Effects of neuritin on the differentiation of bone marrow‑derived mesenchymal stem cells into neuron‑like cells

doi:10.3892/mmr.2017.6987

.2017年9月；16(3):3201-3207.

doi:10.3892/mmr.2017.6987。 Epub 2017年7月14日。

神经肽对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的影响

附属公司

¹新疆地方病和民族病重点实验室，石河子大学医学院生物化学系，石河子，新疆832002。
²职业与环境卫生，杭州师范大学医学院预防医学系，浙江杭州310036。

PMID： 28714031
预防性维修识别码：项目编号C5547941
内政部： 10.3892/毫米2017.6987

神经肽对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的影响

朱敬玲等。分子医学代表. 2017年9月.

.2017年9月；16（3）：3201-3207。

doi:10.3892/mmr.2017.6987。 Epub 2017年7月14日。

作者

朱敬玲¹, 孟平平¹, 钱旺（Qian Wang）¹, 王海燕¹, 张金丽（Jinli Zhang）¹, 李媛媛¹, 李东正¹, 谭晓华², 雷阳², 金黄¹

附属公司

¹新疆地方病和民族病重点实验室和生物化学系，石河子大学医学院，新疆石河子，832002。
²职业与环境卫生，杭州师范大学医学院预防医学系，浙江杭州310036。

PMID： 28714031
预防性维修识别码：项目编号C5547941
内政部： 10.3892/毫米2017.6987

摘要

虽然已知神经营养因子神经肽参与神经发育，但这种化合物对细胞分化的影响尚不清楚。本研究表明，神经肽治疗可诱导大鼠骨髓间充质干细胞（rBM‑MSCs）分化为神经元样（NL）细胞。在这些分析中，rBM‑MSCs与0.5µg/ml神经毒素孵育24小时。诱导后，27%的rBM‐MSCs表现出典型的NL细胞形态。随后，通过检测神经元标志物的表达和分析细胞功能来表征NL细胞。研究结果表明，神经肽治疗产生的NL细胞表达神经元标记物神经元特异性烯醇化酶和微管相关蛋白2，并分泌神经递质5-羟色胺。此外，NL细胞表现出一定的部分神经电生理功能。总之，神经肽治疗可能是诱导骨髓间充质干细胞向NL细胞分化的有效方法。这可能为疾病建模和基于细胞的疗法的开发提供一种替代的、潜在的补充工具。

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数字

**图1。**
rBM-MSC的特征。（A）原代培养的rBM-MSC呈纺锤形或多边形，培养96小时后形成菌落。（B）继第三代之后，细胞表现出成纤维细胞样形态（×100放大倍数）。间接免疫荧光分析显示细胞表面标记物（C）CD29、（D）CD44和（E）CD90呈阳性表达，但（F）CD34和（G）CD45无阳性表达。（H）控制单元（放大倍数，×200）。rBM-MSCs，大鼠骨髓源间充质干细胞。

**图2。**
分化条件的优化。（A）通过相差显微镜观察到神经肽治疗组中神经样MSCs的形成。诱导后24小时，所有组的MSC阳性数量最高。这些值与其他时间点的值有显著差异（P<0.05）。（B）诱导24小时后，每个神经肽治疗组的神经样MSC数量*与0.5µg/ml神经肽组相比，P<0.05。（C）通过台盼蓝染色分析0.5µg/ml神经肽诱导组的MSC细胞活力*与对照组相比，P<0.05。间充质干细胞。

**图3。**
神经毒蛋白处理的rBM-MSC中神经元特异性蛋白的形态和表达模式的表征。虽然（A）对照组的细胞与成纤维细胞相似，但（B）分化的rBM-MSC表现出神经元样细胞形态。细胞体浓缩并变得不可折射，细胞组成具有双极或多极长突起的网络（放大倍数×200）。（C-H）间接免疫荧光法检测神经肽诱导后（放大×400）的（C和D）NSE、（E和F）MAP2和（G和H）GFAP的表达。（一）通过对神经肽诱导细胞和对照细胞中NSE、MAP2和GFAP表达的western blot分析，也获得了类似的结果。rBM-MSCs，大鼠骨髓间充质干细胞；神经元特异性烯醇化酶；微管相关蛋白-2；胶质纤维酸性蛋白。

**图4。**
神经肽处理的rBM-MSC的神经功能特征。（A）在电压钳条件下，通过全细胞记录，在对照细胞中未观察到明显的离子通道开放。（B）向外延迟整流器K⁺在神经肽诱导的细胞中检测到电流。（C）细胞在−60 mV电压下被钳制，去极化步骤从−100 mV到60 mV，增量为20 mV。（D）采用薄层色谱法检测神经肽诱导的rBM-MSC中神经递质5-HT的表达和分泌。诱导组在5-HT的预期部位出现特定点，而对照组没有出现。1、标准5-HT组；2、神经肽组；3、对照组。rBM-MSCs，大鼠骨髓间充质干细胞；5-HT，5-羟色胺。

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