Lymphatic endothelial S1P promotes mitochondrial function and survival in naive T cells

doi:10.1038/nature22352

.2017年6月1日；546（7656）：158-161。

doi:10.1038/nature22352。 Epub 2017年5月24日。

淋巴内皮S1P促进原始T细胞线粒体功能和存活

附属公司

¹美国纽约州纽约市纽约大学医学院Skirball生物分子医学研究所，邮编：10016。
²美国纽约州纽约市西奈山伊坎医学院肿瘤科学系，邮编：10029。
^三美国纽约州纽约市威尔康奈尔医学院计算生物医学研究所，邮编：10021。
⁴牛津大学肯尼迪风湿病研究所，牛津大学罗斯福大道，牛津OX3 7FY。
⁵美国马萨诸塞州波士顿市哈佛医学院波士顿儿童医院血管生物学项目，邮编：02115。

PMID： 28538737
预防性维修识别码：项目编号：5683179
内政部： 10.1038/自然22352

淋巴内皮S1P促进原始T细胞线粒体功能和存活

亚历杭德拉·门多萨等。自然. 2017.

.2017年6月1日；546(7656):158-161.

doi:10.1038/nature22352。 Epub 2017年5月24日。

附属公司

¹美国纽约州纽约市纽约大学医学院Skirball生物分子医学研究所，邮编：10016。
²美国纽约州纽约市西奈山伊坎医学院肿瘤科学系，邮编：10029。
^三美国纽约州纽约市威尔康奈尔医学院计算生物医学研究所，邮编：10021。
⁴牛津大学肯尼迪风湿病研究所，牛津大学罗斯福大道，牛津OX3 7FY。
⁵美国马萨诸塞州波士顿市哈佛医学院波士顿儿童医院血管生物学项目，邮编：02115。

PMID： 28538737
预防性维修识别码：项目编号：5683179
内政部： 10.1038/自然22352

摘要

有效的适应性免疫反应需要大量的幼稚T细胞在体内迁移，快速识别几乎所有的外来肽。因为T细胞的产生会随着年龄的增长而下降，所以幼稚的T细胞必须是长寿的。然而，尚不清楚幼稚的T细胞在不断旅行的过程中是如何存活多年的。趋化剂1-磷酸鞘氨醇（S1P）引导T细胞在次级淋巴器官（包括脾、淋巴结和派尔氏结）之间的循环，在这些器官中T细胞寻找抗原。循环液中S1P的浓度高于淋巴器官中的浓度，并且S1P₁受体（S1P₁R）引导T细胞从脾脏进入血液，并从淋巴结和派尔氏结进入淋巴。这里我们表明，S1P不仅对原始T细胞的循环至关重要，而且对其生存也至关重要。利用转基因小鼠模型，我们证明淋巴管内皮细胞通过转运体SPNS2分泌S1P来支持T细胞的生存，这种S1P通过S1P发出信号₁T细胞上的R，以及S1P的要求₁R独立于受体在引导淋巴结流出方面的既定作用。S1P信号维持原始T细胞的线粒体含量，为细胞持续迁移提供能量。S1P信号通路被靶向治疗以抑制自身反应性T细胞运输，这些发现表明，它可能同时靶向自身反应性或恶性细胞存活。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争性财务利益

