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.2017年5月15日；22(5):787.
doi:10.3390/分子22050787。

固本抑瘤Ⅱ号抑制乳腺癌生长和转移与肝素酶表达降低及ERK和AKT途径磷酸化相关

张毅（音） 1, 张甘霖 2, 徐孙 三, 曹克新（Ke-Xin Cao） 4, 亚文尚 5, 穆新功 6, 丛马 7, 楠楠 8, 李金平 9 10, 于明伟 11, 杨国旺 12, 王晓敏 13
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固本抑瘤Ⅱ号抑制乳腺癌生长和转移与肝素酶表达降低及ERK和AKT途径磷酸化相关

张毅（音）等。 分子. .

摘要

古本一柳II（GYII）是我院使用的一种中药配方，对癌症患者有良好的疗效。在本研究中，我们研究了GYII对小鼠乳腺癌模型有益作用的分子机制。GYII在小鼠乳腺癌模型中显示出对肿瘤生长和转移的显著抑制作用。此外，GYII以剂量依赖的方式抑制4T1和MCF-7细胞的增殖。GYII分解配方（DR）对4T1细胞增殖和迁移有较好的抑制作用。此外，肿瘤组织中乙酰肝素酶的表达和血管生成程度降低。Western blot分析显示，经GYII及其分解配方（DR2和DR3）处理的细胞中乙酰肝素酶和生长因子的表达降低，从而降低了细胞外信号调节激酶（ERK）和丝氨酸-三嘌呤激酶（AKT）的磷酸化。这些结果表明，GYII在小鼠乳腺癌模型中发挥抗肿瘤生长和抗转移作用。GYII及其分解配方的抗肿瘤活性至少部分与乙酰肝素酶和生长因子表达降低有关，后者随后抑制ERK和AKT通路的激活。

关键词：ERK和AKT通路；古本异流二世；乳腺肿瘤；生长因子；乙酰肝素酶。

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数字

图1
图1
古本一柳II（GYII）抑制肿瘤生长。(A类)在4T1-luc2小鼠模型中，每天用GYII多糖、岩藻多糖或载体对动物进行25天的治疗。GYII组肿瘤重量减轻（IR=34%），高于岩藻多糖组（IR=30%）；(B类)原发性肿瘤的生物发光信号以总通量表示，并在第32天以光子/秒进行量化；(C类)对照组和GYII组小鼠的代表性图像。使用单向方差分析进行统计比较(*第页< 0.05).
图2
图2
GYII减少了肺转移。(A类)在第32天切除4T1-luc2原发肿瘤后检测微介导生物发光信号。GYII显著抑制肺转移(*第页< 0.05); (B类)经过或未经治疗的小鼠的典型生物发光图像。
图3
图3
GYII对乳腺癌细胞增殖的剂量依赖性抑制作用。用不同浓度的GYII处理三个乳腺癌细胞系，并用3-（4,5-二甲基-噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化铵（MTT）法监测细胞存活率。测量吸光度（570 nm）作为细胞存活的指标，对照组的存活率定义为100%。4T1的扩散(C类)和MCF-7(B类)GYII剂量依赖性地抑制细胞，而MDA-MB-231细胞的增殖(A类)受到中度影响。
图4
图4
GYII及其分解配方抑制小鼠4T1细胞增殖。实时细胞分析（RTCA）检测4T1细胞的时间依赖性增殖和细胞毒活性。GYII公司(A类); DR1（数字参考1）(B类); DR2型(C类); DR3（数字参考3）(D类); 和褐藻糖胶(E类)当细胞达到指数生长期（接种后48h）时，将稀释液加入细胞中。对细胞指数进行96小时的监测。三个独立实验的细胞指数值显示在右侧面板中。(*第页< 0.05, **第页< 0.01, ***第页< 0.0001).
图5
图5
GYII及其分解配方减弱了4T1细胞迁移和伤口愈合。(A类)Transwell的着色®Hoechst 33342膜，在荧光显微镜下观察（200倍放大）。右侧面板中显示的数据是通过对五个随机选择的字段进行计数，从三个独立的实验中获得的；(B类)接种细胞后，在16 h时应用细胞基底阻抗传感（ECIS），通过电穿孔产生损伤（箭头所示）。清洗完死细胞后，加入含有测试化合物的新鲜培养基，并监测细胞阻抗20小时。右侧面板显示了20小时内阻抗的变化，作为三个实验的平均值(**第页< 0.01, ***第页< 0.0001).
图6
图6
GYII及其分解配方降低了乙酰肝素酶的表达并减少了血管生成。用抗肝素酶对从动物身上切下的4T1乳腺肿瘤的福尔马林固定石蜡包埋5微米切片进行免疫染色(A类)和抗CD31(B类)抗体（放大200倍）。暴露于受试化合物36 h后，通过Western blotting分析每个细胞裂解液中的总蛋白，以测量乙酰肝素酶的表达(C类). 数据以平均值±SD表示，并归一化为β-肌动蛋白(*第页< 0.05, **第页< 0.01).
图7
图7
GYII及其分解配方抑制4T1细胞中生长因子的表达。用试验化合物和碱性成纤维细胞生长因子（FGF-2）的表达处理细胞(A类)和血管内皮生长因子（VEGF）(B类)通过Western blotting测定。数据以平均值±SD表示，并归一化为β-肌动蛋白(**第页< 0.01).
图8
图8
GYII及其分解配方调节4T1细胞的细胞外信号调节激酶（ERK）和磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-三烯激酶（PI3K/AKT）通路。用测试化合物和(A类)p-ERK；(B类)用蛋白质印迹法检测p-PI3K和p-AKT。数据以平均值±SD表示，并归一化为β-肌动蛋白(*第页< 0.05, **第页< 0.01).
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