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.2017年8月;16(2):1817-1825.
doi:10.3892/mmr.2017.6803。 Epub 2017年6月19日。

动脉粥样硬化斑块中高表达PCSK9及ox-LDL诱导内皮细胞凋亡的研究

附属公司

动脉粥样硬化斑块中高表达PCSK9和ox-LDL诱导内皮细胞凋亡的研究

焦莉等。 摩尔医学代表. 2017年8月.

摘要

本研究旨在探讨前蛋白转化酶枯草杆菌素/可欣9型(PCSK9)对动脉粥样硬化(AS)的直接毒性及其与内皮细胞凋亡的关系。载脂蛋白E‑/‑小鼠随机分为对照组和实验组。对照组给予正常饮食,实验组给予高脂肪饮食。20周后,分离并解剖主动脉。进行苏木精和伊红染色以及免疫组织化学分析。将人脐静脉内皮细胞与不同浓度的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育不同时间。流式细胞仪检测细胞凋亡率。采用Western blotting和逆转录定量聚合酶链反应分析检测PCSK9、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2样蛋白4(Bax)和caspase-3的表达。使用慢病毒转染将短发夹(sh)RNA‑PCSK9转染到内皮细胞。检测PCSK9、Bax、Bcl-2、caspase-3和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径蛋白的表达水平。高脂肪组成功建立as模型,PCSK9在as斑块中高表达。ox‑LDL治疗可诱导细胞凋亡,并增加PCSK9的mRNA和蛋白水平。shRNA‑PCSK9下调PCSK9 mRNA和蛋白质水平。PCSK9缺陷显著抑制促凋亡蛋白的表达,并促进抗凋亡蛋白的分泌。此外,shRNA‑PCSK9改变了p38和c‑Jun N‑末端激酶的磷酸化。shRNA‑PCSK9靶向PCSK9可能通过MAPK信号通路抑制AS内皮细胞凋亡,为理解AS的机制和治疗提供了新的方向。

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数字

图1。
图1。
PCSK9在AS(A)AS小鼠模型中的表达。主动脉横截面的苏木精-伊红染色证明,在ApoE中成功建立了AS小鼠模型−/−老鼠。(B) 采用免疫组织化学方法检测AS小鼠模型中PCSK9蛋白的表达。PCSK9,前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型;AS,动脉粥样硬化;载脂蛋白E。
图2。
图2。
氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞凋亡。PI,碘化丙啶。
图3。
图3。
ox-LDL对不同时间HUVEC Bax、Bcl-2、caspase-3和PCSK9表达水平的影响。以50µg/ml的ox-LDL诱导EAhy926细胞,RT-qPCR检测(A)Bax和(B)caspase-3的mRNA水平。蛋白质印迹法检测(C)Bax和(D)胱天蛋白酶-3的蛋白水平。评估Bcl-2(E)mRNA和(F)蛋白水平。评估PCSK9(G)mRNA和(H)蛋白水平*与对照组相比,P<0.05和**P<0.01;#P<0.05 vs.24 h。所有结果均表示为平均值的平均值±标准误差。氧化低密度脂蛋白;Bax,bcl-2样蛋白4;Bcl-2、B细胞淋巴瘤2;PCSK9,前蛋白转化酶枯草杆菌素/可欣9型;人脐静脉内皮细胞;RT-qPCR,逆转录定量聚合酶链反应。
图4。
图4。
PCSK9下调后ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞凋亡。氧化低密度脂蛋白;PCSK9,前蛋白转化酶枯草杆菌素/可欣9型;短发夹RNA。
图5。
图5。
shRNA-PCSK9对凋亡相关蛋白和MAPK通路蛋白表达的影响。用PCSK9 shRNA转染EAhy926细胞,并用50µg/ml ox-LDL诱导24小时。(A)shRNA-PCSK9对PCSK9 mRNA和蛋白质水平的影响。(B) PCSK9缺乏对Bax、Bcl-2和caspase-3 mRNA表达水平的影响。(C) PCSK9缺陷对ox-LDL处理的EAhy926细胞中Bax、Bcl-2、caspase-3、p38、ERK和JNK蛋白表达水平和磷酸化的影响*P<0.05和**P<0.01 vs.279-vector。所有结果均表示为平均值的平均值±标准误差。短发夹RNA;PCSK9,前蛋白转化酶枯草杆菌素/可欣9型;丝裂原活化蛋白激酶;氧化低密度脂蛋白;Bax、bcl-2样蛋白4;Bcl-2、B细胞淋巴瘤2;ERK,细胞外信号调节激酶;JNK,c-Jun N-末端激酶;p-,磷酸化。

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