作者声明没有竞争性的经济利益。

数字

**扩展数据图1。外周T细胞循环需要淋巴管内皮细胞中的SPNS2**
**（a）**外周幼稚T细胞分布图*自旋2*Δ小鼠和对照组。*自旋2*Δ小鼠的血浆S1P正常，从脾脏进入血液的过程与往常一样，但*自旋2*Δ小鼠淋巴S1P丢失，淋巴结出口受阻。随着时间的推移，这会导致T细胞从脾脏重新分布到淋巴结，并导致循环细胞丢失，因为任何离开脾脏进入淋巴结的细胞都会被捕获。**（b）**原始CD4上的代表性表面S1PR1⁺血液和脾脏（顶部面板）以及淋巴和LN（底部面板）中的T细胞*自旋2*Δ鼠标及其室友控制（Ctrl）。T细胞表面S1PR1在结合S1P后内化。因此，在两种情况下，血液中T细胞表面的S1PR1低于脾脏*自旋2*Δ和对照动物，表明T细胞在血液中感受到的S1P多于脾脏。S1PR1在对照小鼠淋巴中T细胞表面的表达也低于LN。但在*第2页*Δ小鼠S1PR1在淋巴和淋巴结中的T细胞上同样高，这表明引导T细胞从淋巴结中退出的梯度已经被清除。**（c–h）**T细胞分布*自旋2*Δ小鼠和室友对照组。**（c–d）**外周血原始CD4总量的百分比**（c）**和CD8（d）脾脏和LN中的T细胞。外周血淋巴细胞总数定义为脾脏和LN亚群（肱骨、腋窝、腹股沟和肠系膜）中的淋巴细胞；血液和淋巴的贡献微不足道。**（e–f）**原始CD4数量**（e）**和CD8（f）血液和淋巴中的T细胞。**（g）**外周原始CD8 T细胞总数。**（h）**脾脏和LN中的原始CD8 T细胞数量。中的数据**（b–h）**是8个实验中分析的8对小鼠的代表。**（i–j）**PI频率⁺ **（i）**和凋亡**（j）**LN中的原始CD8 T细胞*第2页*Δ小鼠和室友对照组。在6个实验中分析了6对小鼠。**（k–n）**凋亡频率**（千米）**和PI⁺ **（l，n）**原始CD4 T细胞**（k，l）**和CD8 T细胞**（m，n）**在的脾脏中*自旋2*Δ小鼠和室友对照组。在5个实验中分析了5对小鼠。幼稚CD4或CD8 T细胞在小鼠脾脏中的死亡没有统计学上的显著差异*第2页*与同窝对照组相比，Δ小鼠的死亡率似乎有增加的趋势*自旋2*Δ小鼠。脾脏中正常T细胞存活*自旋2*Δ小鼠与正常血液S1P和边缘窦血管内皮细胞产生的正常S1P一致，可能维持脾脏T细胞中正常的S1PR1信号。我们假设少数T细胞能够离开LN自旋2Δ小鼠相对健康，在脾脏中时较为稳定。然而，我们对过度解释这些结果犹豫不决，因为*第2页*Δ动物，它们可能以CD62L门控无法捕捉到的方式不同^你好CD44细胞^洛T细胞。**（o–p）**同源标记的淋巴细胞来自*BCL2级*-Tg和WT同窝献血者被共同转移到*自旋2*Δ小鼠和室友对照组。WT数量或*BCL2级-*转移后21天，脾脏和LN中的Tg初始CD8 T细胞恢复。在3个实验中分析了9对小鼠。线条表示平均值。非配对双尾t检验，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001****p<0.0001。

**扩展数据图2。*自旋2*淋巴管内皮细胞的缺失不会阻断胸腺的出口，也不会在淋巴结和脾脏以外的组织中诱导原始T细胞的大量积累**
T细胞从胸腺排出效率的降低反映在成熟（CD69）的积累^低的CD62L型^你好)单个阳性（SP）T细胞。**（a）**总胸腺细胞CD4和CD8的表达（上表），CD4SP胸腺细胞的CD69和CD62L的表达（下表）*自旋2*Δ小鼠和同窝出生的对照。**（b）**总CD4SP的成熟CD4SP百分比和总CD8SP T细胞的成熟CD8SP百分比*自旋2*Δ小鼠和室友对照组。**（c）**成熟CD4SP和CD8SP胸腺细胞数量*自旋2*Δ小鼠和室友对照组。中的图形**（b–c）**编译5对小鼠，在5个实验中进行分析。**（d–e）**派耶贴剂中幼稚的CD4和CD8 T细胞的数量**（d）**和骨髓**（e）**属于*自旋2*Δ小鼠和室友对照组。**（f–h）**肝脏中CD4和CD8 T细胞的数量**（f）**，肺部**（g）**和小肠固有层**（h）**属于*自旋2*Δ小鼠和室友对照组。有趣的是，T细胞确实积聚在*第2页*Δ小鼠，但这些数字仅占缺失细胞的约5%（在合并的脾脏、肠系膜、腹股沟、肱骨和腋窝淋巴结中的原始CD4 T细胞减少约2.1E7个）*自旋2*与对照组相比，Δ小鼠和9.6E5多个幼稚CD4 T细胞*自旋2*Δ小鼠与对照组相比）。中的图形(d）将8对在8次实验中分析过的小鼠汇集在一起**（e–h）**在3个实验中分析了3对小鼠。线条表示平均值。未配对双尾t检验，^†p=0.07（e）,^†p=0.095适用于**（h）**，*p<0.05，**p<0.01。

