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.2017年3月3日;18(3):546.
doi:10.3390/ijms18030546。

随机定位机对人甲状腺滤泡癌细胞的蛋白质组分析

附属公司

随机定位机对人甲状腺滤泡癌细胞的蛋白质组分析

约翰·鲍尔等。 国际分子科学杂志. .

摘要

几年前,我们在随机定位机(RPM)上培养的人类甲状腺癌细胞的实验中检测到了多细胞球体的形成。RPM是一种地面模型,通过不断改变样品的方向来模拟微重力。从那时起,我们研究了触发细胞离开单层并聚集成球体的细胞机制。我们的工作重点是生长改变期间基因表达模式、蛋白质浓度和分泌到培养上清液中的因子中与球体相关的变化。我们检测到诱导血管生成的因素、整合素的组成、微重力下细胞单层的密度、小窝蛋白-1的生成增强以及核因子kappa B p65可能在甲状腺癌细胞球形形成过程中发挥作用。在本研究中,我们对FTC-133甲状腺癌细胞进行了深入的蛋白质组分析,该细胞培养条件旨在鼓励或阻止球体的形成。实验揭示了5900多种蛋白质。他们的评估证实并解释了上述观察结果。此外,我们了解到,RPM暴露后生长在单层或球体中的FTC-133细胞以不同的方式将vinculin、paxillin、局灶粘附激酶1和腺嘌呤二磷酸(ADP)-核糖基化因子6并入局灶粘附复合体。

关键词:细胞隔室;质谱;路径分析;蛋白质组学;随机定位机。

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提交人声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
将FTC-133细胞暴露于培养条件1–5下,按总蛋白含量标准化,进行Western blot分析和密度测定评估:(一个)当次级融合单层暴露于随机定位机(RPM)中3天(d)时,c-Jun N末端激酶1(JNK-1)蛋白没有显著改变。与1相比,培养条件5的贴壁细胞(AD)中JNK-1显著减少-条件;(B类)与AD(培养条件3)相比,多细胞球体(MCS)细胞中的文丘里蛋白减少,并且在AD 1中与AD相比(培养条件3);(C类)与1相比,MCS中Caveolin 1(Cav-1)蛋白显著降低和AD(RPM);(D类)AD-RPM样品中的核因子κB(NFκB)p65蛋白与相应的1-条件(培养条件4);(E类)与培养条件1相比,培养条件5的AD中的黏着斑激酶1(FAK-1,也称为蛋白酪氨酸激酶2或PTK2)蛋白升高; (F类)甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)密度测定评估,归一化为总蛋白质含量(Ponceau S红色染色);(G公司)蛋白质印迹带*第页< 0.05;n个=每组5个样本。
图2
图2
样品2和/或3中发现的属于整合素信号通路的蛋白质的相互作用和定位。焦点粘附蛋白paxillin(PXN)、vinculin(VCL)、PTK2和ADB-核糖基化因子6(ARF6)以绿色边缘标记,可能受ASAP1蛋白(Arf-GAP带SH3结构域、ANK重复序列和PH结构域包含蛋白1)的影响,以红色边缘标记,仅在样品2中以及p130cas和丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)蛋白中发现,标记为蓝色边缘,仅在样品3中发现。箭头表示相互作用;膜双层、核(圆)和线粒体轮廓定位图。
图3
图3
蛋白质的相互作用和定位,属于血管生成素信号通路,在样品2和/或3中发现。在样品2和3中发现了所有由均匀的绿色或蓝色边缘标记的蛋白质,而中国IKBKB公司BIRC5公司RAS1系统PIK3R2PAK1IP1系列AKT2型仅在样品3中发现上半部红色边缘标记的。的蛋白质中国IKBKB公司BIRC5公司RAS1系统IKBKAP公司IKBKG公司PTPN11号机组NFKB1型NFKB2型RELA公司仅属于血管生成素途径。其余蛋白质同时属于整合素信号和血管生成素途径。箭头表示相互作用,而T形条表示抑制;膜双层、核(圆)和线粒体轮廓定位图。

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