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.2017年9月；14(3):2721-2727.
doi:10.3892/etm.2017.4819。 Epub 2017年7月19日。

Tim-3沉默对成纤维细胞样滑膜细胞活性和脂多糖诱导炎症反应的影响

吴锐（Rui Wu） 1, 李龙 1, 陈奇奇（Qiqi Chen） 1, 吴晓丹 1, 京珠 1, 周斌 1, 贾成 1
附属公司

Tim-3沉默对成纤维细胞样滑膜细胞活性和脂多糖诱导炎症反应的影响

吴锐（Rui Wu）等。 实验治疗学. 2017年9月.

摘要

本研究的目的是研究Tim-3沉默对成纤维细胞样滑膜细胞（FLS）的细胞活力和脂多糖（LPS）诱导的炎症反应的影响。采用western blot分析和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测类风湿关节炎（RA）患者和正常对照者FLS中T细胞免疫球蛋白粘蛋白结构域分子（Tim）-3的表达。使用脂质体转染小干扰RNA®2000来降低Tim-3的表达。转染后，LPS刺激FLS。采用MTT分析、RT-PCR和western blot分析分别测定细胞活力、Toll样受体4（TLR4）信号通路相关蛋白表达和炎症细胞因子释放。本研究的结果表明，与健康对照组的FLS相比，RA患者的FLS中Tim-3的表达增加。转染Tim-3 siRNA显著降低RA患者FLS中Tim-3的表达。值得注意的是，Tim-3沉默降低了FLS细胞的活性。LPS刺激后，FLS中的细胞活力和TLR4、髓样分化蛋白基因88（MyD88）和核因子-κB（NF-κB）p65的表达增强。相比之下，Tim-3沉默减弱了LPS诱导的细胞增殖以及TLR4、MyD88和NF-κB p65的表达。此外，LPS显著增加上清液中的细胞因子水平，包括肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ和白细胞介素-6（P<0.01）。相比之下，Tim-3沉默显著降低了LPS诱导的细胞因子释放（P<0.01）。然而，Tim-3沉默并不影响未接受LPS治疗的细胞中TLR4、MyD88和NF-κB p65的表达和细胞因子的释放。因此，本研究结果表明，Tim-3沉默可降低RA中FLS的活性，并减轻LPS诱导的炎症反应。

关键词：T细胞免疫球蛋白粘蛋白结构域分子-3；Toll样受体4；成纤维细胞样滑膜细胞；类风湿关节炎。

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数字

图1。
图1。
RA和NC患者成纤维细胞样滑膜细胞中Tim-3的表达。（A） 蛋白质和（B）mRNA表达。Tim-3，T细胞免疫球蛋白粘蛋白结构域分子-3；类风湿关节炎；NC，正常控制。
图2。
图2。
Tim-3沉默可降低成纤维细胞样滑膜细胞中Tim-3的表达。（A） Tim-3蛋白和GAPDH的代表性印迹，（B）定量，（C）Tim-3 mRNA和GAPDH的代表性条带，（D）定量**与siRNA NC相比P<0.01。数据以平均值±标准偏差表示。Tim-3，T细胞免疫球蛋白粘蛋白结构域分子-3；NC，正常控制；控制；小干扰RNA。
图3。
图3。
Tim-3沉默降低了LPS治疗和未治疗的成纤维细胞样滑膜细胞中Tim-3的表达。（A） 定量的Tim-3蛋白表达的代表性印迹（B）和定量的Tim-3 mRNA表达的代表性条带（D）**P<0.01。数据表示为平均值±标准偏差。Tim-3，T细胞免疫球蛋白粘蛋白结构域分子-3；脂多糖；NC，正常控制；小干扰RNA。
图4。
图4。
各组的OD表明有和无LPS治疗的成纤维细胞样滑膜细胞的活性**P<0.01。数据表示为平均值±标准偏差。OD，光密度；NC，正常控制；Tim-3 T细胞免疫球蛋白粘蛋白结构域分子-3；脂多糖；小干扰RNA。
图5。
图5。
Tim-3沉默可减弱LPS诱导的TLR4、MyD88和NF-κB p65表达增加。（A） TLR4、MyD88、NF-κB p65（A）蛋白和（B）mRNA表达的代表性印迹。TLR4在（C）蛋白和（D）mRNA水平表达的量化数据。MyD88在（E）蛋白和（F）mRNA水平表达的量化数据。（G）蛋白和（H）mRNA水平NF-κB p65表达的量化数据**P<0.01。数据表示为平均值±标准偏差。Tim-3，T细胞免疫球蛋白粘蛋白结构域分子-3；脂多糖；TLR4，Toll样受体4；MyD88，髓系分化蛋白基因88；核因子-κB；NC，正常控制；小干扰RNA。
图6。
图6。
Tim-3沉默可降低LPS诱导的血清中（A）TNF-α、（B）IFN-γ和（C）IL-6水平的升高**P<0.01。数据表示为平均值±标准偏差。Tim-3，T细胞免疫球蛋白粘蛋白结构域分子-3；脂多糖；肿瘤坏死因子-α；干扰素γ、干扰素-γ、IL-6、白细胞介素-6；NC，正常控制；小干扰RNA。
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