**扩展数据图3。幼稚T细胞丢失*自旋2*Δ小鼠不是由于转化为另一种细胞类型**
评估T细胞是否*第2页*Δ小鼠失去激活诱导凋亡的平静和死亡，我们评估CD44表达、细胞大小和BrdU掺入。**（a）**代表性LN患者CD4 T细胞CD44和CD62L的表达*自旋2*Δ和窝友对照小鼠。**（b）**%CD44细胞^你好占总CD4和CD44的百分比^你好LN中CD8 T细胞总数的%。**（c）**CD44数量^你好CD4细胞⁺T细胞和CD44^你好CD8（CD8）⁺LN中的T细胞。中的数据**（b–c）**在9个实验中分析了9对小鼠。**（d）**代表性LN中原始CD4 T细胞的前向散射面积（FSC-A）*自旋2*Δ（阴影）和室友控制（黑色）小鼠。**（e）**原发性CD4和CD8 T细胞的平均FSC-A比率*自旋2*Δ小鼠是指幼稚CD4和CD8 T细胞的FSC-A在其同胞对照LN中。数据池16对小鼠在16个实验中进行分析。**（f）**小鼠每天腹腔注射BrdU，持续3天。最后一次注射后24小时，收集LN，用流式细胞术分析原始CD4和CD8 T细胞，以检测BrdU掺入。数据池在5个实验中分析了5对小鼠。**（g）**LN中诱导调节T细胞（iTreg）和自然调节T细胞的频率*自旋2*Δ和窝友对照小鼠。iTreg被定义为FOXP3⁺神经纤毛蛋白⁻nTreg被定义为FOXP3⁺神经菌毛蛋白⁺数据池：在3个实验中分析了3对小鼠。线条表示平均值。未配对双尾t检验，^†p=0.051，*p<0.05，p***<0.001。

**扩展数据图4。*自旋2*在中是必需的*Lyve1号机组*-Cre缺失的放射抗性细胞**
对宿主进行致命照射，并用来自特定的具有先天标记的供体的骨髓（BM）重建。移植后6周以上对小鼠进行分析。**（a）**标记嵌合体淋巴中T细胞表面S1PR1的代表性流式细胞术图（左）。淋巴中原始T细胞表面S1PR1 MFI的比率*自旋2*Δ用WT BM重组小鼠，将S1PR1 MFI表面贴在同窝母鼠对照组淋巴中的幼稚T细胞上（右）。图表汇编了在5个实验中分析的5对小鼠。**（b）**标记嵌合体淋巴中T细胞表面S1PR1的代表性流式细胞术图（左）。重组WT小鼠淋巴中原始T细胞表面S1PR1 MFI的比率*自旋2*ΔBM与新生T细胞表面S1PR1 MFI在用同窝对照BM重组的WT小鼠淋巴中的表达（右）。图表汇编了在5个实验中分析的5对小鼠。**（c）**所示嵌合体外围（脾和肠系膜、腋窝、腹股沟和肱淋巴结结合）供体衍生的原始CD4和CD8 T细胞总数。**（d）**所示嵌合体的淋巴、血液、LN和脾脏中供体衍生的初始CD4 T细胞数量。**（e）**所示嵌合体LN中供体或衍生的初始CD4 T细胞凋亡的频率。**（f）**所示嵌合体的淋巴、血液、LN和脾脏中供体衍生的原始CD8 T细胞数量。**（g）**指示嵌合体的LN中凋亡供体来源的幼稚CD8 T细胞的频率。**（c–g）**编译5组小鼠（使用2对*自旋2*Δ和对照供体以及2个WT供体）在5个实验中进行了分析。**（h–i）**嵌合体LN中巨噬细胞的重建。**（h）**评估散装CD11b中重组的选通方案⁺细胞和CD11b⁺CD169号⁺鼻窦巨噬细胞。在4个实验中分析了4组小鼠的代表性图。**（i）**供体或衍生CD11b百分比的量化⁺和CD11b⁺CD169号⁺巨噬细胞。供体或衍生CD45的平均百分比⁺造血细胞占92%，CD11b⁺巨噬细胞占89%，CD11b⁺CD169号⁺巨噬细胞占87%。图表汇编了4组老鼠（使用2对*第2页*Δ和对照供体以及2个WT供体）在4个实验中进行了分析。线条表示平均值。未配对双尾t检验，^†p=0.061，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

