**). 数据表示为平均值±SD(n个 = 4）、单因素方差分析和Tukey多重比较后测**对 < 0.01与对照组。**e（电子）**实验设计示意图

图5
7α25HC减弱LPC诱导的小脑切片中IL1β和IL6的水平。一实验设计示意图。用LPC（0.4 mg/ml）处理切片会导致IL6增加(b条)和IL1β(**c（c）**)蛋白质释放。7α25HC（1μM）降低LPC（0.4 mg/ml）诱导的IL6水平(b条)和IL1β(**c（c）**). 与EBI2拮抗剂（NIBR189，1μM）共治疗阻断7α25HC介导的IL6水平的影响(b条)和IL1β(**c（c）**)表明细胞因子释放的EBI2依赖性调节。仅用NIBR189治疗并没有改变IL6(b条)或IL1β(**c（c）**)释放。数据表示为平均值±SD(n个 = 3）、单向方差分析和Bonferroni的后验***对 < 0.001与相应控制

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参考文献

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