跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2017年6月：506:34-44。
doi:10.1016/j.virol.2017.03.002。 Epub 2017年3月21日。

人类免疫缺陷病毒1 ASP RNA通过招募多梳抑制复合物2和促进核小体组装来促进病毒潜伏期

胡安·萨帕塔 1, 费德里卡·坎皮隆戈 1, 罗伯特·巴克利 2, 凯瑟琳·德马里诺 2, 玛丽亚·德·伊格莱西亚斯·乌塞尔 1, 法塔赫·卡珊奇 2, 法比奥·罗梅里奥 3
附属公司

人类免疫缺陷病毒1 ASP RNA通过募集多梳抑制复合体2和促进核小体组装来促进病毒潜伏

胡安·萨帕塔等。 病毒学. 2017年6月.

摘要

HIV-1 5'LTR的各种表观遗传标记抑制前病毒表达并促进潜伏期。被称为长非编码RNA（lncRNAs）的细胞反义转录物将多梳阻遏物复合物2（PRC2）招募到基因启动子，该启动子催化组蛋白H3（H3K27me3）上赖氨酸27的三甲基化，从而促进核小体组装并抑制基因表达。我们发现，从3'LTR表达的HIV-1反义转录物和编码反义蛋白ASP可促进前病毒潜伏期。ASP RNA的表达降低了HIV-1在Jurkat细胞中的复制。此外，ASP RNA的表达促进了Jurkat E4细胞中HIV-1潜伏期的建立和维持。我们表明，该转录物与HIV-1 5'LTR相互作用并将PRC2招募到HIV-1 5’LTR，增加抑制性表观遗传标记H3K27me3的积累，同时减少RNA聚合酶II，从而减少前病毒转录。总之，我们的结果表明，HIV-1 ASP转录物通过PRC2途径促进HIV-1 5'LTR的表观遗传沉默和前病毒潜伏期。

关键词：ASP；反义转录本；表观遗传标记；H3K27me3；HIV-1；PRC2；病毒潜伏期。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突