**扩展数据图5。幼稚T细胞存活依赖于S1P，但不依赖于循环**
*自旋2*在饮用水中用30 mg/L DOP和10 g/L蔗糖（或单独使用蔗糖）对Δ小鼠和窝鼠对照组进行21天的治疗。**（a–c）**通过测量幼稚T细胞表面S1PR1的表达来评估DOP治疗对LN内T细胞暴露于细胞外S1P的影响，该表达与S1P水平呈负相关。**（a）**幼稚CD4 T细胞表面S1PR1的代表性流式细胞术图。使用FTY720处理的小鼠作为S1PR1染色的阴性对照。**（b）**来自指示小鼠的幼稚LN CD4 T细胞的细胞表面S1PR1平均荧光强度（MFI）与来自蔗糖处理的对照小鼠的幼年LN CD4T细胞的S1PR1 MFI的细胞表面比率。在5个实验中分析了5组小鼠。**（c）**所示小鼠幼稚LN CD8 T细胞上的细胞表面S1PR1 MFI与蔗糖处理对照鼠幼稚L N CD8 T细胞上的S1PR1 NFI的比率。在4个实验中分析了4组小鼠。**（d–e）**原始CD4数量**（d）**或CD8（e）血液中的T细胞*自旋2*Δ小鼠和同窝对照，有和没有DOP治疗。在5个实验中分析了8组小鼠。**（f–g）**PI频率⁺ **（f）**和凋亡**（g）**LN中的原始CD8 T细胞*自旋2*Δ小鼠和室友对照组，有或没有DOP治疗。5组（对照组和*自旋2*Δ组共有6只小鼠，DOP治疗对照组和DOP治疗组*第2页*Δ组共有5只小鼠）在3个实验中进行了分析。**（h）**标记一致*BCL2级*-Tg和同窝WT淋巴细胞（初始CD4 T细胞计数为1:1）共同转移到*自旋2*Δ和室友对照小鼠，有或没有DOP治疗。转让后21天，WT或*BCL2级*-计数LN中回收的Tg原始CD8 T细胞。WT与*BCL2级*-Tg T细胞用于对照和DOP治疗*自旋2*Δ小鼠和室友对照组。每组10只小鼠在4个实验中进行分析。线条表示平均值。未配对双尾t检验，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

**扩展数据图6。幼稚T细胞存活并不依赖S1PR4信号**
重量CD45.1⁺对小鼠进行致命照射，并用CD45.2的骨髓重建⁺ *第4季度*^−/−或室友控制小鼠。在骨髓重建6周后对小鼠进行分析。**（a）**半成熟百分比（CD69^你好CD62L型^洛)和成熟（CD69^洛CD62L型^你好)总CD4SP胸腺细胞的百分比和总CD8SP胸腺淋巴细胞的半成熟和成熟百分比*第4季度^−/−*和控制嵌合体。**（b）**半成熟和成熟CD4SP和CD8SP胸腺细胞的数量。**（c–e）**血液中原始CD4和CD8 T细胞的数量**（c）**，脾脏**（d）**和LN（e）LN定量为肱骨、腋窝、腹股沟和肠系膜。两套*第4季度^−/−*采用同窝对照骨髓捐赠者。数据池：在3个实验中分析了5对嵌合体，均以CD45.2为门控⁺细胞。线条表示平均值。未配对双尾t检验，*p<0.05。

