Porcine Dental Epithelial Cells Differentiated in a Cell Sheet Constructed by Magnetic Nanotechnology

doi:10.3390/nano7100322

.2017年10月13日；7(10):322.

doi:10.3390/nano7100322。

磁性纳米技术构建细胞片诱导猪牙上皮细胞分化

Wataru Koto公司¹, 吉本信原², 北村和辅（Kazuyuki Kitamura）^三, 塔卡诺里·瓦奇⁴, Seicho Makihira先生⁵, 清水清彦⁶

附属公司

¹日本福冈812-8582九州大学牙科学院口腔康复系固定修复科。k.wataru@dent.kyushu-u.ac.jp。
²日本福冈812-8582九州大学牙科学院口腔康复系固定修复科。sinohara@dent.kyushu-u.ac.jp。
^三日本福冈812-8582九州大学牙科学院口腔康复系固定修复科。k.kitamura@dent.kyushu-u.ac.jp。
⁴日本福冈812-8582九州大学牙科学院口腔康复系固定修复科。wachi@dent.kyushu-u.ac.jp。
⁵日本福冈812-8582九州大学牙科学院口腔康复系固定修复科。makihira@dent.kyushu-u.ac.jp。
⁶日本福冈812-8582九州大学牙科学院口腔康复系固定修复科。koyano@dent.kyushu-u.ac.jp。

PMID： 29027917
预防性维修识别码： PMC5666487
内政部： 10.3390/纳米7100322

在磁性纳米技术构建的细胞片中分化的猪口腔上皮细胞

Wataru Koto公司等。纳米材料（巴塞尔）. 2017.

.2017年10月13日；7（10）:322。

doi:10.3390/nano7100322。

作者

Wataru Koto公司¹, 吉本信原², 北村和辅（Kazuyuki Kitamura）^三, 塔卡诺里·瓦奇⁴, Seicho Makihira先生⁵, 清水清彦⁶

附属公司

¹日本福冈812-8582九州大学牙科学院口腔康复系固定修复科。k.wataru@dent.kyushu-u.ac.jp。
²日本福冈812-8582九州大学牙科学院口腔康复系固定修复科。sinohara@dent.kyushu-u.ac.jp。
^三日本福冈812-8582九州大学牙科学院口腔康复系固定修复科。k.kitamura@dent.kyushu-u.ac.jp。
⁴日本福冈812-8582九州大学牙科学院口腔康复系固定修复科。wachi@dent.kyushu-u.ac.jp。
⁵日本福冈812-8582九州大学牙科学院口腔康复系固定修复科。makihira@dent.kyushu-u.ac.jp。
⁶日本福冈812-8582九州大学牙科学院口腔康复系固定修复科。koyano@dent.kyushu-u.ac.jp。

PMID： 29027917
预防性维修识别码： PMC5666487
内政部： 10.3390/纳米7100322

摘要

磁性纳米颗粒（MNPs）广泛应用于医学检查、治疗和基础研究，包括磁共振成像、给药系统和组织工程。在本研究中，将具有磁力的MNPs应用于组织工程，用于牙釉质再生。透射电镜观察MNP内化成牙源性细胞。利用磁力组织工程技术构建了由牙上皮细胞（DECs）和牙间充质细胞（DMCs）组成的复合细胞片（CC片）。铁染色的结果表明MNPs在CC片上普遍分布。在CC片中检测牙釉质分化和基底膜标记物的mRNA表达。免疫染色显示，IV型胶原在CC片中DEC层和DMC层之间的边界区域表达。这些结果表明，DEC和DMC层之间的上皮-间充质相互作用是由磁力使DEC机械地靠近DMC引起的。我们的研究表明，CC片中的微环境可能与牙齿发育阶段的微环境相似。总之，使用MNP的CC片可以开发成为一种新型且独特的人工再生牙釉质的移植物。

关键词：细胞膜；牙釉质再生；上皮-间充质相互作用；磁性纳米粒子；纳米技术；牙源性细胞。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
用100 pg-磁铁矿/磁性纳米颗粒细胞（MNPs）（×5000）处理的牙源性细胞的透射电子显微镜（TEM）图像。白色箭头表示细胞内MNP。比例尺=1μm。

图2
通过MTS分析评估MNP对牙上皮细胞（DECs）和牙间充质细胞（DMCs）的细胞毒性作用。将0、50、100、150或300 pg-磁铁矿/电池的MNP添加到汇合处的电池中。在有无MNP的情况下将细胞维持24小时后，进行MTS分析。第页>0.05，方差分析。

图3
MNPs和/或磁力对*美国运通*,*ENAM公司*、和*AMBN公司*通过实时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测培养的DEC。实时RT-PCR数据归一化为*β-肌动蛋白*mRNA。独立实验重复两次。数据表示一式三份样品的平均值±标准差（SD）*第页<0.05，方差分析。

图4
MNPs和/或磁力对*运行x2，COL1α2*、和*DSPP公司*通过实时RT-PCR检测培养的DMC。实时RT-PCR数据归一化为*β-肌动蛋白*mRNA。独立实验重复两次。数据表示三份样品的平均值±SD。第页>0.05，方差分析。

图5
Mag-TE系统生成的DEC板照片。将标记有MNP的DEC接种到24孔超低附着培养板（美国纽约州科宁市科宁公司）中，培养温度为2×10⁶细胞/平板。将圆柱形钕磁体（磁力4110G）置于超低附着板的反面，培养细胞24小时。培养后，构建细胞膜(A类). DEC板HE染色横截面的显微图像（×100）(B类).

图6
铁染色后CC片的显微镜观察（×200）。实心箭头表示DEC层中的MNP。白色箭头表示DMC层中的MNP。比例尺=20μm。

图7
mRNA表达水平*美国运通*,*ENAM公司*,*AMBN公司*,*RUNX2（运行2）*,*COL1α2*,*分布式电源*、和*COL4α1*通过实时RT-PCR检查CC板材。使用单独制备的DEC和DMC片材的混合物作为对照。实时RT-PCR数据归一化为*β-肌动蛋白*mRNA。独立实验重复两次。数据表示三份样品的平均值±SD*第页< 0.05. **第页< 0.01.

图8
CC板（×200）的荧光显微镜观察。DAPI（蓝色）用于染色细胞核(A类). 用特异性抗体对COL4进行染色。在DEC层和DMC层边界附近发现COL4表达细胞（绿色）(B类,C类). 比例尺=20μm。

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