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.2017年7月4日;8(55):93516-93529.
doi:10.18632/noctarget.18977。 电子采集2017年11月7日。

CCCTC-结合因子通过核因子-κB通路的失活抑制乳腺癌细胞增殖和转移

附属公司

CCCTC-结合因子通过核因子-κB通路的失活抑制乳腺癌细胞增殖和转移

吴杰等。 Oncotarget公司. .

摘要

CCCTC-结合因子(CTCF)是一种重要的表观遗传调控因子,参与多种细胞过程,包括生长、增殖、分化和凋亡。尽管CTCF缺失或突变与人类乳腺癌有关,但CTCF在乳腺癌中的作用仍值得怀疑。我们研究了CTCF在乳腺癌中的生物学功能及其潜在机制。结果表明,CTCF在人乳腺癌细胞和组织中的表达显著低于正常乳腺细胞和组织。此外,CTCF的表达与癌症分期显著相关(P(P)=0.043)与病理分化(P(P)= 0.029). 此外,CTCF的过度表达导致了增殖、迁移和侵袭的抑制,而CTCF基因敲除在乳腺癌细胞中诱导了这些过程。转录组分析和MDA-MD-231细胞的进一步实验证实表明,强制过表达CTCF可能会减弱核因子κB(NF-κB)p65亚单位的DNA-结合能力,并抑制NFκB及其靶原癌基因(肿瘤坏死因子α诱导蛋白3[TNFAIP3])的激活以及生长相关蛋白的基因(早期生长反应蛋白1[EGR1]和生长停滞和DNA损伤诱导α[GADD45a])。本研究对CTCF在乳腺癌发展中的抑癌作用提供了新的见解,并表明CTCF/NF-κB通路是乳腺癌治疗的潜在靶点。

关键词:CCCTC-结合因子;乳腺癌;转移;核因子-kappaB;增殖。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突作者声明没有相互竞争的财务利益。

数字

图1
图1。乳腺癌组织和细胞系中CTCF表达下调
(A类)通过western blotting分析评估CTCF在人乳腺上皮细胞系MCF-10A和人乳腺癌细胞系(非转移性MCF-7和转移性SKBR3以及MDA-MB-231)中的表达。GAPDH被用作内部控制。(B类)实时定量PCR用于检测CTCF公司20例新鲜乳腺癌组织及相应癌周组织中mRNA水平。(C类)正常乳腺组织、纤维腺瘤和指定临床阶段的肿瘤组织中CTCF的免疫组织化学染色的代表性图像(×400)。(D类)不同临床阶段患者CTCF蛋白表达的免疫反应评分(IRS)**表示P(P)<0.01。
图2
图2。CTCF抑制乳腺癌细胞增殖和致瘤性
Western blotting分析证实CTCF公司携带shCTCF载体的慢病毒颗粒稳定感染MCF-7细胞的敲除(A类)并在MDA-MB-231细胞中过度表达,该细胞稳定地感染了携带CTCF公司向量(B类). 影响CTCF公司击倒(C类)和过度表达(D类)MTT法检测乳腺癌细胞增殖。影响CTCF公司击倒(E类)和过度表达(F类)用集落形成实验检测乳腺癌细胞的致瘤性*P(P)表示<0.05,**表示P(P)<0.01。
图3
图3。CTCF抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭
伤口愈合(A类C类)和Transwell(B类D类)进行分析以检测CTCF公司击倒(A类B类)和过度表达(C类D类)乳腺癌细胞的迁移和侵袭。左侧面板是一个代表性的图像,右侧面板显示每个字段的平均数**表示P(P)<0.01。
图4
图4。CTCF抑制乳腺癌细胞的致瘤性体内
(A类)给异种移植裸鼠模型接种CTCF公司-过表达MDA-MB-231细胞或对照细胞(n个=5/组),在第44天分离肿瘤。(B类)异种移植瘤生长曲线。(C类)异种移植瘤的平均重量。(D类E类)使用qRT-PCR和western blotting分析测量异种移植瘤中CTCF mRNA和蛋白水平。*表示P(P)<0.05,**表示P(P)<0.01。
图5
图5。过表达CTCF的MDA-MB-231细胞差异表达基因的鉴定
总RNA提取自CTCF公司-过表达MDA-MB-231细胞和对照细胞,以及基因表达微阵列,如“材料和方法”所述。(A类)基因表达变化>1.3倍P(P)<0.05由热图表示。绿色表示相对低表达,红色表示相对高表达。(B类)在198个差异表达基因中,36个是NF-κB复合物或RELA(p65)的靶基因。绿色表示下调基因,红色表示上调基因。
图6
图6。CTCF过度表达下调MDA-MB-231细胞中多个NF-κB靶基因
(A类)通过cDNA微阵列鉴定的NF-κB靶基因在CTCF公司-过度表达和控制MDA-MB-231细胞。(B类)三个NF-κB靶基因表达的Western blotting分析CTCF公司-过度表达和控制MDA-MB-231细胞*表示P(P)<0.05,**表示P(P)<0.01。
图7
图7。CTCF抑制NF-κB(p65)活化
(A类)中p65和p-p65的水平CTCF公司-过度表达MDA-MB-231细胞和CTCF公司-western blotting分析检测敲除MCF-7细胞。(B类)CTCF公司-用携带六个典型NF-kB结合位点的空载体pGL3-Basic或荧光素酶报告基因pGL3-NFkB瞬时转染过表达和对照MDA-MB-231细胞。转染48小时后,检测荧光素酶活性。(C类)进行ChIP分析以检测p65在TNFAIP3发起人CTCF公司-过度表达和控制MDA-MB-231细胞。数据代表三个独立的实验。误差条表示平均值的标准误差*表示P(P)< 0.05.

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引用人

工具书类

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