跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2018年1月11日；37（2）：174-184。
doi:10.1038/onc.2017.318。 Epub 2017年9月11日。

PRP4K的缺失在一定程度上通过表皮生长因子受体内体转运的失调来驱动失巢凋亡抵抗

D P Corkery公司 1 2, L E克拉克 2, S Gebremeskel公司 三, J萨尔斯曼 2, J品德 2, C乐页 4, L Meunier公司 4, Z Xu先生 2, A-M Mes-Masson公司 4 5, J N伯曼 2 三 6 7, B约翰斯顿 2 三 7 8, G德莱尔 1 2 7
附属公司

PRP4K的缺失在一定程度上通过表皮生长因子受体内体运输的失调来驱动失巢细胞耐药性

D P Corkery公司等。 癌基因. .

摘要

Anoikis通过在癌细胞从细胞外基质（ECM）中分离时诱导细胞死亡，从而阻止肿瘤细胞向次级部位扩散，从而成为转移的关键屏障。失巢凋亡的诱导需要溶酶体介导的表皮生长因子受体（EGFRs）的下调，导致促生存信号的终止。在这项研究中，我们证明前mRNA剪接因子4激酶（PRP4K；也称为PRPF4B）的缺失会导致EGFR转运的失调和失巢凋亡抵抗。我们还报道了PRP4K在晚期内体的一种新的细胞质定位，并证明了其在乳腺癌、肺癌和卵巢癌组织中的核质定位。从机制上讲，PRP4K的缺失导致细胞从ECM分离后EGFR降解减少，并与TrkB、vimentin和Zeb1表达增加相关。因此，PRP4K的缺失促进了体外和新型斑马鱼异种移植模型中持续的生长因子信号传导，增加了细胞对失巢凋亡的抵抗力，并增加了卵巢癌小鼠模型的转移。因此，PRP4K可能是卵巢癌和其他上皮癌中失巢蛋白敏感性的潜在生物标记物。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
PRP4K的细胞质定位。(一)乳腺、高级别浆液性卵巢癌和肺癌组织芯片中核和细胞质PRP4K的代表性免疫染色。比例尺，100微米。(b条)希拉牌手表三叶草-PRP4K使用CRISPR/Cas9介导的三叶草标签敲入到PRPF4B型基因位点。来自亲代HeLa和HeLa的裂解物三叶草-PRP4K细胞进行GFP-trap亲和纯化，并通过蛋白印迹分析PRP4K。(c（c）)希拉牌手表三叶草-PRP4K细胞用载体或50 μ米氯喹（CQ）过夜，并使用抗GFP抗体（绿色）通过免疫荧光共聚焦显微镜进行分析。细胞核用DAPI染色，并用虚线表示。比例尺，10微米。白色实线表示线扫描，右侧显示相应的线图。绿线=PRP4K。蓝线=DAPI。箭头表示细胞质PRP4K信号。
图2
图2
氯喹处理后PRP4K与晚期内体标记物共定位。为了确定PRP4K是否定位于细胞质内的内吞运输途径的一个组成部分，HeLa三叶草-PRP4K用氯喹处理细胞过夜，并使用GFP抗体（绿色）和指示的内体标记物（红色）通过免疫荧光共聚焦显微镜进行分析。全细胞图像是在0.4时捕获的20个共焦截面的z叠加投影 μm间隔。比例尺，10微米。白色方框勾勒出右侧放大倍率较高的区域。放大后的图像显示为单个z切片。白色实线表示线扫描，相应的线图显示在右侧。绿线=PRP4K。红线表示内体标记。
图3
图3
PRP4K调节依赖EGF的EGFR降解。(一)HeLa shCTRL、shPRP4K-1和shPRP4K-2细胞隔夜血清饥饿，并用50 30和90 ng/ml EGF 分钟。细胞固定，并使用抗磷酸-EGFR（绿色）抗体通过免疫荧光共聚焦显微镜进行分析。细胞核用DAPI（蓝色）染色。白色方框勾勒出下面放大倍率增加的单元格。比例尺，10微米。(b条)将HeLa shCTRL、shPRP4K-1和shPRP4K-2细胞血清饥饿过夜，并用50 ng/ml EGF，持续指定的时间段。制备全细胞裂解物，并使用所示抗体进行western blot分析。(c（c）)细胞质磷酸化-EGFR（pEGFR）水平（90 EGF刺激后的min），其中在30时通过免疫荧光显微镜定量为pEGFR染色的百分比 每个细胞系EGF后min。散点图中的点表示12个视场中每个细胞的所有细胞质pEGFR点的平均荧光强度之和（在0.4 μm间隔），其中每个视野包含20–25个细胞。误差线=s.e.m***P（P）<0.001. (d日)EGFR蛋白水平（90 用western blot密度测定法定量EGF刺激后min），并将其归一化为0 HeLa shCTRL、shPRP4K-1和shPRP4K-2细胞中的最小值。散点图表示三个独立实验的数据。误差线=s.d*P（P）<0.05; **P（P）<0.01。(e（电子）)P-Akt水平通过密度测定法定量，并表示为三个独立实验的平均值。误差线=s.d*P（P）<0.05; ***P（P）<0.001.
图4
图4
