跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2017年6月；15（6）：3555-3565。
doi:10.3892/mmr.2017.6441。 Epub 2017年4月7日。

表面活性蛋白A在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的中枢神经系统中表达，并抑制人类星形胶质细胞和小胶质细胞的炎症反应

薛扬（音译） 1, Jun Yan先生 1, 胡安·冯 1
附属公司

表面活性蛋白A在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的中枢神经系统中表达，并抑制人类星形胶质细胞和小胶质细胞的炎症反应

薛扬（音译）等。 分子医学代表. 2017年6月.

摘要

集合蛋白表面活性剂蛋白-A（SP‑A）是一种有效的宿主防御分子，因其在维持肺内环境稳定和调节炎症反应方面的作用而得到广泛认可。虽然先前的研究已在许多肺外组织中检测到SP‑A，但关于其在中枢神经系统（CNS）中的表达以及在神经炎症疾病（如多发性硬化症（MS））中的潜在影响，仍缺乏信息。本研究使用实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）（MS最常用的动物模型）来研究疾病进展不同阶段中枢神经系统中SP‑A的表达。此外，还对脂多糖（LPS）刺激的人类星形胶质细胞和小胶质细胞进行了体外实验，以研究SP‑A在调节中枢神经系统炎症反应中的潜在作用。本研究的结果表明，SP‑A在大鼠中枢神经系统中广泛分布，并确定了在EAE不同阶段的特定表达模式。在体外，目前的研究表明，LPS对人类星形胶质细胞和小胶质细胞的治疗以剂量依赖的方式促进了SP‑A的表达。此外，外源性SP‑A蛋白显著降低Toll‑like receptor 4和核因子‑κB的表达，并降低白细胞介素‑1β和肿瘤坏死因子‑α的水平。当前研究结果表明，SP‑a在调节中枢神经系统炎症反应中具有潜在作用。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
免疫组织化学和免疫印迹法检测大鼠中枢神经系统组织中的SP-A。（A） 用免疫组织化学方法在放大×400倍镜下检测正常大鼠中枢神经系统中SP-A的表达。对Co、Hc、CP、Ce、BS和SC的切片进行了分析。正常大鼠的Lu切片作为阳性对照染色，正常大鼠脑的阴性对照切片仅用二级抗体染色。箭头表示SP-A表达细胞的位置。（B） western blot分析检测SC、CP、Hc、Co和BS中分离的蛋白质，Lu作为阳性对照。（C） 进行Western blot定量分析，并将水平与β-肌动蛋白进行归一化。数据表示为平均值±标准偏差。钴，皮层；Hc，海马；脉络丛；Ce，小脑；BS，脑干；SC，脊髓；卢，肺；表面活性蛋白-A；CNS，中枢神经系统。
图2。
图2。
EAE不同阶段大鼠中枢神经系统GFAP、Iba-1、CD11b和SP-A的H&E染色和免疫组织化学染色。（A） 用H&E、GFAP阳性星形胶质细胞、Iba-1阳性小胶质细胞、CD11b炎症细胞通用标记物和SP-A对EAE初期、高峰和恢复期的CNS切片进行炎症染色。全图像放大×200和角图像放大×400。正常条件下的大鼠切片作为对照。箭头表示SP-A表达细胞的位置。（B） 正常大鼠Lu切片染色作为阳性对照。正常大鼠CNS阴性对照切片仅用二级抗体处理，未染色GFAP、Iba-1、CD11b和SP-A。放大倍数，×400。H&E、苏木精和曙红；胶质纤维酸性蛋白；Iba-1，电离钙结合适配器分子1；表面活性蛋白-A；卢，肺；中枢神经系统；EAE，实验性自身免疫性脑脊髓炎。
图3。
图3。
EAE不同阶段大鼠中枢神经系统GFAP、Iba-1、CD11b和SP-A的Western blot分析。（A） 通过蛋白质印迹检测在EAE的初始、峰值和恢复阶段从大鼠CNS获得的蛋白质的GFAP、IBA-1、CD11b和SP-A。（B） 对蛋白质印迹进行定量分析，并将水平与β-肌动蛋白进行归一化。结果显示为平均值±标准偏差*与对照组相比P<0.05；#与初期组相比P<0.05；▲与峰值期组相比，P<0.05。胶质纤维酸性蛋白；Iba-1，电离钙结合适配器分子1；表面活性蛋白-A；中枢神经系统；EAE，实验性自身免疫性脑脊髓炎。
图4。
图4。
双免疫荧光染色检测大鼠中枢神经系统星形胶质细胞和小胶质细胞上的SP-A。（A） 切片用抗GFAP和抗SP-A或抗Iba-1和抗SPA抗体进行免疫染色。用Hoechst 33258对细胞核进行复染。GFAP+/SP-A+星形胶质细胞用箭头表示，Iba-1+/SP-A-小胶质细胞用合并图像中的箭头表示。放大倍数，×400。（B） 仅用二级抗体处理的阴性对照切片未染色GFAP、Iba-1和SP-A。放大倍数，×400。胶质纤维酸性蛋白；表面活性蛋白-A；Iba-1，电离钙结合适配器分子1。
图5。
图5。
人星形胶质细胞和小胶质细胞SP-A的免疫组织化学染色。固定人星形胶质细胞仅用二级抗体染色（A）SP-A或（B）。仅用第二抗体对固定的人小胶质细胞进行（C）SP-A或（D）染色。放大倍数，×400。所有切片用苏木精进行细胞核复染。免疫阳性的SP-A存在于人星形胶质细胞的细胞质和细胞核中，但仅存在于小胶质细胞的胞质中。SP-A，表面活性蛋白-A。
图6。
图6。
LPS刺激的人星形胶质细胞和小胶质细胞中SP-A蛋白水平升高。用不同剂量的LPS（0、1、5和10µg/ml）刺激人星形胶质细胞和小胶质细胞24小时，或用10µ/ml LPS刺激不同时间（2、4、8、16或24小时）。（A） 通过蛋白质印迹分析来评估从培养的细胞中分离的SP-A蛋白水平。定量分析来自（B）不同LPS剂量和（C）不同接触10µg/ml LPS持续时间的蛋白质印迹结果相对于β-肌动蛋白进行了标准化。结果显示为平均值±标准偏差*P<0.05和**P<0.01，括号内表示比较结果。表面活性蛋白-A；脂多糖。
图7。
图7。
外源性SP-A对LPS刺激的人星形胶质细胞和小胶质细胞TLR4和NF-κB水平的影响。（A） 采用western blot分析法测定人星形胶质细胞和小胶质细胞TLR4和NF-κB p65蛋白水平。SP-A，仅用0.5µg/ml SP-A处理的细胞；SP-A+LPS，用0.5μg/ml SP-A+5μg/ml LPS处理的细胞；对照组，未治疗组；LPS，仅用5µg/ml LPS处理的细胞。人类星形胶质细胞和小胶质细胞中与β-actin相关的（B）TLR4和（C）NF-κB p65的密度定量*P<0.05，括号内表示比较。TLR4，Toll样受体4；核因子-κB；表面活性蛋白-A；脂多糖。
图8。
图8。
外源性SP-A对LPS刺激的人星形胶质细胞和小胶质细胞中IL-1β和TNF-α细胞因子水平的影响。用ELISA法测定用5µg/ml LPS和/或0.5µg/ml SP-A刺激的星形胶质细胞和小胶质细胞培养液中IL-1β（A）和TNF-α（B）的水平。结果显示为平均值±标准偏差*P<0.05，括号内表示比较。IL-1β、IL-1β；脂多糖；表面活性蛋白-A；TNF-α、肿瘤坏死因子-α。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