**扩展数据图7。幼稚CD8 T细胞需要细胞自主S1PR1信号来抑制凋亡**
**（a–b）**成人*第1季度^{飞行/飞行}UBC公司*-对CreERT2小鼠和同窝小鼠进行胸腺切除，用他莫西芬治疗，并在12周后进行分析（用他莫西芬治疗*S1月1日^{飞行/飞行}UBC公司*-CreERT2小鼠被称为*第1季度*Δ).（a）LN（肠系膜、腋下、腹股沟和肱部）和脾脏中原始CD8 T细胞的数量*第1季度*Δ小鼠和室友对照组。(b）LN和脾脏中凋亡的原始CD8 T细胞的频率*第1季度*Δ小鼠和室友对照组。在3个实验中分析了5对小鼠。**（c–d）**第45页第1页⁺对小鼠进行致命照射，并用来自WT的BM混合物进行重组*UBC:GFP公司*小鼠和BM第1季度^{飞行/飞行}UBC公司-CreERT2 CD45.2⁺小鼠或室友对照组。重建6周后切除小鼠胸腺，术后4周给予三苯氧胺治疗。**（c）**数量比*第1季度^{飞行/飞行}UBC公司*-CreERT2或室友将幼稚CD8 T细胞控制为GFP数量⁺三苯氧胺诱导前血液中发现幼稚的CD8 T细胞*第1季度*缺失，且三苯氧胺治疗24周后血液、LN和脾脏中的比率相同。来自2个骨髓供体组的5对小鼠（除对照脾脏外，共有4只小鼠），在3个实验中进行分析。**（d）**凋亡频率*第1季度*Δ或窝友控制初始CD8 T细胞和GFP⁺WT原始CD8 T细胞。三苯氧胺治疗12周或24周后，在5个实验中分析了来自3个骨髓供体组的10对小鼠。**（e）**第45页第1页⁺以1:1的比例对WT小鼠进行照射和重组*UBC:GFP公司*WT BM和CD45.2⁺ *第1季度^{飞行/飞行}或S1pr1^{飞行/飞行}；UBC公司-*CreERT2 BM。6周后，每天注射5次三苯氧胺诱导Cre活性（在两组小鼠中）。最后一次给药他莫昔芬后5天，初始GFP^-CD45.2型⁺从LN中分离CD4 T细胞。转录物通过RNA-Seq进行量化，差异表达基因（Benjamini-Hochberg调整的p值<0.05）通过Ingenuity Pathway Analysis（Qiagen v.1.0）进行分析。图中显示了属于“分子和细胞功能”类别的差异表达转录物，注释为“细胞死亡和存活”。线条表示平均值。未配对双尾t检验，^†p=0.092，*p<0.05，**p<0.01，****p<0.0001。

**扩展数据图8。DOP不能挽救细胞死亡*第1季度*缺陷小鼠**
凋亡频率**（a、c）**和PI⁺ **（b、d）**幼稚的CD4（a、b）和天真的CD8（c、d）LN中的T细胞*第1季度*Δ小鼠和窝鼠对照组，有或没有DOP治疗（如图2所示，30 mg/L DOP加10 g/L蔗糖于饮用水中，或仅加蔗糖3周）。在4个实验中分析了6组小鼠。线条表示平均值。未配对双尾t检验，*p<0.05，**p<0.01。

**扩展数据图9。几乎没有证据表明S1PR1调节IL7或自身肽/MHC的获取**
**（a–b）**分选的原始CD4 T细胞（不表达MHCII）**（a）**并对原始CD8 T细胞进行分类**（b）**来自的LN第1季度Δ和同窝对照动物在指示的IL7浓度下培养5天。PI频率⁺流式细胞术检测细胞。图形池9个实验（a）或6个实验（b）。**（c）**刺激LN CD4 T细胞的Western blot体外使用IL7。代表2个实验。**（d–e）**LN T区指示标记的免疫荧光染色。（FRC，纤维母细胞网状细胞）。3个实验的代表。**（f）**LN原始CD4 T细胞上的代表性细胞表面IL7Rα。**（g）**IL7RαMFI的比率*第1季度*ΔLN幼稚CD4和CD8 T细胞与同窝对照。在4个实验中从4对数据中汇编数据。**（h）**从LN分离的原始CD4 T细胞表达代表性Nur77S1月1日Δ和窝友控制动物。转移至MHCII-KO受体的原始CD4 T细胞和活化的CD4 T淋巴细胞分别作为Nur77表达的阴性和阳性对照。**（i）**Nur77 MFI的比率*第1季度*ΔLN将幼稚T细胞与对照组进行配对。图表汇编了4对在4个实验中分析过的小鼠。**（j–m）** *第1季度*用IL7Rα阻断抗体或同种对照抗体处理Δ和同窝对照小鼠，5天后进行分析。**（j）**通过对经抗IL7Rα和同型对照治疗的小鼠LN的原始CD4 T细胞进行IL7R a染色（使用抗IL7R-α阻断抗体）来评估IL7Rβ阻断剂的疗效。**（k）**IL7Rα阻断剂的疗效通过来自抗IL7R a和同型对照治疗小鼠的LN CD4 T细胞磷酸化STAT5以响应IL7的能力来衡量体外（用指示浓度的IL7刺激5分钟），用Western blot测定。3个实验的代表。**（l–m）**凋亡幼稚CD4的频率**（l）**和CD8（米）LN中的T细胞。在4个实验中分析了8组小鼠。**（n）**分类LN原始CD4 T细胞*第1季度*Δ动物和窝友对照组转移给MHCII-KO受体。5天后分析受体LN中的细胞。4个实验中有4对。我们不能排除低于检测极限的影响，或预先存在的缺陷*第1季度*Δ细胞保留了我们检测中测量的差异。线性平均值，误差条SEM。未配对双尾t检验，^†=0.052，*p<0.05，**p<0.01。

