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.2017年9月;14(3):1967-1974.
doi:10.3892/etm.2017.4733。 Epub 2017年7月9日。

MicroRNA-138通过抑制EZH2和PI3K/AKT信号通路抑制喉鳞癌细胞增殖

附属公司

MicroRNA-138通过抑制EZH2和PI3K/AKT信号通路抑制喉鳞癌细胞增殖

丰志思等。 实验治疗学. 2017年9月.

缩回

摘要

MicroRNA(miR)-138通常在各种人类癌症类型中具有抑制作用;然而,其在喉鳞状细胞癌(LSCC)中的作用及其潜在机制尚待阐明。本研究评估了miR-138在LSCC进展中的临床意义和调控机制。逆转录定量聚合酶链反应分析表明,miR-138在LSCC组织和细胞系中显著下调。此外,miR-138的表达降低与LSCC分化不良、淋巴结转移和临床分期晚期显著相关。miR-138表达的恢复导致Hep-2 LSCC细胞的增殖显著下降,而miR-138的敲低显著促进Hep-2细胞的增殖。荧光素酶报告基因检测进一步确定zeste同源物2增强子(EZH2)为miR-138的直接靶基因,并且EZH2-的蛋白表达受miR-138-在Hep-2细胞中的负调控。此外,EZH2的过度表达通过激活磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/AKT信号消除了miR-138对Hep-2细胞增殖的抑制作用。此外,发现EZH2在LSCC组织中显著上调,并且与miR-138水平呈负相关。本研究结果表明,miR-138抑制LSCC细胞增殖,至少部分通过靶向EZH2和抑制PI3 K/AKT信号传导。本研究强调了miR-138/EZH2轴在LSCC中的临床意义。

关键词:zeste同源物2的增强子;喉鳞状细胞癌;微RNA;增殖。

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数字

图1。
图1。
采用逆转录定量聚合酶链反应检测miR-138在LSCC组织中的表达,并与邻近非肿瘤组织进行比较**P<0.01 vs.相邻。miR,microRNA;喉鳞状细胞癌。
图2。
图2。
(A) 用RT-qPCR检测miR-138的表达,用MTT法检测转染miR-138mimics或miR-NC的Hep-2细胞的细胞增殖采用MTT法检测转染miR-138抑制剂或NC抑制剂的Hep-2细胞的增殖情况。非转染Hep-2细胞作为对照**与对照组相比,P<0.01。miR,microRNA;NC,阴性对照;miR-NC,加扰miR模拟;RT-qPCR、逆转录定量聚合酶链反应;外径,光密度。
图3。
图3。
(A和B)Targetscan软件表明,EZH2是miR-138的一个靶基因,它们的关联在进化上是保守的。(C和D)为了确认这种靶向关联,生成了包含EZH2 3′-UTR的WT或MT序列的荧光素酶报告载体。(E) 与对照组相比,联合转染WT-EZH2荧光素酶报告载体和miR-138模拟物的Hep-2细胞中的荧光素素酶活性显著降低,而通过转染MT-EZH2-荧光素酶报告载体可消除该活性**与对照组相比,P<0.01。miR,microRNA;UTR,非翻译区,野生型,野生型;MT,突变型;EZH2,zeste同源物2的增强子。
图4。
图4。
(A) Western blot分析检测转染miR-138抑制剂或NC抑制剂的Hep-2细胞中EZH2的蛋白表达。(B) Western blot检测转染miR-138抑制剂或NC抑制剂的Hep-2细胞中EZH2的蛋白表达。非转染Hep-2细胞作为对照**与对照组相比,P<0.01。EZH2,zeste同源物2的增强子;miR,microRNA;NC,阴性对照。
图5。
图5。
用miR-138模拟物转染Hep-2细胞,或与miR-138-模拟物和EZH2表达质粒联合转染。(A) Western blot分析检测EZH2的蛋白表达。(B) 采用MTT法检测细胞增殖。(C和D)Western blot分析检测p-PI3K、t-PI3K,p-AKT和t-AKT的蛋白水平。测定PI3K和AKT的相对活性**与miR-138相比,P<0.01。miR,microRNA;p-PI3 K,磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶;t-AKT,总AKT;OD,光密度;EZH2,zeste同源物2的增强子。
图6。
图6。
(A) 采用逆转录定量聚合酶链反应检测LSCC组织中EZH2的mRNA,并与邻近非肿瘤组织进行比较**P<0.01 vs.相邻。(B) LSCC组织中miR-138的表达与EZH2的mRNA表达呈负相关(P<0.01)。miR,microRNA;喉鳞状细胞癌;EZH2,zeste同源物2的增强子。

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