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.2017年8月：12:1004-2010。
doi:10.1016/j.redox.2017.04.034。 Epub 2017年5月3日。

高尔基依赖途径支持血管平滑肌细胞蛋白质二硫键异构酶外化

Thasís L s Araujo公司 1, 卡罗来纳·G·费尔南德斯 1, Francisco R M Laurindo公司 2
附属公司

高尔基依赖途径支持血管平滑肌细胞蛋白质二硫键异构酶外化

Thasís L s Araujo公司等。 氧化还原生物. 2017年8月.

摘要

细胞外细胞内分子伴侣池越来越明显。内质网氧化还原伴侣蛋白二硫键异构酶A1（PDI）的细胞周/细胞外（pec）池参与血栓形成和血管重塑，而PDI的外化途径仍不明确。在内皮细胞中，囊泡型PDI分泌涉及经典和非传统途径，而在血小板中，PDI胞吐涉及肌动蛋白细胞骨架。然而，对血管平滑肌细胞（VSMC）中的pecPDI知之甚少。在这里，我们发现VSMC显示出一个强大的细胞表面（cs）PDI池，它独立于静电力与cs结合。然而，与其他细胞相反，VSMC中未检测到可溶性分泌PDI池。钙离子载体A23187和TNFα增强VSMC csPDI。此外，VSMC PDI外化是通过Golgi-bypass非常规途径发生的，这与细胞骨架或溶酶体无关。体外野生型小鼠主动脉中不存在分泌的PDI，但PDI过度表达的小鼠中显著增强。VSMC pecPDI的这种特征强化了PDI外化的细胞类型和上下文特定路径。

关键词：细胞表面伴侣；内质网；蛋白质二硫异构酶；非常规蛋白质运输；血管平滑肌细胞。

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数字

图1
图1
细胞表面PDI在VSMC中不通过ER-Golgi途径外化。（A） 用BFA 18µM或Mon 18µM处理原代VSMC 4.5 h，并进行细胞表面生物素化，然后用抗PDI RL90染色。所有数据均为三个独立实验的平均值±SEM。（B） 在基础条件下或用BFA 10µM或Mon 10µM处理4.5 h后，对未渗透VSMC中PDI（红色）进行免疫荧光染色。所有免疫荧光数据均通过识别C末端结构域的抗PDI SPA891获得。所有图像都代表了至少三个独立实验。（有关此图例中颜色参考的解释，请读者参阅本文的web版本。）
图2
图2
BFA促进VSMC斑块/团块样PDI模式（A）在基础条件下或用BFA 10µM处理4.5小时后，渗透性VSMC中PDIA1（红色）和Erp72（绿色）的免疫荧光染色。数据作为独立的三份进行。（B） 类似实验（A）使用从汇总图像库获得的P0图像来描述所有计划中的染色蛋白质，从而可以计算材料和方法中描述的皮尔逊相关系数。所有显示的图像都代表了至少三个独立实验。（有关此图例中颜色参考的解释，请读者参阅本文的web版本。）
图3
图3
细胞骨架紊乱或溶酶体损伤未改变VSMC PDI外化。（A） PDI（红色）和卵磷脂的免疫荧光染色，显示基线时或与CytD 0.5μM和甲胺10 mM孵育1.5 h后渗透性VSMC中的F-actin（白色）。（B） 在基础状态下或如（A）所述的治疗后，对未经渗透的VSMC进行PDI（红色）免疫荧光染色。所有显示的图像都代表了至少三个独立实验。（有关此图例中颜色参考的解释，请读者参阅本文的web版本。）
图4。
图4
VSMC中的钙离子载体A23187增加了细胞表面PDI。基线时或与钙离子载体A23187 5μM孵育0.5 h后，非渗透性VSMC中PDI（红色）的免疫荧光染色。如有指示，将VSMC与0.1 M碳酸钠（pH=9.0）孵育10 min，然后对未渗透VSMC中的PDIA1（红色）进行免疫荧光染色。所有显示的图像都代表了至少三个独立实验。（有关此图例中颜色参考的解释，请读者参阅本文的web版本。）
图5
图5
TNF-α增强VSMC细胞表面PDI。基线时或与TNF-α50 ng/mL孵育0.5 h后，非渗透性VSMC中PDI（红色）的免疫荧光染色。所有显示的图像都代表了至少三个独立实验。（有关此图例中颜色参考的解释，请读者参阅本文的web版本。）
图6
图6
野生型或PDI过度表达小鼠离体主动脉段的PDI分泌。按照材料和方法中的描述制备条件培养基，然后进行western blot分析。用抗PDI RL90、抗Hsp70、抗Myc标签和β肌动蛋白对同一膜进行染色。数据为四只动物的平均值±SEM，*p<0.05，t吨-测试。
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