跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

该站点是安全的。
这个https：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2017年8月21日；7(1):8412.
doi:10.1038/s41598-017-08688-2。

青光眼与纤溶酶蛋白水解激活有关，纤溶酶蛋白水解激活是通过神经萜蛋白的氧化失活介导的

魏维克·古普塔 1, 梅赫迪·米尔扎伊 2, 韦尔·巴拉·古普塔 三, 尼廷·奇特拉西 4, Yogita Dheer公司 4, Roshana Vander墙 4, 莫杰德·阿巴斯 4, 余毅游 5, 罗杰·钟 4, 斯图亚特·格雷厄姆 4 5
附属公司

青光眼与神经萜氧化失活介导的纤溶酶蛋白水解激活有关

魏维克·古普塔等。 科学代表. .

摘要

Neuroserpin是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，可调节神经组织中纤溶酶及其激活剂的活性。这项研究提供了新的证据，证明了神经肽对青光眼视网膜中纤溶酶蛋白水解酶活性的调节作用。对来自对照组和青光眼受试者的人视网膜和玻璃体组织以及来自实验性青光眼大鼠的视网膜进行分析，以确定纤溶酶和神经肽活性的变化。神经蛇蛋白在青光眼中经历氧化失活，导致纤溶酶活性增强。Neuroserpin除了含有保守的反应位点蛋氨酸外，还含有几个蛋氨酸残基，我们的研究表明，青光眼条件下，蛇蛋白中的蛋氨酸残基可被氧化。Met氧化与神经萜抑制活性的丧失有关，在氧化应激增加的超氧化物歧化酶（SOD）突变小鼠的视网膜中观察到类似的结果。用H2O2处理纯化的神经萜，进一步证明Met氧化与其纤溶酶抑制活性呈负相关。纤溶酶蛋白水解酶系统的失调与视网膜中细胞外基质（ECM）蛋白的降解增加有关。总之，这些发现描绘了纤溶酶在青光眼中激活的新的分子基础，并可能用于其他与疾病相关的ECM重塑有关的神经元疾病。

