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.2017年4月12日11时212分。
doi:10.3389/fnins.2017.00212。 2017年电子收集。

GFAP-TK转基因小鼠脑内星形胶质细胞标记物的增强表达

张晓琴 1, 王东皮 1 2, 潘洪宇 1, 孙炳贵 1
附属公司

GFAP-TK转基因小鼠脑内星形胶质细胞标记物的增强表达

张晓琴等。 前神经科学. .

摘要

GFAP-TK小鼠广泛用于神经发生和反应性星形胶质细胞的研究。先前的研究报告称，GCV治疗GFAP-TK小鼠导致神经发生减少和增殖中表达GFAP的星形胶质细胞缺失，而不影响成熟的表达GFAP星形胶质细胞。在本研究中，我们发现在一系列GFAP-TK小鼠（Jackson实验室，库存编号005698）中，无论是否使用GCV治疗，表达GFAP和波形蛋白的星形胶质细胞都显著增加，而神经元和小胶质细胞没有受到影响。然而，在美国国立卫生院Heather Cameron博士实验室生产的第二组GFAP-TK小鼠（MMRRC，库存编号037351-UNC）中，无论GCV治疗与否，海马和皮层中的GFAP和波形蛋白表达均无差异。此外，在Jackson实验室的GFAP-TK小鼠的皮层和海马中发现了水通道蛋白4（AQP4）的增强表达，但在NIH的GFAP-TK小鼠的大脑中没有发现。我们的数据表明，我们应该仔细选择不同的GFAP-TK小鼠系来研究成年神经发生或反应性星形胶质细胞。

