TLR2 activation induces antioxidant defence in human monocyte-macrophage cell line models

doi:10.18632/oncotarget.17342

.2017年4月21日；8(33):54243-54264.

doi:10.18632/目标17342。 eCollection 2017年8月15日。

TLR2激活诱导人单核巨噬细胞细胞系模型的抗氧化防御

伊沃娜·卡瓦西亚克¹, 米查尔·戈兹基维奇^1 2, 格里戈兹·巴托斯^三, 卢卡斯·普拉斯基^1 三

附属公司

¹波兰罗兹PAS医学生物学研究所转录调控实验室。
²波兰罗兹大学生物与环境科学学院普通生物物理系。
^三波兰罗兹罗兹大学生物与环境科学学院分子生物物理学系。

PMID： 28903338
预防性维修识别码： PMC5589577
内政部： 10.18632/目标17342

TLR2激活诱导人单核巨噬细胞细胞系模型的抗氧化防御

伊沃娜·卡瓦西亚克等。 Oncotarget公司. 2017.

.2017年4月21日；8(33):54243-54264.

doi:10.18632/目标17342。 eCollection 2017年8月15日。

作者

伊沃娜·卡瓦西亚克¹, 米查尔·戈兹基维奇^1 2, 格里戈兹·巴托斯^三, 卢卡斯·普拉斯基^1 三

附属公司

¹波兰罗兹PAS医学生物学研究所转录调控实验室。
²波兰罗兹大学生物与环境科学学院普通生物物理系。
^三波兰罗兹大学生物与环境科学学院分子生物物理系。

PMID： 28903338
预防性维修识别码： PMC5589577
内政部： 10.18632/目标17342

摘要

当单核细胞被招募到炎症/感染部位，渗出并分化为巨噬细胞时，它们会遇到来自外源性和内源性的氧化应激水平增加。在这项研究中，我们的目的是确定是否有特定的生化机制导致分化巨噬细胞抗氧化能力的增加。我们对在体外单核-巨噬细胞分化轴的细胞系模型（分化程度较低的THP-1细胞和分化程度较高的Mono-Mac 6细胞）。同时，我们验证了这样的假设，即病原体激活单核细胞/巨噬细胞固有免疫反应（例如刺激TLR2模式识别受体）将进一步增强细胞抗氧化防御能力。我们发现，在分化期间和TLR2激活后，对外源性氧化应激的抵抗力显著增加。抗氧化性的增加伴随着对细胞蛋白质自由基损伤的减少。在分子水平上，如基因表达分析、Western blotting和酶活性分析所示，这种抗性尤其是通过谷胱甘肽、谷胱甘苷相关抗氧化酶和锰超氧化物歧化酶的水平和活性增加而介导的。此外，在TLR2激活时，额外的分子机制开始发挥作用，即使在分化的巨噬细胞样细胞上也赋予额外的抵抗水平，这主要与硫氧还蛋白连接的抗氧化酶有关。

关键词：区别；巨噬细胞；单核细胞；模式识别受体；氧化还原平衡。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突作者声明没有利益冲突。

数字

**图1。接触过氧化氢后单核细胞/巨噬细胞细胞系的存活率**
THP-1（面板A类,C类)和Mono Mac 6（面板B类,D类)在未分化的情况下（A、B组）或分化后（C、D组）对细胞进行分析。未分化和分化的细胞随后未经处理（空圈）或用500 ng/ml pam3CSK4处理（用于TLR2模拟）24小时（填充圈）。随后，将细胞暴露于指示浓度的过氧化氢中6 h，并用重苏林法测定其活力。数据表示为对照（未暴露于氧化剂）样品中生存率百分比的平均值±S.E.M，n个=5（A、C）或n个=4（B，D）。星号表示TLR2刺激细胞和非刺激细胞之间存在统计显著差异，*第页<*0.05.

