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.2017年10月;16(4):4664-4670.
doi:10.3892/mmr.2017.7155。 Epub 2017年8月3日。

HAX‑1异常表达与人下咽鳞癌细胞增殖和迁移相关

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HAX‑1异常表达与人下咽鳞癌细胞增殖和迁移相关

郝武等。 分子医学代表. 2017年10月.

摘要

HCLS1-associated protein X‑1(HAX-1)在各类人类肿瘤中高表达或过表达,其过表达与肿瘤转移和细胞增殖有关。然而,HAX‑1‑相关的下咽癌增殖和转移的确切分子机制尚不清楚。本研究旨在探讨HAX‑1在下咽癌转移和增殖中的作用。逆转录定量聚合酶链反应分析和western blotting表明HAX‑1在下咽癌标本中过度表达。采用MTT、克隆形成和跨阱分析检测HAX‑1敲除或过度表达对FaDu下咽癌细胞系主要致癌特性的影响。HAX‑1下调可显著抑制细胞增殖、迁移和克隆。相比之下,HAX‑1的过度表达显著促进了细胞增殖、迁移和克隆形成。此外,HAX‑1敲除显著抑制上皮-间充质转化。综上所述,HAX‑1是一个潜在的癌基因,可能促进下咽癌的发生发展,并可能成为治疗下咽癌有价值的分子靶点。

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图1。
图1。
通过western blotting和逆转录定量聚合酶链反应评估肿瘤组织中HAX-1的表达。(A) 五对T和N样本中HAX-1蛋白表达的代表性结果。(B) 与相应的相邻N个样本相比,T样本中HAX-1蛋白表达水平增加。(C) 与匹配的相邻N个样本相比,T样本中HAX-1的相对mRNA表达显著增加。数据表示为平均值的平均值±标准误差*如图所示,P<0.05,**P<0.01。HAX-1、HCLS1-相关蛋白X-1;T、 肿瘤组织;N、 非肿瘤组织。
图2。
图2。
siRNA介导的HAX-1表达下调抑制细胞存活、增殖和迁移在体外(A)蛋白质印迹分析显示了HAX-1蛋白的表达水平。共使用了三种不同的HAX-1 siRNAs和一种siRNAscraft,结果表明HAX-1 siRNA1比craft和其他siRNA更有效地降低HAX-1表达水平。(B) 用MTT法评估细胞活力。(C) 平板集落形成分析中siRNA1和打乱转染FaDu细胞的集落数。(D) Transwell分析表明,siRNA1沉默HAX-1表达可抑制FaDu细胞的迁移(放大倍数×200)。数据表示为三个独立实验的平均值的平均值±标准误差*与干扰siRNA-转染细胞相比,P<0.05。小干扰RNA;HAX-1,HCLS1-相关蛋白X-1。
图3。
图3。
HAX-1的过度表达促进FaDu细胞的存活、增殖和迁移在体外(A)Western blot分析显示HAX-1蛋白表达水平。使用HAX-1过表达质粒和空白对照载体。(B) 用MTT法评估细胞活力。(C) 平板集落形成分析中HAX-1过表达质粒和空载体转染FaDu细胞的集落数。(D) Transwell分析表明,与空载体相比,FaDu细胞中HAX-1的过度表达促进了细胞迁移(放大倍数×200)。数据表示为三个独立实验的平均值的平均值±标准误差*与空载体转染细胞相比,P<0.05。HAX-1,HCLS1-相关蛋白X-1。
图4。
图4。
HAX-1表达对上皮-间质转化的影响。(A) Western blot分析表明,HAX-1敲除增加了FaDu细胞中E-cadherin的表达,并抑制了波形蛋白和N-钙粘蛋白的表达。(B) siRNA-转染细胞的western印迹定量。与干扰组相比,siRNA组E-cadherin蛋白表达增加。与打乱组相比,siRNA组的N-cadherin蛋白表达降低。与打乱组相比,siRNA组的波形蛋白蛋白表达降低。(C) Western blot分析表明,与空载体组相比,HAX-1过度表达降低了转染HAX-1过表达质粒的FaDu细胞中E-cadherin的表达,并促进了波形蛋白和N-cadherin表达。(D) 质粒转染细胞的western印迹定量。与载体对照组相比,HAX-1过表达组E-cadherin蛋白表达降低。与载体对照组相比,HAX-1过表达组的N-钙粘蛋白表达增加。与载体对照组相比,HAX-1过表达组的波形蛋白表达增加。数据表示为平均值的平均值±标准误差*与干扰siRNA-转染细胞相比,P<0.05;#与空载体转染细胞相比,P<0.05。HAX-1、HCLS1-相关蛋白X-1;上皮钙粘附素;N-钙粘蛋白、神经钙粘蛋白;小干扰RNA。

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