**扩展数据图10。幼稚T细胞需要S1PR1信号来维持线粒体的含量和功能**
**（a）**来自LN的原始CD8 T细胞*第1季度*Δ小鼠和同窝对照通过流式细胞术分析总线粒体（MitoTracker Deep Red FM）和功能性线粒体（MitoTracker Red CMX Ros）。在4个实验中分析了4对小鼠的代表性直方图和编译比率。**（b–c）**凋亡的原始CD4的频率**（b）**或CD8（c）来自Ctrl的LN的T细胞，*第1季度*Δ,Ctrl键*BCL2级⁺*、和*第1季度*Δ*BCL2级⁺*老鼠。编译了3组在3个实验中分析过的小鼠。**（d–e）**检测线粒体功能体外在Ctrl的LN中分选出的原始CD4和CD8 T细胞中*BCL2级⁺*和*第1季度*Δ*BCL2级⁺*使用XF细胞Mito应激测试试剂盒和XF的小鼠^电子96细胞外通量分析仪（安捷伦科技公司，前身为Seahorse）。**（d）**Ctrl的LN中幼稚CD4 T细胞的耗氧率（OCR）*BCL2级⁺*和*S1月1日*Δ*BCL2级⁺*老鼠。从1个实验中复制图表。误差条显示SEM。数据代表了在2个实验中分析的2对小鼠。**（e）**根据Ctrl对原始CD8 T细胞进行OCRBCL2级⁺和*第1季度*Δ*BCL2级⁺*老鼠。从1个实验中复制图表。误差条显示SEM。数据代表了在2个实验中分析的2对小鼠。**（f）**平均基本耗氧量与最大耗氧量之比*第1季度*Δ幼稚CD8 LN T细胞与同窝对照的平均基础OCR和最大OCR的比值。图表汇编了3对在3个实验中分析过的小鼠。黑点表示介于*第1季度*Δ小鼠和对照组，灰点表示OCR比率*第1季度*Δ*；BCL2级*-tg小鼠和*BCL2级*-tg控件。**（g–j）**CellTrace来自LN的紫标记CD4和CD8 T细胞*第1季度*用抗CD3/CD28激活Δ小鼠和窝鼠对照，并在补充葡萄糖或半乳糖的培养基中培养72小时。CellTrace紫稀释CD4（g）和CD8（h）T细胞和CD4细胞总数**（i）**和CD8（j）激活72小时后测量T细胞。图表汇编了4组实验中分析的4对小鼠的三份样品。**（k）**作为ER未折叠蛋白反应的一部分，转录上调-*Eif2ak3型*（佩克）*，Hspa5*（BIP）*和Ddit3*（CHOP）–通过RT-qPCR对来自LN的分选的原始CD4 T细胞进行测量*第1季度*Δ和窝友控制动物。数据汇编了从4对小鼠中挑选出的4组细胞。误差条显示SEM。**（l）**Western blot定量的β-肌动蛋白信号与每孔CD4 T细胞数量之比*第1季度*Δ小鼠和同窝对照。图表汇编了2个实验中分析的4对小鼠的4组样本（图4b中的样本子集）。**（米）**从LN分离的CD4 T细胞受到刺激体外使用1μM S1P或载具3小时。通过Western blot检测AKT和S6磷酸化。2个实验的代表。线和条表示误差条SEM。未配对双尾t检验，^†=p=0.053，*p<0.05，**p<0.01。