PRP4K的缺失通过持续的RTK信号促进ID8卵巢癌细胞对失巢凋亡的抵抗。(一)用对照或PRP4K靶向shRNA慢病毒载体转导ID8细胞，以生成稳定表达所示发夹的细胞系。western blot分析证实了PRP4K的敲除。(b条)体外增殖率由电镀50测定 每个细胞系有1000个细胞，每24个细胞计数一次 h.数据表示为四个独立实验±标准差的平均值(c（c）)ID8 shCTRL和shPRP4K细胞系作为贴壁单层培养或悬浮在聚HEMA涂层板上24小时 h.收集细胞，并使用所示抗体进行western blot分析。(d日)24小时后贴壁和悬浮生长条件下凋亡细胞的频率 h通过流式细胞仪Annexin-V染色定量。误差线=s.e.m(N个=4). *P（P）<0.05 (e（电子）)在非粘附条件下，相对于72岁以上的粘附细胞生长，细胞活力也得到了确定 h通过AlamarBlue染色。误差线=s.d(N个=4). 通过双向方差分析确定显著性****P（P）<0.0001(（f）)培养7天后ID8球体的代表性图像（上图）。比例尺，250 微米。采集单个球体，进行胰蛋白酶消化，并将其置于6孔板中。在培养5天后，固定菌落并用结晶紫染色。代表性图像显示了三种细胞系中每一种的菌落生长（底部）。(克)使用ImageJ对来自三个独立实验的染色菌落进行计数，并表示为平均菌落数。误差线=s.d*P（P）<0.05; ***P（P）<0.001.
图5
图5
PRP4K的缺失促进MCF-7乳腺癌细胞对失巢凋亡的抵抗。(一)用对照或PRP4K靶向shRNA慢病毒载体转导MCF-7细胞，以生成稳定表达所示发夹的细胞系。western blot分析证实了PRP4K的敲除。(b条)体外增殖率通过接种50 每个细胞系有1000个细胞，每24个细胞计数一次 h.数据表示为四个独立实验±标准差的平均值(c（c）)将MCF-7 shCTRL和shPRP4K细胞系作为贴壁单层培养或悬浮在聚HEMA涂层板上24小时 h.收集细胞，并使用所示抗体进行western blot分析。(d日)24小时后贴壁和悬浮生长条件下凋亡细胞的频率 h通过流式细胞仪Annexin-V染色定量。误差线=s.e.m(N个=4). ****P（P）<0.0001. (e（电子）)在非粘附条件下，相对于72岁以上的粘附细胞生长，细胞活力也得到了确定 h通过AlamarBlue染色。误差线=s.d(N个=4). 通过双向方差分析确定显著性****P（P）<0.0001.
图6
图6
在斑马鱼异种移植模型中，敲除PRP4K可增加ID8增殖。(一)斑马鱼胚胎在24和72岁时的典型亮场、荧光和合并图像 ID8 shCTRL或ID8 shPRP4K-1细胞注射后h（hpi）。(b条)ID8 shCTRL和shPRP4K-1植入胚胎在24和72时分离 hpi和荧光细胞计数。细胞数量的折叠变化被确定并表示为散点图，每个点代表一个独立的实验。每个数据点使用15-20个胚胎的集合组。误差线=s.d*P（P）<0.05.
图7
图7
在卵巢癌同基因小鼠模型中，敲除PRP4K会增加转移。(一)注射ID8 shCTRL或ID8 shPRP4K细胞后28天（dpi）小鼠膈肌和腹膜壁肿瘤的典型图像。(b条,c（c）)膈肌和腹膜壁上的肿瘤结节在两个独立的实验中定量，每组使用5只小鼠。(d日)在28 dpi和GFP数量下，从5只ID8 shCTRL和5只ID8shPRP4K注射小鼠中获取腹水+流式细胞术检测细胞数量。(e（电子）)GFP公司+在28 dpi时，从注射ID8 shCTRL细胞（ID8 ip1-4）的单个小鼠中回收ID8细胞。细胞在非粘附条件下培养0或72 h并在粘附的6孔板上重新电镀。代表性图像显示了每个细胞系的菌落生长。(（f）,克)在三个独立实验中，相对于粘附条件，对在非粘附条件下生长的腹水衍生ID8细胞的集落数和集落面积进行量化。(小时)从ID8和ID8-ip细胞系制备总细胞裂解物，并对所指示的蛋白质进行蛋白质印迹分析。(我)Western blot分析患者衍生的原发性高级别浆液性卵巢癌（HGSC）肿瘤“T”和匹配腹水“A”中PRP4K蛋白水平，其中肿瘤和腹水之间的PRP4K相对水平在肌动蛋白正常化后显示（比率）*P（P）<0.05; **P（P）<0.01; ns=不显著。
图8
图8
PRP4K的过度表达或扩增(PRPF4B型)与高级别浆液性卵巢癌（HGSC）总生存率显著增加相关。卡普兰-迈耶分析TCGA卵巢癌研究的数据（从http://www.cbioportal.org/2017年6月3日）表明HGSC患者的总体生存率显著提高(一)过度曝光PRPF4B型(N个=29，大于2 s.d.表达PRPF4B型相对于平均值；P（P）<0.02危险比2.0（95%置信区间：1.3至3.1），或(b条)港口扩建PRPF4B型基因(N个=18;P（P）<0.01危险比为3.5（95%CI:2.0-6.1）。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Frisch SM，Francis H.上皮细胞-基质相互作用的破坏诱导凋亡。细胞生物学杂志1994；124: 619–626.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Frisch SM、Ruoslahti E.整合素和失基蛋白。《Curr Opin细胞生物学》1997；9: 701–706.-公共医学
    1. Giancotti FG.整合素信号的复杂性和特异性。Nat Cell Biol 2000；2:E13–E14。-公共医学
    1. Gabarra-Niecko V，Schaller MD，Dunty JM。FAK调节对癌症发病机制至关重要的生物过程。癌症转移评论2003；22: 359–374.-公共医学
    1. Moro L、Venturino M、Bozzo C、Silengo L、Altruda F、Beguinot L等。整合素诱导EGF受体活化：在MAP激酶诱导和粘附依赖性细胞存活中的作用。EMBO J 1998；17: 6622–6632.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语