工具书类

    1. Wright JR.表面活性蛋白的免疫调节功能。Nat Rev免疫学。2005;5:58–68. doi:10.1038/nri1528。-内政部-公共医学
    1. Chroneos ZC、Midde K、Sever-Chroneos Z、Jagannath C.肺表面活性物质和结核病。结核病（爱丁堡）2009；89（补充1）：S10–S14。doi:10.1016/S1472-9792（09）70005-8。-内政部-公共医学
    1. Kishore U、Greenhough TJ、Waters P、Shrive AK、Ghai R、Kamran MF、Bernal AL、Reid KB、Madan T、Chakraborty T。表面活性剂蛋白SP-A和SP-D：结构、功能和受体。分子免疫学。2006;43:1293–1315。doi:10.1016/j.molimm.2005.08.004。-内政部-公共医学
    1. Schaub B、Westlake RM、He H、Arestides R、Haley KJ、Campo M、Velasco G、Bellou A、Hawgood S、Poulain FR等。表面活性剂蛋白D缺乏影响过敏性免疫反应。《临床实验过敏》2004；34:1819–1826. doi:10.1111/j.1365-2222.2004.02068.x。-内政部-公共医学
    1. Hartshorn KL、Crouch E、White MR、Colamussi ML、Kakkanatt A、Tauber B、Shepherd V、Sastry KN。肺表面活性物质蛋白A和D增强细菌对中性粒细胞的摄取。美国生理学杂志。1998;274:L958–L969。-公共医学

MeSH术语