Free-of-Acrylamide SDS-based Tissue Clearing (FASTClear) for three dimensional visualization of myocardial tissue

doi:10.1038/s41598-017-05406-w

.2017年7月12日；7(1):5188.

doi:10.1038/s41598-017-05406-w。

基于自由丙烯酰胺SDS的组织清除（FASTClear）用于心肌组织的三维可视化

菲利波·佩贝利尼¹, 艾伦·K·L·刘², 塞缪尔·沃森¹, 伊菲格妮娅·巴迪¹, 斯蒂芬·罗瑟里^三, Cesare M Terracciano公司⁴

附属公司

¹英国伦敦杜坎路哈默史密斯校区伦敦帝国理工学院转化与实验医学帝国中心国家心肺研究所，W12 0NN。
²英国伦敦杜坎路伦敦帝国理工学院伯灵顿丹麦大楼4楼脑科学系神经病理科。
^三英国伦敦帝国理工学院伦敦展览路亚历山大·弗莱明爵士大楼光显微镜成像设备，SW7 2AZ。
⁴英国伦敦杜坎路哈默史密斯校区伦敦帝国理工学院转化与实验医学帝国中心国家心肺研究所，W12 0NN。c.terracciano@imperial.ac.uk。

PMID： 28701763
预防性维修识别码： PMC5507863
内政部： 10.1038/s41598-017-05406-w

基于自由丙烯酰胺SDS的组织清除（FASTClear）用于心肌组织的三维可视化

菲利波·佩贝利尼等。科学代表. 2017.

.2017年7月12日；7(1):5188.

doi:10.1038/s41598-017-05406-w。

作者

菲利波·佩贝利尼¹, 艾伦·K·L·刘², 塞缪尔·沃森¹, 伊菲格妮娅·巴迪¹, 斯蒂芬·罗瑟里^三, Cesare M Terracciano公司⁴

附属公司

¹英国伦敦杜坎路哈默史密斯校区伦敦帝国理工学院转化与实验医学帝国中心国家心肺研究所，W12 0NN。
²英国伦敦杜坎路伦敦帝国学院伯灵顿丹麦大厦4楼，脑科学部神经病理科。
^三英国伦敦帝国理工学院伦敦展览路亚历山大·弗莱明爵士大楼光显微镜成像设备，SW7 2AZ。
⁴英国伦敦杜坎路哈默史密斯校区伦敦帝国理工学院转化与实验医学帝国中心国家心肺研究所，W12 0NN。c.terracciano@imperial.ac.uk。

PMID： 28701763
预防性维修识别码：项目编号：C5507863
内政部： 10.1038/s41598-017-05406-w

摘要

心脏的几种病理状况导致心脏结构重塑。鉴于心肌的高密度和不透明性，很难实现深层三维成像，病理性心肌结构的结构分析通常仅限于二维图像和薄心肌切片。因此，需要有效的方法来获得组织的光学清澈度以实现3D可视化。在这里，我们描述了一种快速、简单和通用的基于自由丙烯酰胺SDS的组织清除（FASTClear）协议，该协议专为心脏组织设计。使用该方法，可以在整个300µm厚心肌切片上轻松获得有关胶原蛋白含量的3D信息、胶原蛋白定位和分布。FASTClear不会引起结构或显微结构的畸变，它可以与免疫染色相结合来识别微血管和大血管网络。总之，我们已经获得了适合高分辨率3D成像的脱色心肌组织，这对研究复杂的心脏组织结构及其在病理过程中的变化具有重要意义。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明，他们没有相互竞争的利益。

数字

图1
(A类)FASTClear协议在新制备或固定心肌切片上的示意图(B类)结合FASTClear方案和免疫染色。

图2
FASTClear提供了一种有效的心肌组织清除协议。(A类–C类)FASTClear治疗前、SDS缓冲治疗后和FASTClearProtocol治疗后心肌切片的代表性图像。(天)在组织清除过程中，心肌的结构和比例保持不变，毛细血管间距与毛细血管直径之比没有变化。错误栏 = 扫描电镜 > 0.05 T检验。(E类–**G公司**)48后心肌切片的正交视图抗体孵育小时，标记仅限于制剂表面。(**H（H）**–J型)抗体孵育1周后心肌切片的正交视图。标签均匀分布并到达制剂的核心。每个实验至少使用3片。

图3
犬和人心肌切片中1型胶原的SHG成像。犬的低倍放大(A类,C类)和人类(B类,天)心肌组织。自体荧光（红色）用于显示心肌的结构；胶原纤维（绿色）位于心肌纤维内。白色箭头表示胶原蛋白靠近大血管。健康狗样本的放大倍数更高(E类,**G公司**)：胶原蛋白在肌肉纤维之间组织成股；在人类心力衰竭样本中(F类,**H（H）**)规则结构部分丢失，胶原蛋白组织较少。每个实验至少使用3片。

图4
心脏组织中微血管和大血管的免疫染色和成像。(A类)用异凝集素B4标记的毛细血管的二维图像。(B类–天)不同放大倍数下心肌组织微血管的三维重建。(E类)标有波形蛋白的较大血管的二维图像。(F类–**H（H）**)不同放大倍数下心肌组织大血管网络的三维重建。每个实验至少使用3片。

图5
1型胶原成像和大血管系统染色相结合。(A类)大血管附近胶原（绿色）分布的三维重建（vimenitin阳性，红色）。(B类,C类)3D和2D高倍放大显示胶原蛋白如何分离心肌肌纤维（白色箭头），但也围绕着较大的血管（黄色箭头）。每个实验至少使用3片。

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