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.2017年11月；15(11):1579-1586.
doi:10.1158/1541-7786.MCR-17-0084。 Epub 2017年8月15日。

p53或Rb缺失增强核包膜破裂

哲阳（Zhe Yang） 1, 约翰·马西约夫斯基 1, 蒂蒂亚·德兰格 2
附属公司

p53或Rb缺失增强核包膜破裂

哲阳（Zhe Yang）等。 摩尔癌症研究. 2017年11月.

摘要

哺乳动物的核膜（NE）在细胞核和细胞质之间形成稳定的物理屏障，通常只有在有丝分裂过程中才会分解。然而，当NE完整性受到损害时，例如当细胞核受到机械应力时，间期可能发生自发的瞬态NE破裂。例如，核层粘连蛋白及其相关蛋白的缺陷可导致NE断裂，而肌动蛋白丝施加的力会促进NE断裂。NE断裂可使细胞质核酸酶接触染色质，可能损害基因组完整性。重要的是，在一些人类癌症细胞系中发现了自发的NE破裂，但这种缺陷的原因尚不清楚。在这里，我们研究了两种主要肿瘤抑制因子p53（TP53）和Rb（RB1）对NE破裂的抑制作用的机制。shRNA敲除和CRISPR/Cas9基因编辑导致Rb或p53受损后，正常人上皮RPE-1细胞中NE破裂。NE断裂并不涉及NE成分表达减少或细胞运动性增强。然而，NE破裂的细胞显示出更大的核投射区域。总之，数据表明癌细胞中NE破裂可能是由于Rb或p53通路的缺失所致。启示：这些发现表明，Rb和p53对肿瘤的抑制包括防止NE破裂的能力，从而防止基因组改变。摩尔癌症研究；15(11); 1579-86. ©2017 AACR.

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数字

图1
图1。RPE-1细胞中Rb或p53与shRNAs的耗竭导致NE破裂
（A） 感染shRNAs的RPE-1细胞中Rb和p53的免疫印迹γ-微管蛋白作为负荷控制。（B） RPE-1 NLS3mTurq细胞Rb或p53缺失后短暂NE破裂的例子。红色方块表示NE破裂的细胞，蓝色方块表示NLS3mTurq标记定位完全恢复的细胞。（C） NE破裂细胞核百分比的量化。误差条表示SD，由三个单独的实验得出，每个实验中至少跟踪50个细胞**p<0.01（学生t检验）。费希尔精确检验，p<0.0001。（D） NE破裂后RPE-1细胞中NLS3mTurq核定位完全恢复的时间。当胞质绿松石信号降低到NE破裂前的原始水平时，完全恢复。在每个细胞系中分析60例NE破裂事件。p=0.98（Kolmogorov–Smirnov试验）。（E） 每个细胞周期每个细胞NE破裂事件数量的量化。仅绘制至少经历一次NE破裂事件的细胞。
图2
图2。CRISPR/Cas9敲除RPE-1细胞Rb或p53导致NE破裂
（A） 利用CRISPR/Cas9编辑Rb和p53基因的示意图。矩形代表外显子，绿色表示编码序列。描述了每个sgRNA的位置。（B） 通过western blot验证Rb和p53基因敲除。（C） Rb和p53基因敲除细胞中NE断裂细胞核百分比的量化。误差条表示SD，并由三个单独的实验得出*p<0.05，**p<0.01（学生t检验）。费希尔精确检验，p<0.0001。（D） 用western blot验证p53敲除人群中Rb shRNA敲除情况，如（B）所示。（E） 在具有或不具有Rb敲除的p53敲除细胞中具有NE断裂的细胞核的百分比的定量。误差条表示SD，并由三个单独的实验得出*p<0.05（学生t检验）。费希尔精确检验，p<0.0001。
图3
图3。NE断裂可能发生在G1
（A） Rb-或p53缺失细胞在后期指定时间间隔内NE破裂的频率。误差条表示三个单独实验的SD。包括所有分析细胞中的所有NE破裂事件。（B） 量化用或不用1μM帕尔博西利（Palbo）处理的细胞中NE断裂的细胞核百分比。误差条表示SD，并由两个单独的实验得出。
图4
图4。Rb或p53缺失后NE蛋白表达的检测
（A） 层粘连蛋白或层粘连相关蛋白的免疫印迹γ-微管蛋白作为负荷控制。每个频带下面的数字表示归一化为空矢量控件的频带强度。（B） FMN2和ESCRT-III蛋白CHMP2A和CHMP4B的免疫印迹γ-微管蛋白作为负荷控制。
图5
图5。NE破裂细胞的迁移率和投射核面积
（A） 8小时内的单元格跟踪示例。（B和C）量化单个细胞在8小时内移动的距离。错误栏指示SD。通过Student t检验进行统计显著性分析（*p<0.05；***p<0.0001）。（B）中的单向方差分析，p<0.0001。（D和E）单个细胞的细胞核投射面积的量化。错误栏指示SD。通过Student t检验进行统计显著性分析（*p<0.05；**p<0.01；****p<0.0001）。如果没有给出星星，则没有显著差异。（D）中的单向方差分析，p<0.0001。
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    1. Hetzer MW。核外壳。《冷泉港生物学展望》。2010;2:a000539。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Güttinger S，Laurell E，Kutay U。有丝分裂期间核膜的拆卸和重组。Nat Rev Mol细胞生物学。2009;10:178–91.-公共医学
    1. Hatch E，Hetzer M.在发育和疾病中突破核膜。细胞生物学杂志。2014;205:133–41.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. De Vos WH、Houben F、Kamps M、Malhas A、Verheyen F、Cox J等。核包膜的重复破坏导致椎板病中细胞间隔的暂时丧失。人类分子遗传学。2011;20:4175–86.-公共医学
    1. Porwal M、Cohen S、Snoussi K、Popa Wagner R、Anderson F、Dugot Senant N等。细小病毒通过激活有丝分裂的关键酶导致核膜破裂。作者：林登·RM，编辑。《公共科学图书馆·病理学》。第9卷。2013年，第1003671页。-项目管理咨询公司-公共医学

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