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.2017年8月29:9:281。
doi:10.3389/fnagi.2017.00281。 2017年电子收集。

HIV抗逆转录病毒治疗药物对星形胶质细胞衰老和代谢的影响

贾斯廷·科汉 1, 卢卡·达戈斯蒂诺 1, 乔尔·威尔逊 1, 费里特·图泽 1, 克劳迪奥·托雷斯 1
附属公司

HIV抗逆转录病毒治疗药物对星形胶质细胞衰老和代谢的影响

贾斯廷·科汉等。 前老化神经科学. .

摘要

随着高效抗逆转录病毒治疗（HAART）的出现，艾滋病毒感染者的存活率有所提高。然而，尽管存活率增加，但HIV-相关神经认知障碍（HAND）仍持续存在，这表明HAART-drugs可能在HIV感染患者的神经认知障碍中发挥作用。鉴于先前的数据表明星形胶质细胞衰老在阿尔茨海默病（AD）等神经认知障碍中起作用，我们在人类星形胶质细胞（HA）原代培养物中检测了HAART对衰老标记物的作用。我们的结果表明，HAART治疗可诱导细胞周期阻滞、衰老相关β-半乳糖苷酶和细胞周期抑制剂p21。高效抗逆转录病毒治疗还与诱导活性氧物种和上调线粒体耗氧量有关。线粒体的这些变化与HAART药物治疗的星形胶质细胞糖酵解增加有关。综上所述，这些结果表明，HAART药物可诱导HA中的衰老程序，该程序与氧化和代谢变化有关，可能在HAD的发展中发挥作用。

关键词：HIV；HIV相关神经认知障碍；星形胶质细胞；细胞衰老；糖酵解；高效抗逆转录病毒疗法。

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数字

图1
图1
HAART药物治疗的人类星形胶质细胞（HAs）中衰老标记物的表达。用以下HAART浓度处理人类星形胶质细胞：阿巴卡韦（ABC）10μM、拉米夫定（3TC）5μM和利托那韦（RTV）1μM，持续7天（A–D）或4天（E）在完全星形胶质细胞培养基中。（A）细胞增殖。（B）HAART治疗1周后，SAβ-gal染色20×HA，显示典型的SAβ-ga图像。（C）B.的量化。（D） 左侧-说明衰老标记p16和p21蛋白水平的代表性Western blot。赖特-斑点定量。（E）活力，在流式细胞术检测之前，用番石榴Viacount试剂培养星形胶质细胞5分钟。∗第页-值<0.05，n个=3，误差条为SD。
图2
图2
HAART药物治疗HA的分泌概况。用以下HAART浓度处理人类星形胶质细胞：ABC 10μM、3TC 5μM和RTV 1μM，持续1周。（A）衰老相关分泌表型（SASP）分析。星形胶质细胞在MCBD105培养基中培养24小时以产生条件培养基（CM）。通过在细胞因子膜阵列上培养CM来检测分泌情况，并将其归一化为细胞数量。值与DMSO控件相关。（B）IL-6定量。CM的收集方式为（A）并通过ELISA对IL-6进行定量。（C）典型的Western blot显示炎症介质p38和p65的磷酸化蛋白水平。总p38、总p65和微管蛋白用作负荷控制。（D）量化（C）.∗第页-值<0.05，n个=3，误差条为SD。
图3
图3
HAART药物诱导HA中的总ROS和线粒体ROS。在检测之前，用ABC 10μM、3TC 5μM和RTV 1μM处理人类星形胶质细胞1周。（A）通过与MitoSox孵育30分钟，然后在流式细胞仪上进行定量，测量线粒体活性氧。条形图显示了平均强度。（B）数据的代表直方图（A）.（C）通过与DCF-DA孵育30分钟，然后在流式细胞仪上进行定量，测量总活性氧。条形图显示平均强度。（D）数据的代表直方图（C）.∗第页-值<0.05，n个=5，误差条为SD。
图4
图4
HAART药物诱导线粒体呼吸。在分析之前，用以下HAART药物浓度：ABC 10μM、3TC 5μM和RTV 1μM处理人类星形胶质细胞1周。HAART治疗后，在海马XF24生物分析仪上使用XF细胞Mito应激测试试剂盒测量耗氧量，以获取耗氧量。（A）代表性Seahorse录音。（B–E）所示耗氧率组件的条形图。（F）使用Seahorse XF24生物分析仪组进行酸化测量，以测量细胞外酸化率。∗第页-值<0.05，五个独立的重复，误差条为SD。
图5
图5
HAART药物对线粒体质量和线粒体膜电位的影响。在检测之前，用ABC 10μM、3TC 5μM和RTV 1μM处理人星形胶质细胞1周。（A）典型的蛋白质印迹显示线粒体电子传递链复合物的蛋白质水平。（B）量化A类.（C）线粒体质量，细胞与有丝分裂跟踪器孵育30分钟，然后通过流式细胞仪进行定量，如左图所示。右边是流式细胞术前20倍荧光的代表性显微镜。（D）TMRE，细胞与TMRE孵育30分钟，然后通过流式细胞仪进行定量。∗第页-值<0.05，n个=3，误差条为SD。
图6
图6
HAART治疗对星形胶质细胞代谢的影响。在检测之前，用ABC 10μM、3TC 5μM和RTV 1μM处理人星形胶质细胞1周。（A）与2-NDBG孵育30分钟后，通过流式细胞仪测量葡萄糖摄取。（B）蛋白质印迹显示谷氨酸1和谷氨酸3的蛋白质水平。（C）B.的量化。（D–F）代谢物测量，代谢物从HAART处理的细胞和未经人类代谢组技术公司处理的细胞中使用毛细管电泳质谱进行定量。∗第页-值<0.05，n个=3，误差条为SD。
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