PubMed免责声明

利益冲突声明

提交人声明他们没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
(A类)Western印迹显示神经萜蛋白在人视网膜、玻璃体和ONH中的表达，以及神经萜蛋白带强度的密度定量（n = 6; *对 < 0.05). (B类)使用抗神经肽抗体（SC32947）从人类视网膜、玻璃体和ONH样品中免疫沉淀Neuroserpin，并使用另一种神经肽抗体检测神经肽免疫反应性的印迹（SC48360）。在每种情况下使用非反应性IgG以及相应的组织裂解物作为对照。(C类)用明胶凝胶酶谱法评估从人视网膜、玻璃体和ONH中免疫沉淀的神经肽的质粒抑制活性。(D–F型)使用从对照组和青光眼受试者（n = 12). 印迹被裁剪以显示相关的带。定量并绘制WB中谱带的相对强度。肌动蛋白被用作每个WB的内部负荷控制。
图2
图2
(A类)使用免疫印迹法和定量的相对带强度（n = 6; *对 < 0.01). (B–D类)使用western blotting和定量绘制的相对谱带强度（n = 5个）。印迹被裁剪以显示相关的带。在每种情况下，肌动蛋白用于加载归一化。
图3
图3
对来自对照组和高眼压大鼠的大鼠视网膜裂解物进行western印迹并检测(A类)神经肽和(B类)纤溶酶免疫反应。肌动蛋白被用作负荷控制。印迹被裁剪以显示相关的带。在这两种情况下，WB谱带的相对强度均被量化并绘制（n = 5个）。(C类)对照组和微球诱导的高眼压大鼠视网膜切片的双重免疫染色，显示了不同视网膜层（Blue-DAPI）中神经萜（红色）和纤溶酶原（绿色）的表达和定位。（n） = 5; 比例50 微米）。(D类)在GCL和INL中，使用ImageJ程序量化切片中神经萜和纤溶酶免疫反应的相对荧光强度，并绘制图表。
图4
图4
在来自(A类)人类视网膜(B类)玻璃质和(C类)两个对照组的ONH样品（n = 12） 和青光眼眼（n = 12） 以与时间相关的方式（0–300 分钟）和绘制的数据。使用变构S型曲线拟合数据，并进行回归分析。(D–E型)使用图A-C中的数据，重新绘制对照组和青光眼样本视网膜、玻璃体和ONH组织中的纤溶酶蛋白水解活性变化，以进行比较。(F类)在大鼠视网膜裂解物中测量了依赖时间的纤溶酶蛋白水解活性变化（0-300 分钟） = 5） 和高IOP（n = 5） 眼睛和数据绘制。虚线表示乙状变构回归分析（*p < 0.05).
图5
图5
Neuroserpin免疫沉淀自(A类)人视网膜(B类)玻璃质和(C类)ONH组织裂解物使用抗神经萜抗体并进行明胶酶谱分析，以评估神经萜（n = 6个）。(D类)对来自对照组和高眼压大鼠视网膜的免疫沉淀神经肽进行明胶凝胶酶谱分析，以评估其纤溶酶抑制活性（n = 5). 免疫沉淀物也被加载用于western blotting，并在每个病例中发展用于神经肽免疫反应。印迹被裁剪以显示相关的带。对相对带强度进行了量化，数据分析表明，与相应的对照组相比，人类玻璃体和ONH青光眼样品以及高眼压诱导的大鼠视网膜中的纤溶酶抑制活性显著降低（*p < 0.05; **对 < 0.01).
图6
图6
Neuroserpin免疫沉淀自(A类)控制和青光眼人类和(B类)对照组和高眼压大鼠视网膜。洗脱的免疫沉淀物进行免疫印迹，并使用纤溶酶和神经萜抗体进行检测。仅人类视网膜裂解物也作为对照。质粒免疫沉淀自(C类)人类和(D类)来自对照和青光眼样品的大鼠视网膜裂解物以及相应的IgG对照免疫沉淀。将人和大鼠视网膜裂解物分别装入C和D中。洗脱后，对免疫沉淀物进行western印迹，并使用纤溶酶和神经肽抗体进行检测。在人类和大鼠青光眼视网膜样品中均观察到与神经肽酶复合物形成相关的高分子量条带（箭头所示）。裁剪了斑点以显示相关的条纹。
图7
图7
Neuroserpin从对照组和青光眼患者中免疫沉淀(A类)人类视网膜(B类)玻璃质的(C类)大鼠视网膜。免疫沉淀被印迹并检测蛋氨酸亚砜免疫反应性。每个病例的印迹也用抗神经鞘蛋白抗体进行了检测。裁剪印迹以显示相关的条带。对每种情况下的相对带强度进行量化并绘制（n = 4; *对 < 0.001). (D类)对照组和高眼压诱导的大鼠视网膜切片用IgG对照组或met亚砜抗体（红色）、DAPI（蓝色）进行免疫染色。箭头（白色）突出显示高眼压大鼠视网膜内层met亚砜染色增加。截面中met亚砜反应性的平均相对荧光强度（n = 4） 使用ImageJ对视网膜的GCL和INL进行量化，并使用学生t检验进行比较，并用标准偏差和误差线（标度50 微米，*p < 0.04).
图8
图8
纯化神经萜（5 µg）和来自正常人视网膜的免疫沉淀神经肽（200 µg蛋白质），有或没有H2O2处理（10 µM，1小时）(A类)明胶酶谱分析纤溶酶抑制活性和(C类)免疫印迹检测met亚砜反应性。(B类) (D类)将纤溶酶抑制活性和met亚砜反应性的变化与每个病例中的总神经萜蛋白印迹进行比较，并量化和绘制密度测定数据（**p < 0.01).
图9
图9
对WT和SOD突变小鼠的视网膜裂解物进行免疫印迹并开发用于(A类)蛋氨酸亚砜和(B类)神经肽反应性（n = 4). 肌动蛋白被用作每个病例正常化的内部控制。(C类)在SOD突变小鼠的视网膜切片中观察到甲基亚砜免疫荧光增强（红色），结果与野生型动物以及与对照IgG抗体（达比蓝）孵育的切片相比。使用ImageJ和绘制的数据在GCL和INL中定量WT和SOD切片中met亚砜反应性的相对荧光强度（标度50 微米 = 4，*p < 0.05). (D类)进行纤溶酶蛋白水解酶测定（0-300 分钟）从WT和SOD突变视网膜获得的视网膜裂解物中提取，并绘制（n = 4). 虚线表示乙状变构回归分析（*p < 0.05). (E类)对来自WT和SOD突变小鼠视网膜的Neuroserpin免疫沉淀物以及视网膜裂解物进行met亚砜免疫反应性的蛋白质印迹。(F类)在用抗神经肽抗体从WT和SOD突变小鼠视网膜裂解物中进行免疫沉淀后，对免疫沉淀进行明胶凝胶酶谱分析，以进行纤溶酶蛋白水解抑制活性测定。使用非免疫IgG作为免疫沉淀的对照。
图10
图10
对照组和青光眼患者（n = 10） 和大鼠视网膜组织裂解物（n = 5） 进行免疫印迹和探测(A、 B类)胶原蛋白（C、D)弹性蛋白和(E、 F类)层粘连蛋白免疫反应。箭头表示青光眼样本中ECM蛋白的降解产物。肌动蛋白用于每个病例的蛋白质标准化。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

参考文献

    1. 奎格利·HA。巩膜和筛板在青光眼发病机制中的作用：诊断和治疗意义。2015年脑研究进展；220:59–86. doi:10.1016/bs.pbr.2015.04.003。-内政部-公共医学
    1. Gupta V等。BDNF损伤与视网膜内部年龄相关的变化相关，并加重实验性青光眼。Biochim生物物理学报。2014;1842:1567–1578. doi:10.1016/j.bbadis.2014.05.026。-内政部-公共医学
    1. 郭磊，等。青光眼视网膜神经节细胞凋亡与眼压和眼压对细胞外基质的诱导作用有关。眼科科学研究。2005;46:175–182. doi:10.1167/iovs.04-0832。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Tezel G，蜡MB。青光眼视网膜神经节细胞死亡的神经胶质调节。《青光眼杂志》。2003;12:63–68. doi:10.1097/00061198-200302000-00014。-内政部-公共医学
    1. Zhang X，Chaudhry A，Chintala SK。抑制纤溶酶原激活可防止视网膜损伤小鼠模型中的神经节细胞丢失。分子视觉。2003;9:238–248.-公共医学

出版物类型