跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2018年3月；175(5):743-762.
doi:10.1111/bph.14099。 Epub 2018年1月25日。

同时应用促红细胞生成素和LFM-A13治疗结直肠癌

安娜·坦基维奇·奎德洛 1, 朱斯特娜·玛格达莱娜·赫曼诺维奇（Justyna Magdalena Hermanowicz） 2 三, 托马斯·多马尼耶夫斯基 1, 克里斯蒂娜·鲍拉克 1, 马戈扎塔·鲁萨克 4, 安娜·普里奇尼茨 5, 阿卡迪乌斯·苏拉津斯基 6, 托马斯·卡明斯基 2, 亚当·卡兹贝鲁克 6, Dariusz Pawlak公司 2
附属公司

同时应用促红细胞生成素和LFM-A13治疗结直肠癌

安娜·坦基维奇·奎德洛等。 杂志. 2018年3月.

摘要

背景和目的：布鲁顿酪氨酸激酶（Btk）是一种非受体酪氨酸激酶，参与激活负责细胞成熟和存活的信号通路。此前有报道称，Btk在结肠癌中过度表达。这种癌症通常伴有贫血，而贫血是用促红细胞生成素补充剂治疗的。本研究的目的是评估联合应用促红细胞生成素β（Epo）和LFM-A13（Btk抑制剂）对结肠癌体外和体内模型的影响。

实验方法：用Epo和LFM-A13培养DLD-1和HT-29人结肠腺癌细胞。对Epo受体、Btk和Akt的细胞数量、存活率、mRNA和蛋白水平进行评估。裸鼠接种腺癌细胞并用Epo和LFM-A13处理。

主要成果：Epo和LFM-A13的联合对结肠癌细胞的生长大多具有协同抑制作用。所使用的治疗方案有效地杀死了癌细胞并减弱了Btk信号通路。Epo+LFM-A13还通过下调Polo-like kinase 1的表达，阻止了有丝分裂期间微管组装的正常过程。Epo和LFM-A13的联合使用显著降低了肿瘤细胞的生长速度，同时显示出较高的安全性，不会引起肾毒性、肝毒性或血液学参数的变化。