**图2。暴露于羟基自由基生成系统后单核细胞/巨噬细胞细胞系的活性**
THP-1（面板A类,C类)和Mono Mac 6（面板B类,D类)按照材料和方法中的描述，在未分化的情况下（A、B组）或分化后（C、D组）对细胞进行分析。未分化和分化的细胞随后未经处理（空圈）或用500 ng/ml pam3CSK4处理（用于TLR2模拟）24小时（填充圈）。随后，将细胞暴露于1:10（摩尔）的氯化铁混合物中₂抗坏血酸作用6h后，用重苏林法测定其活力。指示浓度是指FeCl的浓度₂.数据表示为对照（未暴露于氧化剂）样品中生存率百分比的平均值±S.E.M，n个=3。星号表示TLR2刺激细胞和非刺激细胞之间存在统计显著差异，*第页<*0.05.

**图3。接触百草枯后单核/巨噬细胞细胞系的存活率**
THP-1（面板A类)和Mono Mac 6（面板B类)按照材料和方法中的描述，在未分化或分化后对细胞进行分析。未分化和分化的细胞随后未经处理或用500 ng/ml pam3CSK4处理24小时（用于TLR2模拟）。随后，将细胞暴露于指定浓度的百草枯，并用重氮唑啉法测定其活力。数据显示为对照（未暴露于氧化剂）样品中活力百分比的平均值±S.E.M，n个=3。星号表示所示样本之间存在统计显著差异，*第页<*0.05.

**图4。暴露于活性氧化剂后单核细胞/巨噬细胞细胞系的氧化损伤**
如材料和方法中所述，在未分化或分化后检测THP-1和Mono Mac 6细胞。未分化和分化的细胞随后未经处理或用500 ng/ml pam3CSK4处理24小时（用于TLR2模拟）。随后，细胞暴露于1 mM过氧化氢（面板A类)或1 mM FeCl产生羟基的混合物₂和10 mM抗坏血酸（面板B类)2h后，用荧光素-5-硫代氨基脲法测定蛋白质羰基生成。数据表示为每毫克细胞蛋白羰基nmol的平均值±标准误差，n个= 6. 星号表示所示样本之间存在统计显著差异，*第页<*0.05.

**图5。单核细胞/巨噬细胞系中谷胱甘肽含量**
如材料和方法中所述，在未分化或分化后检测THP-1和Mono Mac 6细胞。未分化和分化的细胞随后未经处理或用500 ng/ml pam3CSK4处理24小时（用于TLR2模拟）。随后，用邻苯二甲醛法测定谷胱甘肽含量。数据表示为谷胱甘肽-苯甲醛加合物荧光的平均值±S.E.M，n个=3。星号表示所示样本之间存在统计显著差异，*第页<*0.05.

**图6。单核/巨噬细胞系谷胱甘肽还原酶活性**
如材料和方法中所述，在未分化或分化后检测THP-1和Mono Mac 6细胞。未分化和分化的细胞随后未经处理或用500 ng/ml pam3CSK4处理24小时（用于TLR2模拟）。随后，用NADPH消耗法测定谷胱甘肽还原酶。数据以任意NADPH消费单位的平均值±标准误差表示，n个=3。星号表示所示样本之间存在统计显著差异，*第页<*0.05.

**图7。单核/巨噬细胞系谷胱甘肽过氧化物酶活性**
如材料和方法中所述，在未分化或分化后检测THP-1和Mono Mac 6细胞。未分化和分化的细胞随后未经处理或用500 ng/ml pam3CSK4处理24小时（用于TLR2模拟）。随后，通过谷胱甘肽还原酶偶联/NADPH消耗法测定谷胱甘苷过氧化物酶。数据以任意NADPH消耗单位的平均值±S.E.M.表示，n个=3。星号表示所示样本之间存在统计显著差异，*第页<*0.05.