关键词：GFAP；GFAP-TK小鼠；成人神经发生；星形胶质细胞；波形蛋白。

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数字

图1
图1
GCV治疗对TK-1和TK-2小鼠齿状回成年神经元消融的影响。（A）DCX的代表性显微照片+细胞和Ki67+GCV处理0、10、20、40 mg kg的TK-1和TK-2小鼠齿状回细胞−1每天。比例尺，200μm。（B、C）TK-1小鼠齿状回DCX阳性细胞数量的定量(n个=3只小鼠，每只小鼠5片脑片）和TK-2小鼠(n个=3只小鼠，每只小鼠5片脑片），GCV治疗剂量为0、10、20、40 mg kg−1每天。（D、E）TK-1小鼠齿状回Ki67阳性细胞数量的定量(n个=3只小鼠，每只小鼠5片脑片）和TK-2小鼠(n个=3只小鼠，每只小鼠5片脑切片），以0、10、20、40 mg/kg的GCV治疗−1每天。数据表示平均值±SEM，*P（P）< 0.05,***P（P）<0.001（采用事后土耳其多重比较测试的单因素方差分析）。
图2
图2
GFAP和波形蛋白在3月龄TK-1小鼠海马和皮层的表达显著增加。（A）GFAP的代表性显微照片+3个月大的TK-1和TK-2小鼠及其年龄匹配的对照组的皮层和海马细胞。比例尺，300μm。（B）GFAP数量的量化+3个月大的TK-1皮层细胞(n个=11只小鼠，每只小鼠3片脑片）和TK-2小鼠(n个=8只小鼠，每只小鼠3片脑片）及其年龄匹配的对照组(n个=每组4只小鼠，每只小鼠3片脑片）。（C）波形蛋白数量的量化+3个月大的TK-1皮层细胞(n个=11只小鼠，每只小鼠3片脑片）和TK-2小鼠(n个=9只小鼠，每只小鼠3片脑片）及其年龄匹配的对照组(n个=每组4只小鼠，每只小鼠3片脑片）。（D）GFAP和波形蛋白、GAPDH的蛋白带被切断作为负荷控制。（E）3个月大的TK-1大鼠海马中GFAP水平的定量(n个=6只小鼠）和TK-2小鼠(n个=5只小鼠）及其年龄匹配的对照组(n个=每组4只小鼠）。（F）3个月大的TK-1大鼠海马波形蛋白水平的定量(n个=7只小鼠）和TK-2小鼠(n个=8只小鼠）及其年龄匹配的对照组(n个=每组3只小鼠）。数据表示平均值±SEM，*P（P）< 0.05,**P（P）< 0.01,***P（P）<0.001（未配对t吨-测试）。
图3
图3
在3个月大的TK-1小鼠（A-F）的皮质和海马中，GFAP的表达增加GFAP的代表性显微照片+1.5、2、3、5、6和8月龄TK-1小鼠的皮层和海马细胞。比例尺，500μm。（G）为本研究分析的大脑皮层和海马区示意图。（H）GFAP数量的量化+1.5、2、3、5、6和8个月大的TK-1小鼠皮层中的细胞(n个=每组3只小鼠，每只小鼠3片脑片）。（I–L）GFAP数量的量化+1.5、2、3、5、6和8月龄TK-1小鼠海马中的细胞(n个=每组3只小鼠，每只小鼠3片脑片）。（一），CA1-2；（J），CA3；（K），DG；（左），希卢斯。数据表示平均值±SEM，*P（P）< 0.05,**P（P）< 0.01,***P（P）<0.001（单向方差分析事后（post-hoc）土耳其的多重比较测试）。
图4
图4
在TK-1和TK-2小鼠的皮层和海马中，Iba1的表达没有受到影响。（A）Iba1的代表性显微照片+3个月大的TK-1和TK-2小鼠及其年龄匹配的对照组的皮层和海马中的细胞。比例尺，200μm。（B、C）使用图像分析软件对大脑皮层和海马的荧光强度进行量化。(n个=每组3只小鼠，每只小鼠3片脑片）。（D）大脑皮层和海马中的Iba1蛋白带，GAPDH被切断作为负荷控制。（E）3个月大的TK-1大脑皮层中Iba1水平的量化(n个=4只小鼠）和TK-2小鼠(n个=4只小鼠）及其年龄匹配的对照组(n个=每组4只小鼠）。（F）3个月大的TK-1大鼠海马中Iba1水平的定量(n个=4只小鼠）和TK-2小鼠(n个=4只小鼠）及其年龄匹配的对照组(n个=每组4只小鼠）。数据表示平均值±SEM。
图5
图5
在TK-1和TK-2小鼠的皮层和海马中，NeuN和MAP2的表达没有受到影响（2）。（A）NeuN的代表性显微照片+3个月大的TK-1和TK-2小鼠及其年龄匹配的对照组的皮层和海马中的细胞。（B）MAP2的代表性显微照片+3个月大的TK-1和TK-2小鼠及其年龄匹配的对照组的皮层和海马中的细胞。比例尺，200μm。（C、D）皮层和海马神经元阳性信号荧光强度的量化。(n个=每组3只小鼠，每只小鼠3片脑片）。（E、F）皮层和海马MAP2阳性信号荧光强度的量化。(n个=每组3只小鼠，每只小鼠3片脑片）。数据表示平均值±SEM。
图6
图6
AQP4在3月龄TK-1小鼠的皮层和海马中的表达增加。（A）3个月大的TK-1和TK-2小鼠及其年龄匹配的对照组的皮层和海马AQP4表达的代表性显微照片。比例尺，200μm。（B、C）使用图像分析软件对大脑皮层和海马的荧光强度进行量化。(n个=每组3只小鼠，每只小鼠3片脑片）。（D）皮质和海马中AQP4的蛋白带，GAPDH被切断作为负荷对照。（E）3个月大的TK-1大脑皮层AQP4水平的定量(n个=7只小鼠）和TK-2小鼠(n个=4只小鼠）及其年龄匹配的对照组(n个=每组4只小鼠）。（F）3个月大的TK-1大鼠海马AQP4水平的定量(n个=7只小鼠）和TK-2小鼠(n个=4只小鼠）及其年龄匹配的对照组(n个＝每组4只小鼠）。数据表示平均值±SEM，*P（P）<0.05（未配对t吨-测试）。
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