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.2017年11月；14(5):5057-5062.
doi:10.3892/etm.2017.5165。 Epub 2017年9月21日。

Sirt1通过Wnt/β-catenin信号通路调节白藜芦醇治疗的骨关节炎软骨细胞的凋亡和细胞外基质降解

刘栓（Shuan Liu） 1, 杨洪平 1, Bing Hu（胡兵） 1, 张明勇 1
附属公司

Sirt1通过Wnt/β-catenin信号通路调节白藜芦醇治疗的骨关节炎软骨细胞凋亡和细胞外基质降解

刘栓（Shuan Liu）等。 实验治疗学. 2017年11月.

摘要

随着人口老龄化的加剧，骨关节炎已成为一个主要的公共卫生问题。先前的研究表明，白藜芦醇（RES）能够增加OA软骨细胞中的sirtuin 1（Sirt1）水平。然而，还需要进一步的研究来阐明RES的确切分子机制以及Sirt1与RES之间的潜在联系。因此，本研究使用30个临床OA软骨细胞来检测软骨细胞的活性、凋亡率以及与凋亡相关的Sirt1和相关基因的mRNA和蛋白表达水平，细胞外基质（ECM）降解和Wnt/β-catenin信号通路。RES和烟酰胺分别作为刺激物和抑制剂。结果表明，在10µM RES作用下，凋亡率随着细胞数量从13.83%降至6.55%而降低。B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、蛋白酶-3和-9、基质金属蛋白酶1（MMP1）、MMP3、MMP13、Wnt3a、Wnt5a、，10µM RES处理的OA软骨细胞中，Wnt7a和β-catenin被显著抑制（P<0.01），而Bcl-2水平显著升高（P<0.01。

关键词：Wnt/β-catenin信号；细胞凋亡；软骨细胞；基质金属蛋白酶；骨关节炎；西尔图因1。

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数字

图1。
图1。
通过蛋白质印迹和密度测定法评估Sirt1蛋白表达水平，通过逆转录定量聚合酶链式反应分析评估mRNA表达水平。（A） Sirt1和GAPDH的mRNA表达水平呈现为电泳图和定量分析。（B） 分别用10µM RES和20µM NAM处理Sirt1和GAPDH蛋白表达的Western blot分析**与对照组相比，P<0.01。GAPDH，3-磷酸甘油醛脱氢酶；Sirt1，sirtuin 1；RES，白藜芦醇；NAM，烟酰胺。
图2。
图2。
分别用10µM RES和20µM NAM处理后24、48和72小时的细胞存活率OD（560 nm）曲线**与对照组相比，P<0.01。OD，光密度；RES，白藜芦醇；NAM，烟酰胺。
图3。
图3。
当给予10µM RES和20µM NAM时，通过Annexin V-PI染色检测凋亡率。PI，碘化丙啶；RES，白藜芦醇；NAM，烟酰胺。
图4。
图4。
蛋白质表达的Western blot分析和半定量。（A） Western印迹分析和（B）10µM RES处理和20µM NAM处理的OA软骨细胞中Bax、Bcl-2、原蛋白酶-3和−9蛋白的半定量**与GAPDH对照组相比，P<0.01。Bcl-2，B细胞淋巴瘤2；Bax、Bcl-2相关X蛋白；RES，白藜芦醇；NAM，烟酰胺；骨性关节炎；GAPDH，3-磷酸甘油醛脱氢酶。
图5。
图5。
蛋白质表达的Western blot分析和半定量。（A） Western blot分析和（B）在10µM RES处理和20µM NAM处理的OA软骨细胞中MMP1、MMP3和MMP13蛋白的半定量**与GAPDH对照组相比，P<0.01。基质金属蛋白酶；RES，白藜芦醇；NAM，烟酰胺；骨性关节炎；GAPDH，3-磷酸甘油醛脱氢酶。
图6。
图6。
蛋白质表达的Western blot分析和半定量。（A） Western blot分析和（B）10µM RES处理和20µM NAM处理OA软骨细胞中Wnt3a、Wnt5a、Wnt7a和β-catenin蛋白的半定量**与GAPDH对照组相比P＜0.01。RES，白藜芦醇；NAM，烟酰胺；骨性关节炎；GAPDH，3-磷酸甘油醛脱氢酶。
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