**图8。单核/巨噬细胞系中硫氧还蛋白抗氧化系统蛋白质含量**
THP-1（面板A类,C类,E类)和Mono Mac 6（面板B类,D类,F类)按照材料和方法中的描述，在未分化或分化后对细胞进行分析。未分化和分化的细胞随后未经处理或用500 ng/ml pam3CSK4处理24小时（用于TLR2模拟）。随后，用抗硫氧还蛋白（A、B组）、硫氧还毒素还原酶1（C、D组）和过氧还蛋白1（E、F组）的抗体通过Western blotting分析蛋白质含量。数据表示为在同一样品中测定的蛋白质对应的Western blot带强度与β-actin对应的Wester blot带密度之比的平均值±S.E.M.，表示为未分化/未刺激样品的值百分比；n个=3。代表性的斑点图像显示在各个数据点的上方。

**图9。单核细胞/巨噬细胞系中硫氧还蛋白还原酶活性**
如材料和方法中所述，在未分化或分化后检测THP-1和Mono Mac 6细胞。未分化和分化的细胞随后未经处理或用500 ng/ml pam3CSK4处理24 h（用于TLR2模拟）。随后，用DTNB法测定硫氧还蛋白还原酶。数据表示为任意TNB生产单位的平均值±S.E.M，n个=3。星号表示所示样本之间存在统计显著差异，*第页<*0.05.

**图10。单核细胞/巨噬细胞系超氧化物歧化酶蛋白含量**
THP-1（面板A类)和Mono Mac 6（面板B类)按照材料和方法中的描述，在未分化或分化后对细胞进行分析。未分化和分化的细胞随后未经处理或用500 ng/ml pam3CSK4处理24小时（用于TLR2模拟）。随后，用抗超氧化物歧化酶2抗体通过Western blotting分析蛋白质含量。数据表示为在同一样品中测定的蛋白质对应的Western blot带强度与β-actin对应的Wester blot带密度之比的平均值±S.E.M.，表示为未分化/未刺激样品的值百分比；n个=3。代表性的斑点图像显示在各个数据点的上方。星号表示所示样本之间存在统计显著差异，*第页<*0.05.

**图11。单核细胞/巨噬细胞系中的超氧化物歧化酶活性**
如材料和方法中所述，在未分化或分化后检测THP-1和Mono Mac 6细胞。未分化和分化的细胞随后未经处理或用500 ng/ml pam3CSK4处理24小时（用于TLR2模拟）。随后，用硝基蓝四氮唑法测定超氧化物歧化酶。数据表示为任意蓝色formazan生产单位的平均值±S.E.M，n个=3。星号表示所指示的样本之间的统计学显著差异，*第页<*0.05.

**图12。ORAI钙通道亚型在单核细胞/巨噬细胞系中的表达**
如材料和方法中所述，在未分化或分化后检测THP-1和Mono Mac 6细胞。未分化和分化的细胞随后未经处理或用500 ng/ml pam3CSK4处理6小时（用于TLR2模拟）。随后，*ORAI1公司*(A类)和*ORAI3公司*(B类)采用实时RT-PCR方法在mRNA水平上检测基因表达。数据表示为每1000份平均参考mRNA的相对mRNA拷贝数，按2计算^-∆Ct转换，表示为平均值±转换的上S.E.M。；n个=3。星号表示所示样本之间存在统计显著差异，*第页<*0.05.

**图13。THP-1细胞中的TLR2激活增加了Nrf2蛋白水平**
如材料和方法所述，在未分化或分化后检测THP-1细胞。未分化和分化的细胞随后未经处理或用500 ng/ml pam3CSK4处理（用于TLR2模拟）指定的时间段。随后，用胞质中抗Nrf2抗体的Western blotting分析蛋白质含量(A类)和核能(B类)按材料和方法中所述分离的馏分。数据以代表性的印迹图像和在同一样品中测定的蛋白质对应的Western印迹带强度与β-actin（A）或TBP（B）对应的Wester印迹带密度之比的平均值±S.E.M.图表示；n个=3。星号表示样本和非刺激对照之间存在统计显著差异，*第页<*0.05.