**图1。幼稚T细胞存活需要SPNS2**
**（a、b）**初始（CD44）数量^低的CD62L型^你好)外周CD4 T细胞（脾和LN联合）**（a）**、脾脏和LN（b） ●●●●。在8个实验中分析了8对。**（c–e）**选通**（c）**和PI频率⁺ **（d）**和凋亡**（e）**LN幼稚CD4。6对，6个实验。**（f）**同源标记的淋巴细胞来自*BCL2级*-Tg和WT同窝婴儿被共同转移（幼稚CD4计数为1:1）。21天后，在受试者组织中计数出原始CD4。11对，4个实验。t检验，*p<0.05，**p<0.01，**p<0.001，***p<0.0001。

**图2。幼稚T细胞存活依赖于S1P，而不是循环**
*自旋2*Δ小鼠和窝友对照组用DOP或载体治疗21天。PI频率⁺ **（a）**和凋亡**（b）**LN幼稚CD4。5组，3个实验。**（c）**标记一致*BCL2级*-Tg和同胞WT淋巴细胞共同转移（初始CD4计数为1:1）。21天后，在受试者的LN中计数了幼稚CD4。10组，4个实验。t检验，^†p=0.078，*p<0.05，**p<0.01，**p=0.001，***p<0.0001。

**图3。细胞自主S1PR1抑制细胞凋亡**
**（a–b）**成人*第1季度*^{飞行/飞行}*UBC公司*-对CreERT2小鼠和窝鼠对照组进行胸腺切除、三苯氧胺治疗，并在12周后进行分析。原始CD4数量**（a）**和凋亡的原始CD4的频率**（b）**5对，3个实验。**（c–d）**第45页第1页⁺用来自WT的BM混合物重组小鼠*UBC:GFP*小鼠和BM第1季度^{飞行/飞行}*UBC公司*-CreERT2 CD45.2⁺小鼠或室友对照组。嵌合体在重建6周后切除胸腺，4周后接受他莫昔芬治疗。**（c）**数量比*第1季度*^{飞行/飞行}*UBC公司*-CreERT2或控制初始CD4到GFP⁺幼稚的CD4。来自2个BM供体组的5对小鼠，在三苯氧胺治疗24周后的3个实验中进行分析（对照脾脏有4只小鼠）。**（d）**LN中凋亡原始CD4的频率。在5个实验中，对来自3个骨髓供体组的10对供体进行了他莫昔芬治疗12周或24周后的分析。t检验，**p<0.01，****p<0.0001。

**图4。幼稚T细胞需要S1PR1来维持线粒体含量**
**（a–b）**Western blot分析LN CD4 T细胞。VDAC1和calnexin的5个实验中的7对定量，COXIV的5个试验中的6对定量。**（c–d）**流式细胞术分析LN初始CD4。4对，4个实验。**（e–f）**分类LN原始CD4的OCR。显示一对技术复制品的曲线**（e）**，并在3个实验中汇编了4对**（f）**.黑点表示*第1季度*Δ和控件之间的灰点比率*第1季度*Δ*；BCL2级*-tg和*BCL2级*-tg控件。**（克–小时）**LN CD4 T细胞的免疫荧光。箭头，同位化示例。量化在6个实验中汇编了7对细胞。**（i–j）**Western blot分析LN CD4 T细胞。6对，4个实验。误差，SEM.t检验，*p<0.05，***p<0.001。

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鞘氨醇-1-磷酸作为淋巴细胞骑行和生存的门票。
Chang CH和Randolph GJ。 Chang CH等人。开发单元。2017年6月19日；41(6):576-578. doi:10.1016/j.devcel.2017.06.006。开发单元。2017 PMID：28633013 审查。
T细胞：与S1P共存。
博尔登·Y。博尔登·Y。 Nat Rev免疫学。2017年6月27日；17(7):404-405. doi:10.1038/nri.2017.73。 Nat Rev免疫学。2017 PMID：28652598 没有可用的摘要。
S1P：幼稚T细胞的长生不老药。
Pérès M、Montfort A、Andrieu-Abadie N、Colacios C、ségui B。 Pérès M等人。细胞分子免疫学。2018年7月；15(7):657-659. doi:10.1038/cmi.2017.110。Epub 2017年10月30日。细胞分子免疫学。2018 PMID：29082923 免费PMC文章。没有可用的摘要。

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鞘氨醇-1-磷酸作为淋巴细胞骑行和生存的门票。
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