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.2017年10月:24:44-50。
doi:10.1016/j.scr.2017.08.013。 Epub 2017年8月18日。

CRISPR/Cas9和piggyBac介导的无足迹LRRK2-G2019S敲除揭示多巴胺能神经元的神经元复杂性表型和α-突触核蛋白调节

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CRISPR/Cas9和piggyBac介导的无足迹LRRK2-G2019S敲除揭示多巴胺能神经元的神经元复杂性表型和α-突触核蛋白调节

小冰青等。 干细胞研究. 2017年10月.
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摘要

富含亮氨酸重复激酶2(LRRK2)的p.G2019S突变已被确定为家族性和散发性帕金森病(PD)最常见的遗传原因。Cre-LoxP重组系统已用于纠正患者源性人类诱导多能干细胞(hiPSCs)中LRRK2-G2019S突变,以产生等基因对照。然而,剩余的LoxP位点可以影响基因表达。在本研究中,我们报道了利用CRISPR/Cas9和piggyBac技术编辑的无足迹LRRK2-G2019S等基因hiPS细胞系的生成。我们观察到,LRRK2-G2019S多巴胺能(DA)神经元中总轴突长度>2000μm的酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的百分比显著降低。LRRK2-G2019S DA神经元的平均分支数也减少。此外,我们已经证明,体外TH阳性神经元的总轴突长度大于2000μm,对丝氨酸129磷酸化(S129P)α-同核蛋白(αS)呈阳性反应,我们假设S129P-αS在长轴突的维持或形成中起作用。总之,我们的无足迹LRRK2-G2019S等基因细胞系允许标准化、遗传背景无关的体外PD建模,并为LRRK2-G2019S和S129P-αS在PD发病机制中的作用提供了新的见解。

关键词:CRISPR/Cas9;LRRK2-G2019S;帕金森病;丝氨酸129磷酸化α-突触核蛋白;臀部;piggyBac;α-突触核蛋白。

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