作者声明，他们与本文的内容没有利益冲突。内容完全由作者负责，不一定代表国家卫生研究院的官方观点。

数字

图1
图1
开发一种高灵敏度、特异性定量RT-PCR检测ASP RNA表达的方法。a组：特异检测ASP转录物而非HIV-1义转录物的RT-PCR分析方案。RT引物（AST-tag）在cDNA的5′端引入一个标记，作为TaqMan PCR子序列中反向引物的模板。B组：实时PCR示踪显示，仅用感染细胞的RNA进行扩增，并且只有在存在AST-tag RT引物和RT酶的情况下进行RT反应（cDNA在三次PCR反应中进行分析）。C组：用10°-10获得PCR痕迹5携带ASP RNA扩增子的线性化pUC57质粒的拷贝（所有稀释液在三份样品中运行）。
图2
图2
各种HIV-1感染的CD4+T细胞系统中ASP RNA水平。使用图1所示的链特异性定量RT-PCR测定来评估ASP转录物的表达水平。1。A组：原发性感染人CD4+T细胞ASP RNA表达的定量体外试验。感染HIV-1的CD4+T细胞总RNAIIIB类用AST-tag RT引物或不使用AST-tagRT引物，用RT酶或不使用RT酶逆转录（或未感染细胞），然后用PCR对三份样品进行检测。B组：定量各种慢性感染的CD4+T细胞系（ACH2、8E5、J1.1和H9/IIIB）及其未感染的亲代细胞系（A3.01、Jurkat和H9）中ASP RNA的表达。在有或无AST-tag RT引物以及有或无RT酶的情况下进行RT反应。只显示+/+组合。C组：量化来自两名未感染供体（对照组A和B）和三名接受抑制性抗逆转录病毒治疗>24个月的感染患者（患者A、B和C）静止CD4+T细胞中ASP RNA的表达。在有或无AST-tag RT引物以及有或无RT酶的情况下进行RT反应。只显示+/+组合。图表报告了从三个重复样品计算的平均值和标准偏差。ND：未检测到。
图3
图3
HIV-1 ASP RNA抑制病毒复制。Jurkat细胞用基于pLVX的慢病毒稳定转导，该慢病毒驱动ASP RNA序列的CMV启动子依赖性表达停止ORF（J-ASTmut）的密码子3、7和10。作为对照，我们建立了一个用空慢病毒（J-LVX）稳定转导的Jurkat细胞系。A组：父母Jurkat细胞、J-LVX细胞和J-ASTmut细胞中ASP RNA表达的定量。使用来自三个细胞系的等量总RNA，通过图1所示的链特异性RT-qPCR分析来测量ASP RNA的表达。ND：未检测到。B组：父母Jurkat细胞和两个稳定转导的细胞系（J-LVX和J-ASTmut）感染了等量的HIV-1IIIB类棘球接种（m.o.i.01），在完全培养基中培养。在培养物中通过HIV-1p24-ELISA在10天内评估病毒复制。图表报告了从三个重复样品计算的平均值和标准偏差。
图4
图4
ASP RNA的表达抑制HIV-1潜伏期的再激活。潜伏感染的Jurkat E4细胞被一种基于pLVX的慢病毒稳定转导，该慢病毒驱动CMV启动子依赖的ASP转录序列的表达停止ORF（JE4-ASTmut）的密码子3、7和10。作为对照，我们用空慢病毒（JE4-LVX）稳定转导了Jurkat E4细胞系。A组：Jurkat E4、JE4-ASTmut和JE4-LVX细胞中ASP RNA表达的定量。使用来自三个细胞系的等量总RNA，通过图1所示的链特异性RT-qPCR分析来测量ASP RNA的表达。B组：暴露于不断增加的TNFα（0、0.01、0.1和1.0 ng/ml）24小时后，亲代Jurkat E4、JE4-LVX和JE4-ASTmut细胞中HIV-1重新激活（通过GFP表达测量）。图中显示了三个独立实验的结果，并报告了平均值和标准差。图C：图B中三个实验之一的流式细胞术图。图D：暴露于增加量的SAHA（0、0.01、0.1和1.0μM）24小时的亲本Jurkat E4、JE4-LVX和JE4-ASTmut细胞中的HIV-1再激活（通过GFP表达测量）。我们进行了三个独立实验，图中显示了三个实验之一的流式细胞仪图。
图5
图5
ASP RNA的表达促进HIV-1潜伏期的建立。父母Jurkat E4、JE4-LVX和JE4-ASTmut细胞用10 ng/ml TNFα处理24 h，以重新激活潜伏期的HIV-1。然后用流式细胞术跟踪48小时恢复潜伏期的动力学。A组：在第0时间和之后每隔12小时采集细胞，通过流式细胞术评估GFP+细胞的百分比来测量HIV-1的潜伏期恢复。图中显示了三个独立实验的结果，并报告了平均值和标准偏差。B组：A组中三个实验之一的流式细胞仪图。
图6
图6
HIV-1 ASP转录物在转录水平抑制HIV-1表达。ChIP分析测量SAHA治疗前后Jurkat E4、JE4-LVX和JE4-ASTmut中HIV-1启动子（A组）、Nuc-1（B组）和HIV-1 gag基因（C组）RNA Pol II的存在。图表报告了从三个重复样品计算的平均值和标准偏差。
图7
图7
表达HIV-1 ASP RNA的细胞不会对EZH2抑制剂重新激活潜伏的HIV-1。EZH2抑制剂对Jurkat E4、JE4-LVX和JE4-ASTmut细胞中潜伏HIV-1再激活的影响。A组：增加EZH2抑制剂EPZ-6438（2.5、7.5和15μM）的剂量处理细胞4天，然后测定GFP阳性细胞的百分比，以衡量病毒的重新激活。图表显示了三个独立实验的结果，并报告了平均值和SD值。B组：A组中三个实验之一的流式细胞术图。C组：流式细胞仪图，显示对另外两种EZH2抑制剂CPI-169和EI1的反应。
图8
图8
HIV-1 ASP RNA通过将PRC2招募到5′LTR来促进HIV-1潜伏期，从而在Nuc-1产生抑制性表观遗传标记。在用EZH2特异性抑制剂EPZ-6438处理前后，评估组蛋白赖氨酸甲基转移酶EZH2（图A）和组蛋白H3与三甲基化赖氨酸27（H3K27me3；图B）在Jurkat E4、JE4-LVX和JE4-ASTmut中Nuc-1的存在的ChIP测定。图表报告了从三个重复样品计算的平均值和标准偏差。
图9
图9
HIV-1 ASP转录物与多囊抑制复合物2（PRC2）的两个成员EZH2和SUZ12特异性相互作用。用H9/IIIB细胞和针对两个PRC2成员（EZH2和SUZ12）的抗体或对照IgG进行RNA免疫沉淀分析（RIP）。用RT-qPCR分析洗脱的RNA，以测量ASP RNA的存在（通过图1所示的链特异性分析），细胞lncRNAHOTAIR公司和阴性对照U1 snRNA。图表报告了三个重复样品的平均值和标准偏差。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Archin NM、Liberty AL、Kashuba AD、Choudhary SK、Kuruc JD、Crooks AM、Parker DC、Anderson EM、Kearney MF、Strate MC、Richman DD、Hudgens MG、Bosch RJ、Coffin JM、Eron JJ、Hazuda DJ、Margolis DM。服用伏立诺治疗可干扰抗逆转录病毒治疗患者的HIV-1潜伏期。自然。2012;487:482–485.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Barbeau B，Mesnard JM。从人类T细胞嗜淋巴病毒（HTLVs）病毒中的反义转录中寻找意义。2011;3:456–468。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Barbeau B，Mesnard JM。逆转录病毒的慢性感染有意义吗？微生物趋势。2015;23:367–375.-公共医学
    1. Bentley K、Deacon N、Sonza S、Zeichner S、Churchill M。HIV-1 LTR作为负义转录启动子的突变分析。维罗尔拱门。2004年；149:2277–2294.-公共医学
    1. Bierhoff H，Schmitz K，Maass F，Ye J，Grummt I.正、反义方向的非编码转录物调节核糖体RNA基因的表观遗传状态。冷泉Harb Symb Quant生物。2010;75:357–364.-公共医学

出版物类型

MeSH术语