结论和启示：Epo显著增强LFM-A13的抗肿瘤活性，表明Epo和LFM-A12联合应用有可能成为结直肠癌患者的有效治疗方法。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
用Epo、LFM‐A13（LFM）及其组合处理的DLD‐1和HT‐29细胞中的Epo受体mRNA水平。结果以平均值±SD表示，n个 = 6, ^P（P）<0.05（相对于Epo）#P（P）<0.05（与LFM‐A13相比）（A）。通过Western blot测定经Epo（100 IU·mL）处理的DLD-1和HT-29细胞中磷酸化（p‐EpoR）和总（t‐EpoR）Epo受体的表达−1)，LFM‐A13（100μM）及其组合48小时。用于电泳的样品包括来自六个混合的独立细胞提取物的20μg蛋白质(n个 = 6). 用密度计定量带染色。定量分析p-EpoR/t-EpoR比率，以控制水平的百分比表示（B）。DLD‐1（C）和HT‐29细胞（D）磷酸化和总EpoR表达；整个细胞核（Hoechst，绿色），受体招募（红色）。DLD-1和HT-29共聚焦数据的定量分析。给出的值是控件的百分比，即100%。结果显示为中位数（最小值-最大值），n个 = 6. *P（P）<0.05（与Epo相比）^P（P）<0.05（与Epo相比）#P（P）<0.05（与LFM‐A13相比）。
图2
图2
经Epo、LFM-A13（LFM）及其组合治疗的DLD-1和HT-29细胞中的Btk mRNA水平。结果以平均值±SD表示，n个 = 6. ^P（P）<0.05（与Epo相比）#P（P）<0.05（与LFM‐A13相比）（A）。通过Western blot测定经Epo（30，100 IU·mL）处理的DLD-1和HT-29细胞中磷酸化Btk（p‐Btk）和总Btk的表达−1)，LFM‐A13（LFM 30，100μM）及其组合48小时（Btk）和5分钟（p‐Btk。用于电泳的样品由来自六个混合的独立细胞提取物的20μg蛋白质组成(n个 = 6). 用密度计定量带染色。p-Btk/t-Btk比率的定量分析，表示为控制水平的百分比（B）。Western blot法测定经最有效浓度Epo（100 IU·mL）处理的DLD‐1和HT‐29细胞中磷酸化Btk（p‐Btk）和总Btk的表达−1)，LFM‐A13（LFM 100μM）及其组合48小时（Btk）和5分钟（p‐Btk。用于电泳的样品由来自六个混合的独立细胞提取物的20μg蛋白质组成(n个 = 6). 用密度计定量带染色。p‐Btk/t‐Btk比值的定量分析，以控制水平（C）的百分比表示。
图3
图3
用Epo（100 IU·mL）孵育24小时后DLD‐1和HT‐29细胞中Akt mRNA水平−1)、LFM‐A13（LFM 100μM）及其组合。结果以平均值±SD表示，n个=6^P（P）<0.05（与Epo相比）#P（P）<0.05（与LFM‐A13相比）（A）。（B） 经Epo（100 IU·mL）处理的DLD‐1和HT‐29细胞中磷酸化Akt（p‐Akt）和Akt总表达的Western blot测定−1)，LFM‐A13（LFM 100μM）5分钟（p‐Akt）和48小时（t‐Akt）。用于电泳的样品由来自六个混合的独立细胞提取物的20μg蛋白质组成(n个 = 6). 用密度计定量带染色。p-Akt/t-Akt比率的定量分析，表示为控制水平的百分比（B）。DLD-1（C）和HT-29细胞（D）磷酸化和Akt总表达；整个细胞核（Hoechst，绿色），Akt募集（红色）。DLD-1和HT-29共聚焦数据的定量分析。给出的值是控件的百分比，即100%。结果显示为中位数（最小值-最大值），n个 = 6. *P（P）<0.05（与Epo相比）^P（P）<0.05（与Epo相比）。
图4
图4
经Epo（100 IU·mL）处理的DLD-1和HT-29细胞中磷酸化PLK1（p-PLK）和PLK1总（t-PLK）表达的Western blot测定−1)，LFM‐A13（LFM 100μM）及其组合48小时。用于电泳的样品由6个混合细胞提取物中的20μg蛋白质组成(n个 = 6). 用密度计定量带染色。磷酸化蛋白带归一化为各自的总蛋白（A）。Western blot检测经Epo、LFM-A13处理48 h的DLD-1和HT-29细胞中活性和前caspase 3的表达。用于电泳的样品由来自六个混合的独立细胞提取物的20μg蛋白质组成(n个 = 6). 用密度计定量带染色。磷酸化蛋白带归一化为各自的总蛋白（B）。LFM-A13对DLD-1细胞中纺锤组件的影响。LFM‐A13处理的DLD‐1细胞在有丝分裂过程中表现出异常的微管组装，并发育出异常的单极有丝分裂纺锤体，微管高度密集且过度伸展。橙色，γ-微管蛋白；红色，α‐管蛋白；蓝色，DNA/染色体（C）。Epo、LFM‐A13以及同时使用这两种化合物（Epo+LFM‐A13）对DLD‐1（D）和HT‐29细胞的细胞周期进展的影响（E）。细胞在100 IU·mL的存在下培养−1100μM LFM‐A13及其组合在37°C下24小时，然后通过DNA流式细胞术进行检测，如方法部分所述。Epo+LFM‐A13处理的DLD‐1和HT‐29细胞显示S期分数减少，G期略有增加0/G公司1。显示了细胞周期不同阶段的事件百分比。
图5
图5
Epo和LFM-A13（LFM）及其组合对人类结肠模型的影响。与Epo、LFM及其组合培养48小时后DLD-1（A）和HT-29（D）细胞的数量。结果以平均值±SD表示，n个 = 6, *P（P）<0.05（对比Con）^P（P）<0.05（与Epo相比），# P（P）<0.05（与LFM‐A13相比）。比较Epo、filgstim（Flg）、LFM和Acl对DLD-1（B）和HT-29（E）细胞活性的影响。结果以平均值±SD表示，n个 = 6, *P（P）<0.05（对比Con）^P（P）<0.05（与Epo相比），# P（P）<0.05（与LFM-A13相比），& P（P）<0.05（与Flg相比）。Epo和LFM的联合活性对DLD-1（C）和HT-29（F）异种移植瘤体积的影响。开始-给药前，1，2-治疗第一周和第二周后。结果显示为中值（最小值-最大值），n个 = 5–63. DLD-1（C）和HT-29（F）异种移植瘤体积变化的统计分析*P（P）<0.05（对比Con）^P（P）<0.05（与Epo相比），# P（P）<0.05（与LFM‐A13相比）。DLD‐1（G）和HT‐29（H）中Epo和LFM‐A13的双重组合以1:1的比例显示出主要的协同效应；然而，最低浓度的CI值为0.9，表明HT-29线存在加性效应。该表总结了ED时的Cl值50，教育部75，教育部90和ED95（右）。值得注意的是，在所有双重组合中，最有效的抗癌药物在几乎所有效应水平上都表现出显著的协同作用。
图6
图6
治疗2周后DLD-1（顶行）和HT-29（底行）异种移植物的肾脏（1,2）、肺（3,4）、脾（5,6）、肝脏（7,8）和骨髓涂片（9,10）的组织学样本（苏木精和伊红，原始放大倍数，400倍）（A）。肾（1，2）、肺（3，4）、脾（5，6）、肝（7，8）和肿瘤（9，10）中结肠癌异种移植物（DLD-1（顶行）和HT-29（底行）的膜和细胞质中p-Epo受体的阳性表达（原始放大倍数，400倍）（B）。p‐Btk在结肠癌异种移植物的膜和细胞质中的阳性表达，按上述顺序排列（原始放大倍数，400倍）（C）。p‐Akt在结肠癌异种移植物细胞质中的阳性表达，器官的顺序如上（原始放大倍数，400×）（D）。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Acs G、Acs P、Beckwith SM、Pitts RL、Clements E、Wong K等人（2001年）。人类癌症中促红细胞生成素和促红细胞形成素受体的表达。癌症研究61:3561–3565。-公共医学
    1. Akinleye A、Chen Y、Mukhi N、Song Y、Liu D（2013）。伊布替尼和新型Btk抑制剂的临床开发。《血液肿瘤学杂志》6:59。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. van den Akker E、van Dijk TB、Schmidt U、Felida L、Beug H、Löwenberg B等人（2004年）。BTK抑制剂LFM‐A13是Jak2激酶活性的有效抑制剂。生物化学385:409–413。-公共医学
    1. Alexander SP、Fabbro D、Kelly E、Marrion NV、Peters JA、Faccenda E等人（2017a）。《2017/18年药理学简明指南：催化受体》。英国药理学杂志174（补遗1）：S225–S271。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Alexander SP、Fabbro D、Kelly E、Marrion NV、Peters JA、Faccenda E等人（2017b）。2017/18年药理学简明指南：酶。英国药理学杂志174（增刊1）：S272–S359。-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语