Endothelial growth medium suppresses apoptosis of mesenchymal stem cells in vitro via decrease of miR‑29a

doi:10.3892/mmr.2017.6939

.2017年9月；16(3):2675-2681.

doi:10.3892/mmr.2017.6939。 Epub 2017年7月6日。

内皮生长介质通过降低miR‑29a抑制间充质干细胞凋亡

吴倩倩¹, 陶芳², 陈敏（音）¹, 郭贤琦¹

附属公司

¹中国医科大学第一附属医院心内科老年心脏病学科，辽宁沈阳110001。
²中国医科大学附属盛京医院骨科，辽宁沈阳，110004。

PMID： 28713918
预防性维修识别码：项目编号C5547988
内政部： 10.3892/毫米2017.6939

内皮生长培养基通过降低miR-29a抑制体外间充质干细胞凋亡

吴倩倩等。分子医学代表. 2017年9月.

.2017年9月；16(3):2675-2681.

doi:10.3892/mmr.2017.6939。 Epub 2017年7月6日。

作者

吴倩倩¹, 陶芳², 陈敏（音）¹, 郭贤琦¹

附属公司

¹中国医科大学第一附属医院心内科老年心脏病学科，辽宁沈阳110001。
²中国医科大学附属盛京医院骨科，辽宁沈阳，110004。

PMID： 28713918
预防性维修识别码：项目编号C5547988
内政部： 10.3892/毫米2017.6939

摘要

在心脏缺血/再灌注损伤（IRI）病例中使用间充质干细胞（MSCs）与显著减少心肌细胞死亡和有效改善心脏功能相关。然而，MSCs移植治疗的一个主要限制因素是移植细胞的存活率低。本研究旨在证明与内皮生长介质（EGM-2）培养的人羊膜源性间充质干细胞（hAMSCs）在暴露于无血清和缺氧条件下时表现出凋亡减少；microRNA（miR）‑29a的表达显著降低。此外，miR‑29a敲除导致hAMSCs凋亡减少，并在mRNA和蛋白质水平上增加髓系细胞白血病（MCL）‑1。这些结果表明，EGM‑2部分通过调节miR‑29a和MCL‑1表达水平促进hAMSC的存活。这些发现可能为心脏IRI的潜在有效治疗策略提供新的认识。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
EGM-2抑制hAMSC的凋亡并下调miR-29a的表达。（A） DMEM和EGM-2培养的hAMSC的代表性照片；标尺，200µm。（B） FACS分析；在DMEM和EGM-2中培养的hAMSC的表面标记物与同型匹配抗体的比较。（C）在DMEM和EGM-2培养的hAMSC中CD31和CD105表达的Western blot分析。（D） DMEM或EGM-2培养的hAMSC凋亡率。（E）反转录定量聚合酶链反应分析在DMEM和EGM-2培养的hAMSC中成熟miR-29a的表达。EGM-2降低miR-29a和miR-29c的表达*与hAMSCs DMEM组相比，P<0.05。DMEM，Dulbecco改良的Eagle介质；EGM-2，内皮生长介质；hAMSCs，人羊膜来源的间充质干细胞；miR，microRNA；荧光激活细胞分选；CD，分化簇；RQ，相对质量；胎牛血清。

**图2。**
miR-29a对hAMSCs凋亡的影响。用miR-29a-3p模拟物、抑制剂及其相应对照瞬时转染hAMSC 48 h。（A）进行逆转录定量聚合酶链反应，检测hAMSC中miR-29a的相对表达。然后使用含有CoCl2（300µM）的无FBS培养基48小时以诱导凋亡。（B） Annexin V/PI染色和（C）Hoechst染色检测细胞凋亡；比例尺，100µm。（D）半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7活性测定检测模拟和抑制剂转染细胞的凋亡水平*P<0.05。miR，microRNA；人羊膜源性间充质干细胞；RQ，相对质量；nc，阴性对照；氯化钴，氯化钴（II）。

**图3。**
miR-29a靶向hAMSC中的MCL-1。（A）逆转录定量聚合酶链反应分析在DMEM和EGM-2培养的hAMSC中MCL-1的表达。（B） DMEM和EGM-2培养的hAMSC中MCL-1表达的Western blot分析。EGM-2增加MCL-1的表达。β-actin作为内源性对照。数据表示为平均值±标准偏差（n=3/组）。（C） miR-29a-3p模拟物、抑制剂及其相应对照中MCL-1表达的Western blot分析。β-actin作为内源性对照。数据表示为平均值±标准偏差（n=3/组）。（D） miR-29a与MCL-1在3′-UTR和种子区突变位点的比对。进行荧光素酶报告分析以确定MCL-1是否是miR-29a的靶点。将MCL-1 3′UTR的WT或MUT亚克隆到pLUC荧光素酶载体中。（E）载体加miR-29a模拟物或（F）miR-29a抑制剂共同转染hAMSC*P<0.05 vs.nc.miR，microRNA；MCL-1，髓细胞白血病-1；人羊膜源性间充质干细胞；EGM-2，内皮生长介质；DMEM，Dulbecco改良的Eagle介质；nc，阴性对照；野生型WT；MUT，突变；IDV，综合密度值；胎牛血清。

**图4。**
MCL-1是EGM-2对miR-29a进行转录激活所必需的。（A） nc和MCL-1-siRNA hAMSC中MCL-1表达的逆转录-聚合酶链反应分析和（B）western blotting分析。β-actin作为内源性对照。数据表示为平均值±标准偏差（n=3/组）。（C） AnnexinV/PI分析，（D）Hoechst分析；比例尺，100µm和（E）Caspase 3/7活性测定*与阴性对照组或如图所示，P<0.05。MCL-1，髓细胞白血病-1；miR，microRNA；EGM-2，内皮生长介质；si，小干扰；nc，阴性对照；RQ，相对质量；IDV，综合密度值。

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[1] Parolini O、Alviano F、Bagnara GP、Bilic G、Bühring HJ、Evangelista M、Hennerbichler S、Liu B、Magatti M、Mao N等。简明综述：人足月胎盘细胞的分离和表征：第一届胎盘源干细胞国际研讨会的成果。干细胞。2008;26:300–311. doi:10.1634/stemcells.2007-0594。-内政部-公共医学

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