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

人类单核细胞/巨噬细胞初级分化和脂多糖介导的激活过程中G蛋白偶联受体表达的mRNA图谱确定了炎症的靶向候选调节因子。
Hohenhaus DM、Schaale K、Le Cao KA、Seow V、Iyer A、Fairlie DP、Sweet MJ。 Hohenhaus DM等人。免疫生物学。2013年11月；218(11):1345-53. doi:10.1016/j.imbio.2013.07.001。Epub 2013年7月15日。免疫生物学。2013 PMID：23948647
Toll样受体1和6参与丙型肝炎病毒核心蛋白和NS3蛋白TLR2介导的巨噬细胞活化。
Chang S、Dolganiuc A、Szabo G。 Chang S等人。白细胞生物学杂志。2007年9月；82(3):479-87. doi:10.1189/jlb.0207128。Epub 2007年6月26日。白细胞生物学杂志。2007 PMID：17595379
霍乱弧菌孔蛋白OmpU通过TLR1/TLR2激活介导巨噬细胞/单核细胞的M1极化。
Khan J、Sharma PK、Mukhopadhaya A。 Khan J等人。免疫生物学。2015年11月；220(11):1199-209. doi:10.1016/j.imbio-2015.06.009。Epub 2015年6月5日。免疫生物学。2015 PMID：26093918
氧化应激诱导癌症中的自由基、金属和抗氧化剂。
Valko M、Rhodes CJ、Moncol J、Izakovic M、Mazur M。 Valko M等人。化学生物相互作用。2006年3月10日；160(1):1-40. doi:10.1016/j.cbi.2005.12.009。Epub 2006年1月23日。化学生物相互作用。2006 PMID：16430879 审查。
缺氧环境中的单核细胞和树突状细胞：趋化性和迁移聚焦。
Bosco MC、Puppo M、Blengio F、Fraone T、Cappello P、Giovarelli M、Varesio L。 Bosco MC等人。免疫生物学。2008;213(9-10):733-49. doi:10.1016/j.imbio.2008.07.031。Epub 2008年9月21日。免疫生物学。2008 PMID：18926289 审查。

查看所有类似文章

引用人

塞拉多和潘塔纳尔水果粉影响健康和新冠肺炎后个体的肠道微生物群组成：在体外中试发酵研究。
Mauro CSI、Hassani MK、Barone M、Esposito MT、Calle Y、Behrends V、Garcia S、Brigidi P、Turroni S、Costabile A。 Mauro CSI等人。国际食品科学技术杂志。2023年1月14日：10.1111/ijfs.16274。doi:10.1111/ijfs.16274。打印前在线。国际食品科学技术杂志。2023 PMID：36721386 免费PMC文章。
抗坏血酸和环丙沙星通过TLR-2和糖皮质激素受体调节调节金黄色葡萄球菌诱导的小胶质细胞炎症反应和氧化应激。
Dey R、Bishayi B。 Dey R等人。炎症药理学。2022年8月；30(4):1303-1322. doi:10.1007/s10787-022-0112-z。电子出版2022年6月15日。炎症药理学。2022 PMID：35704229
植物血凝素和2,4,6-三硝基苯酚对人单核细胞的细胞内炎症信号级联作用。
Prajitha N，Mohanan光伏。 Prajitha N等人。分子细胞生物化学。2022年2月；477(2):395-414. doi:10.1007/s11010-021-04296-x.电子出版2021年11月13日。分子细胞生物化学。2022 PMID：34775567
微量元素硒对Phorbol酯分化的THP-1巨噬细胞中的氧化还原信号传导很重要。
Wolfram T、Weidenbach LM、Adolf J、Schwarz M、Schädel P、Gollowitzer A、Werz O、Koeberle A、Kipp AP、Koeberre SC。 Wolfram T等人。国际分子科学杂志。2021年10月14日；22(20):11060. doi:10.3390/ijms222011060。国际分子科学杂志。2021 PMID：34681720 免费PMC文章。
LSD1通过抑制过氧化氢酶促进巨噬细胞的前炎症极化。
Sobczak M、Strachowska M、Gronkowska K、Karwaciak I、PułaskiŁ、Robaszkiewicz A。 Sobczak M等人。细胞。2021年9月18日；10(9):2465. doi:10.3390/cells10092465。细胞。2021 PMID：34572113 免费PMC文章。

