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.2018年2月；17(2):2853-2860.
doi:10.3892/mmr.2017.8192。 Epub 2017年12月5日。

靶向WWTR1的RNAi对胃癌细胞SGC7901生物学活性的影响及其机制

袁丽（音） 1, 杨芳良 1, 朱春福 1, 李明堂 1
附属公司

靶向WWTR1的RNAi对胃癌细胞SGC7901生物学活性的影响及其机制

袁丽（音）等。 摩尔医学代表. 2018年2月.

摘要

胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一。开发新的GC靶点和治疗方法至关重要，这需要识别新的功能分子。WW‑domain containing transcription regulator 1（WWTR1）可激活多种转录因子，并在哺乳动物各种组织的发育中发挥重要作用。本研究结果表明，在GC组织和细胞系中WWTR1的mRNA和蛋白水平增加。选择SGC7901细胞系进行针对WWTR1的RNA干扰（RNAi），并进行后续研究。与对照组（未经任何处理的细胞）和模拟组（经非特异性siRNA处理的细胞。流式细胞仪检测细胞周期和凋亡状态，与对照细胞和模拟细胞相比，细胞周期中G1/S转换被阻断，凋亡被促进。采用逆转录定量聚合酶链反应和western blotting检测细胞周期和凋亡相关因子的mRNA和蛋白水平。与对照细胞和模拟细胞相比，siWWRT1细胞中Cyclin D1、癌症Myc和B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）的表达在mRNA和蛋白水平上显著降低，Bcl-2相关X蛋白显著增加。除Hippo途径外，siWWTR1调节下游因子，包括母亲对抗十脑停搏液同源家族成员3（SMAD3）和DNA结合抑制剂1、HLH蛋白（ID1）、转化生长因子（TGF）‑β途径中的HLH蛋白。在siWWRT1细胞中，天冬酰胺合成酶的表达降低，而ID1、SMAD3（参与细胞内TGF-β转导的蛋白质）和betacellulin的表达显著增加。总之，WWTR1通过调节细胞周期/凋亡相关因子和TGF-β途径中的效应器，促进细胞增殖并抑制GC细胞的凋亡。

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数字

图1。
图1。
WWTR1在胃癌组织和细胞系中的表达。（A） 采用RT-PCR方法检测胃癌组织及癌旁正常组织中WWTR1 mRNA的表达。通过western blotting检测胃癌组织和邻近正常组织中WWTR1的（B和C）蛋白水平。给出了几个具有代表性的western blotting图像。平均蛋白质水平如（C）所示。（D） 采用RT-PCR方法检测正常胃粘膜上皮细胞GES1和胃癌细胞株SGC7901、BGC823、HGC-27、MGC-803和MKN45中WWTR1 mRNA的表达。采用western blotting法检测细胞株（GES1、SGC7901、BGC823、HGC-27 MGC-803和MKN45）中WWTR1的（E和F）蛋白水平。检测GAPDH作为样品装载的控制。数据表示为平均值±SD，n=6*与对照细胞相比，P<0.05和**P<0.01。WWTR1，含有WW域的转录调节因子1；GAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶。
图2。
图2。
siRNA-WWTR1对SGC7901细胞活性的影响。（A） 在siRNA-WWTR1转染48小时后，通过RT-PCR定量SGC7901细胞中WWTR1的mRNA表达。在siRNA-WWTR1转染48小时后，通过western blotting检测SGC7901细胞中WWTR1的蛋白水平。数据以平均值±标准差表示，n=6**与对照细胞和##与模拟细胞相比P<0.01。WWTR1，含有WW域的转录调节因子1；CCK-8，细胞计数套件-8；GAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶。
图3。
图3。
siRNA-WWTR1对SGC7901细胞周期进展和凋亡的影响。（A和B）在siRNA-WWTR1 48 h转染时，对SGC7901进行细胞周期分析，分别检查G1、S和G2期细胞的比例。（C和D）在siRNA-WWTR1转染48 h后，通过Annexin V/PI双染分析检测SGC7901细胞凋亡。数据表示为平均值±标准偏差，n=6*与对照细胞相比，P<0.05和**P<0.01，#P<0.05和##与模拟细胞相比P<0.01。WWTR1，含有WW域的转录调节因子1；PI，碘化丙啶。
图4。
图4。
siRNA-WWTR1对细胞周期和凋亡相关因子表达的影响。（A） 用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测siRNA-WWTR1转染48 h后SGC7901细胞中细胞周期因子（Cyclin A、Cyclin-D1、Cycrin-E、c-Myc）和凋亡相关因子（Bcl-2、XIAP和Bax）的mRNA表达，在siRNA-WWTR1处理48小时后，通过western blotting分析SGC7901细胞中的Bcl-2和Bax。检测GAPDH作为样品装载的控制。数据表示为平均值±标准偏差，n=6，**与对照组相比P<0.01；##与模拟相比，P<0.01。WWTR1，含有WW域的转录调节因子1；Bcl-2，B细胞淋巴瘤/白血病-2；X连锁凋亡抑制剂XIAP；Bax、Bcl-2相关X蛋白；GAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶；c-Myc，癌症Myc。
图5。
图5。
siRNA-WWTR1对WWTR1下游因子表达的影响。（A） siRNA-WWTR1转染48 h后，用RT-PCR检测ASNS、ID1、SMAD3和BTC的mRNA表达。siRNA-WWTR1转染48 h后，通过western blotting检测（B和C）ASNS、ID1、SMAD3和BTC蛋白的表达。同时检测GAPDH作为样本负荷的对照。数据表示为平均值±标准偏差，n=6，**与对照组相比P<0.01；##与模拟相比，P<0.01。WWTR1、含有WW结构域的转录调节因子1；天冬酰胺合成酶（谷氨酰胺水解）；ID1，DNA结合抑制剂1，HLH蛋白；SMAD3，母亲反对十脑麻痹同系物家族成员3；BTC，桦木纤维素；GAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶。
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