Oncogenic HrasG12V expression plus knockdown of Cdkn2a using ecotropic lentiviral vectors induces high-grade endometrial stromal sarcoma

doi:10.1371/journal.pone.0186102

.2017年10月5日；12（10）：e0186102。

doi:10.1371/journal.pone.0186102。 2017年电子收集。

使用嗜生态慢病毒载体的致癌HrasG12V表达加上敲低Cdkn2a诱导高级别子宫内膜间质肉瘤

劳拉·勃兰特^1 2, 约阿希姆·阿尔伯斯¹, 托马斯·赫贾尔¹, 安东尼拉·卡塔拉诺^1 三 4, 彼得·J·怀尔德⁵, 伊恩·J·弗雷^1 2 三 4

附属公司

¹瑞士苏黎世苏黎世大学生理学研究所。
²瑞士苏黎世苏黎世大学苏黎世综合人体生理学中心。
^三德国弗莱堡弗莱堡大学生物信号研究中心。
⁴德国弗莱堡大学医学中心医学院血液学、肿瘤学和干细胞移植内科诊所I。
⁵瑞士苏黎世大学医院病理学和分子病理学研究所。

采购管理信息： 28982163
预防性维修识别码： PMC5628932型
内政部： 10.1371/新闻稿.0186102

癌基因HrasG12V表达加上使用嗜生性慢病毒载体敲除Cdkn2a诱导高级子宫内膜间质肉瘤

劳拉·勃兰特等。公共科学图书馆一号. 2017.

.2017年10月5日；12（10）：e0186102。

doi:10.1371/journal.pone.0186102。 2017年电子收集。

作者

劳拉·勃兰特^1 2, 约阿希姆·阿尔伯斯¹, 托马斯·赫贾尔¹, 安东尼拉·卡塔拉诺^1 三 4, 彼得·J·怀尔德⁵, 伊恩·J·弗雷^1 2 三 4

附属公司

¹瑞士苏黎世苏黎世大学生理学研究所。
²瑞士苏黎世苏黎世大学苏黎世综合人体生理学中心。
^三德国弗莱堡弗莱堡大学生物信号研究中心。
⁴德国弗莱堡大学医学中心医学院血液学、肿瘤学和干细胞移植内科诊所I。
⁵瑞士苏黎世大学医院病理学和分子病理学研究所。

采购管理信息： 28982163
预防性维修识别码： PMC5628932型
内政部： 10.1371/新闻稿.0186102

摘要

子宫体是女性生殖系统中最常见的肿瘤发生部位。子宫肿瘤分为上皮性、间叶性、混合上皮-间叶性或滋养层肿瘤。在本研究中，我们采用小鼠遗传方法，利用MuLE慢病毒基因调控系统，在体内外功能测试嗜生性慢病毒模拟上皮性和间叶性子宫恶性肿瘤的能力。我们发现，当将MuLE慢病毒注射到周期小鼠、假孕小鼠或卵巢切除小鼠的子宫中时，其能有效感染子宫基质细胞，但不会感染子宫内膜上皮细胞。与这种细胞感染谱相一致，我们发现在子宫内注射表达致癌HrasG12V的生态型MuLE病毒，同时敲除Cdkn2a，可诱发高级子宫内膜间质肉瘤。这些发现确立了这种方法是一种有效的方法，可以生成子宫肉瘤的本地小鼠模型，并且通常可以在体内对子宫基质细胞进行遗传操作。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争利益：提交人声明，不存在相互竞争的利益。

数字

**图1。子宫内膜上皮细胞原代培养体系的建立。**
(A类)pEECs对上皮细胞标记物E-CADHERIN、ß-CATENIN和细胞角蛋白-7染色阳性，对基质细胞标记物VIMENTIN染色阴性。亮场图像（10x）标尺：50μm，低倍（20x）标杆：100μm，高倍（63x）标竿：100μm。(B)向BIE补充0.5%FCS可促进增长。BIE：添加胰岛素、EGF、转铁蛋白和亚硒酸钠的基础培养基。比例尺：50μm。(C类)来自*Trp53基因*^{飞行/飞行}感染表达miR-30基shRNA的慢病毒的小鼠和pEECTrp53基因永生，可以扩张但失去上皮形态。比例尺：50μm。

**图2。培养的子宫细胞的慢病毒转导强烈支持基质细胞。**
(A类)Pax8-rtTA介导的强力霉素控制的Cre在Pax8-rtTA中的表达示意图；LC1；ROSA26-lox-stop-lox td番茄小鼠。(B)多西环素激活子宫内膜腺体和管腔上皮细胞中Cre介导的重组，如全器官成像（左图）和冰冻组织切片成像（右图）所示。比例尺：100μm。(C类)从多西环素处理的Pax8-rtTA的子宫中分离pEECs后1、4、6、11和25天的亮场和荧光图像；LC1；ROSA26-lox-stop-lox td番茄小鼠。pEEC在第1天被表达GFP或sh的嗜生态慢病毒感染*Cdkn2a公司*加*赫拉（Hras）*^G12伏和荧光素酶。比例尺：50μm。(D类)sh的能力*Cdkn2a公司*和*赫拉（Hras）*^G12伏-在同种异体移植实验中，转导细胞在47天内形成肿瘤（使用左侧面板中的荧光素酶成像进行可视化）。右侧面板显示使用所示抗体的H&E和免疫组织化学染色。低倍比例尺：1cm，高倍比例杆：100μm。

**图3。基质细胞优先由慢病毒转导体内注入。**
(A类)td宫内注射表达Cre的嗜生态病毒后子宫内的番茄荧光信号。(B)宫内注射带有Cre表达慢病毒和腺病毒的ROSA26-lox-STOP-lox-td番茄小鼠。箭头表示受感染的上皮细胞。比例尺：100μm。CTRL表示未注射的动物。

**图4。*赫拉（Hras）*^G12伏表达式加上的击倒*Cdkn2a型*导致子宫内膜间质肉瘤。**
(A类)同时表达shRNA结合的MuLE载体示意图*Cdkn2a公司*加号表达式*赫拉斯*^G12伏或表达shRNAs对抗*Trp53基因*或铂族或非沉默对照shRNA。所有载体也表达荧光素酶。图中显示了注射每种载体的小鼠数量(B)荧光素酶信号随时间的定量（平均值±SD）†在此时间点之前，牺牲该组中的所有小鼠。(C类)注射表达shRNA的MuLE慢病毒后7、22、28、34和42天，两只小鼠的生物发光成像*Cdkn2a公司*与一起*赫拉（Hras）*^G12伏进入6-8周龄SCID/米色小鼠的子宫。注射小鼠发生肿瘤（n=4），外显率为80%。总生存期中位数为49天。(D类)处死时（注射后第56天），携带肿瘤的子宫的生物发光成像和照片。(E类-**M（M）**)使用所示抗体对两种不同小鼠的肿瘤进行H&E和免疫组织化学染色。低倍比例尺：1mm，高倍比例杆：100μm。

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[9] 子宫内膜癌的基因组学和遗传学。鸽子出版社；2012;第2卷：33–47。数字对象标识：10.2147/AGG。S28953美元-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

[10] 子宫内膜癌的基因组学和遗传学。鸽子出版社；2012;第2卷：33–47。数字对象标识：10.2147/AGG。S28953美元-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

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