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.2017年7月;16(1):547-552.
doi:10.3892/mmr.2017.6664。 Epub 2017年5月31日。

超低温保存对人脐静脉内皮细胞分泌功能、细胞粘附分子和血管腔形成的影响

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超低温保存对人脐静脉内皮细胞分泌功能、细胞粘附分子和血管腔形成的影响

蔡国平等。 分子医学代表. 2017年7月.

摘要

冷冻保存在再生医学中广泛应用于组织保存。本研究研究了超低温保存对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌功能、细胞粘附分子和血管腔形成的影响。在液氮中冷冻0、4、8、12或24周后,将HUVEC解冻。ELISA法检测HUVEC的排泄功能标志物(内皮素-1、前列腺素E1、血管性血友病因子和一氧化氮)。使用流式细胞术分析HUVECs中细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达。血管生成试验用于测定解冻的HUVEC的血管生成能力。结果表明,冻存/解冻和再培养的HUVEC不适合组织工程化微血管构建。具体而言,冷冻保存后24周的HUVEC中细胞的排泄功能显著降低。此外,自冷冻保存第四周起,HUVEC中ICAM‑1的水平显著上调。此外,随着冻存时间的延长,管状结构形成潜能减弱,解冻后的HUVEC中管腔数量和管道长度呈时间依赖性减少。总之,本研究结果表明,延长冷冻保存时间可能会导致HUVEC功能障碍,并且不会为组织工程化微血管构建创建稳定的细胞系。

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图1。
图1。
HUVEC的形态学观察和鉴定。(A) 第一代时原代HUVECs的亮场显微镜检查。HUVEC分别用(B)抗CD31抗体、抗CD34抗体和(C)抗Ⅷ因子抗体免疫荧光染色。(D) 通过免疫荧光观察乙酰化低密度脂蛋白的摄取。HUVECs,人脐静脉内皮细胞。
图2。
图2。
HUVEC的排泄功能。用ELISA试剂盒测定解冻人脐静脉内皮细胞(A)ET-1、(B)PGE-1、(C)vWF和(D)NO的水平。数值用平均值±标准偏差表示(每组n=3)*与对照组(0周)相比,P<0.05。内皮素-1、内皮素-1;前列腺素E1;vWF,von willebrand因子;NO,一氧化氮。
图3。
图3。
ICAM-1在HUVEC中的表达。(A) 人脐静脉内皮细胞与抗ICAM-1孵育并用流式细胞术进行分析。(B) 直方图显示了定量结果。数值表示为平均值±标准偏差(每组n=3)*与对照组(0周)相比,P<0.05。NC,阴性对照;细胞间粘附分子-1。
图4。
图4。
HUVEC中的血管腔形成。(A) HUVEC(0周)的血管生成功能用钙黄绿素染色并用荧光显微镜观察。(B) 使用荧光显微镜测量解冻的HUVEC(4、8、12和24周)的血管生成功能。(C) 使用ImageJ分析软件定量分析流明数和(D)管道长度*与对照组(0周)相比,P<0.05;%与解冻的HUVEC(第4周)相比,P<0.05;#与解冻的HUVEC(第8周)相比,P<0.05;$与解冻的HUVEC(第12周)相比,P<0.05。HUVECs,人脐静脉内皮细胞。

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引用人

  • 组织工程支架结构的低温保存:从概念到现实。
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  • 培养表面蛋白涂层影响hESC-RPE的屏障特性和钙信号。
    ViheriäläT、Sorvari J、Ihalainen TO、MöröA、Grönroos P、Schlie-Wolter S、Chichkov B、Skottman H、Nymark S、Ilmarien T。 ViheriäläT等人。 科学代表2021年1月13日;11(1):933. doi:10.1038/s41598-020-79638-8。 科学报告2021。 PMID:33441679 免费PMC文章。

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