查看所有“被引用”文章

工具书类

1. Rees AJ。单核细胞和巨噬细胞生物学：概述。塞米恩·内弗罗。2010;30:216–33. doi:10.1016/j.semnerol.2010.03.002。-DOI程序-公共医学
1. Lauvau G，Choro L，Spaulding E，Soudja SM。炎症单核细胞效应机制。细胞免疫学。2014;291:32–40。doi:10.1016/j.cellimm.2014.07.007。-DOI程序-项目管理咨询公司-公共医学
1. Wang X，Spandidos A，Wang H，Seed B.PrimerBank:定量基因表达分析的PCR引物数据库，2012年更新。《核酸研究》2012；40:D1144–9。doi:10.1093/nar/gkr1013。-DOI程序-项目管理咨询公司-公共医学
1. Ray PD，Huang BW，Tsuji Y.细胞信号中的活性氧（ROS）稳态和氧化还原调节。细胞信号。2012;24:981–90. doi:10.1016/j.cellsig.2012.01.008。-DOI程序-项目管理咨询公司-公共医学
1. 哈里维尔B.细胞培养、氧化应激和抗氧化剂：避免陷阱。《生物医学杂志》2014；37:99–105. doi:10.4103/2319-4170.128725。-DOI程序-公共医学

[1] Rees AJ。单核细胞和巨噬细胞生物学：概述。塞米恩·内弗罗。2010;30:216–33. doi:10.1016/j.semnerol.2010.03.002。-DOI程序-公共医学

[2] Rees AJ。单核细胞和巨噬细胞生物学：概述。塞米恩·内弗罗。2010;30:216–33. doi:10.1016/j.semnerol.2010.03.002。-DOI程序-公共医学

[3] Lauvau G，Choro L，Spaulding E，Soudja SM。炎症单核细胞效应机制。细胞免疫学。2014;291:32–40。doi:10.1016/j.cellimm.2014.07.007。-DOI程序-项目管理咨询公司-公共医学

[4] Lauvau G，Choro L，Spaulding E，Soudja SM。炎症单核细胞效应机制。细胞免疫学。2014;291:32–40。doi:10.1016/j.cellimm.2014.07.007。-DOI程序-项目管理咨询公司-公共医学

[5] Wang X，Spandidos A，Wang H，Seed B.PrimerBank:定量基因表达分析的PCR引物数据库，2012年更新。《核酸研究》2012；40:D1144–9。doi:10.1093/nar/gkr1013。-DOI程序-项目管理咨询公司-公共医学

[6] Wang X，Spandidos A，Wang H，Seed B.PrimerBank:定量基因表达分析的PCR引物数据库，2012年更新。《核酸研究》2012；40:D1144–9。doi:10.1093/nar/gkr1013。-DOI程序-项目管理咨询公司-公共医学

[7] Ray PD，Huang BW，Tsuji Y.细胞信号中的活性氧（ROS）稳态和氧化还原调节。细胞信号。2012;24:981–90. doi:10.1016/j.cellsig.2012.01.008。-DOI程序-项目管理咨询公司-公共医学

[8] Ray PD，Huang BW，Tsuji Y.细胞信号中的活性氧（ROS）稳态和氧化还原调节。细胞信号。2012;24:981–90. doi:10.1016/j.cellsig.2012.01.008。-DOI程序-项目管理咨询公司-公共医学

[9] 哈里维尔B.细胞培养、氧化应激和抗氧化剂：避免陷阱。《生物医学杂志》2014；37:99–105. doi:10.4103/2319-4170.128725。-DOI程序-公共医学

[10] 哈里维尔B.细胞培养、氧化应激和抗氧化剂：避免陷阱。《生物医学杂志》2014；37:99–105. doi:10.4103/2319-4170.128725。-DOI程序-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

您的RSS源

TLR2激活诱导人单核巨噬细胞细胞系模型的抗氧化防御

附属公司

TLR2激活诱导人单核巨噬细胞细胞系模型的抗氧化防御

作者

附属公司

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

相关信息