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.2017年11月;14(5):4431-4437.
doi:10.3892/etm.2017.5049。 Epub 2017年8月28日。

Tectorigenin减弱MPP+-诱导SH-SY5Y细胞损伤,表明氧化应激抑制在帕金森病中具有潜在的有益作用

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Tectorigenin减弱MPP+-诱导SH-SY5Y细胞损伤,表明氧化应激抑制在帕金森病中具有潜在的有益作用

平贡等。 实验治疗学. 2017年11月.

摘要

Tectorigenin是一种植物异黄酮,主要来源于甘葛藤本斯。尽管已经报道了构造素的各种生物学特性,如抗氧化活性,但构造素在帕金森病细胞模型中的作用尚未阐明。本研究的目的是研究构造素是否能预防MPP诱导的神经毒性+(也称为1-甲基-4-苯基吡啶),并阐明潜在的保护机制。测定细胞活力和乳酸脱氢酶释放。Hoechst 33258染色观察凋亡细胞的形态学变化。使用商用ELISA试剂盒测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性。细胞色素的表达c(c)western blot分析检测Bax、Bcl-2和NADPH氧化酶。结果表明,MPP治疗+导致细胞活力显著下降,凋亡增加,凋亡细胞、caspase-3活性和细胞色素上调就是明证c(c)表达式。相反,在SH-SY5Y细胞中用构造元预处理,这些作用都被逆转。Tectorigenin也抑制MPP+-诱导Bax和Bcl-2水平的变化。此外,用构造素预处理可以缓解MPP+-导致SH-SY5Y细胞中活性氧和NADPH氧化酶蛋白水平升高。同时,构造素可抑制MPP诱导的抗氧化酶(包括超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶)的下调+总之,目前的研究数据表明,构造素对MPP的神经保护作用+-诱导的细胞毒性和细胞凋亡可能与减轻氧化应激和增强抗氧化防御有关。

关键词:MPP+;帕金森病;神经毒性;氧化应激;构造素。

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数字

图1。
图1。
Tec对MPP的抑制作用+-诱导细胞死亡。在暴露于MPP之前,用不同浓度的Tec(0.1、1和10µM)预处理SH-SY5Y细胞30分钟+(0.5 mM)持续24 h。(A)通过细胞计数试剂盒-8检测SH-SY5Y细胞的活性,(B)通过LDH释放检测试剂盒检测LDH释放。数据表示为三个实验的平均值±标准误差**与对照组相比P<0.01;#P<0.05和##与MPP相比P<0.01+单独组。Tec,构造元;乳酸脱氢酶。
图2。
图2。
Tec对MPP的抑制作用+-暴露于MPP前用Tec(1µM)预处理30分钟诱导SH-SY5Y细胞凋亡+(0.5 mM)持续24 h。(A)通过Hoechst 33258染色(放大倍率×100)观察表明细胞凋亡的细胞形态学变化。(B) 用半胱天冬酶-3 ELISA试剂盒测定Caspase-3凋亡。(C) 细胞色素的表达c(c)蛋白质测定采用westernblot法。数据表示为三个实验的平均值±标准误差**与对照组相比P<0.01;#P<0.05和##与MPP相比P<0.01+单独组。Tec,构造元。
图3。
图3。
Tec对MPP的影响+-诱导Bax和Bcl-2表达水平的改变。SH-SY5Y细胞在暴露于MPP前用Tec(1µM)预处理30分钟+(0.5mM)24小时。通过蛋白质印迹分析检测(A)Bax和(B)Bcl-2的蛋白质表达水平。数据表示为三个实验的平均值±标准误差**与对照组相比P<0.01;#P<0.05和##与MPP相比P<0.01+单独组。Tec,构造元。
图4。
图4。
Tec对MPP的抑制作用+-诱导产生ROS和上调NOX。SH-SY5Y细胞在暴露于MPP前用Tec(1µM)预处理30分钟+(0.5 mM)持续24 h。(A)通过DCFH-DA染色测定ROS生成。(B) 通过western blot分析检测NOX蛋白的表达。数据以控制组的百分比表示,条形图表示三个独立实验的平均值±标准误差*与对照组相比,P<0.05和**P<0.01;#P<0.05和##与MPP相比P<0.01+单独组。Tec,构造元;活性氧;NOX、NADPH氧化酶。
图5。
图5。
Tec对MPP的抑制作用+-诱导抗氧化防御减弱。SH-SY5Y细胞在暴露于MPP前用Tec(1µM)预处理30分钟+用生物发光ELISA试剂盒测定SOD活性、CAT活性和GSH-Px水平。数据表示为三个独立实验的平均值±标准误差*与对照组相比,P<0.05和**P<0.01;#P<0.05##与MPP相比P<0.01+单独组。Tec,构造元;超氧化物歧化酶;过氧化氢酶;GSH-Px,谷胱甘肽过氧化物酶。

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