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.2017年4月4日;8(14):22534-22549.
doi:10.18632/目标11522。

神经内分泌肿瘤的促骨作用:CXCL12/CXCR4通路在体外促进EMT中的作用

附属公司

神经内分泌肿瘤的促骨作用:CXCL12/CXCR4通路在体外促进EMT中的作用

毛罗·西维斯等。 Oncotarget公司. .

摘要

大约20%的患者的神经内分泌肿瘤转移到骨骼。我们之前已经证明上皮-间充质转化(EMT)调节NET向骨性,CXCR4过度表达预测骨扩散。在这里,我们使用代表胰腺(BON1、CM、QGP1)、肠道(CNDT 2.5)和支气管起源(H727)的细胞系,揭示了CXCL12/CXCR4轴激活与NETs骨定植之间的分子机制。结合流式细胞术和ELISA,BON1、CM和QGP1细胞被定义为CXCR4high/CXCL12low,而H727和CNDT2.5细胞被定义为由CXCR4low/CXCL12 high。CXCL12对细胞增殖不起作用,但通过使用或不使用Matrigel膜的transwell分析评估,CXCR4high/CXCL12low细胞的体外向骨性显著增加。在这些细胞中,CXCL12在体外诱导了一个显著的EMT样转录转变,获得了间充质形状。CXCR4高/CXCL12低NET细胞的细胞核通常富含非磷酸化CXCR4,特别是在激动剂刺激下。通过siRNA沉默CXCR4可以阻止CXCL12诱导的CXCR4high/CXCL12low NET细胞系中的EMT,从而消除迁移和转录间充质模式。我们的数据表明,CXCL12通过CXCR4在NET细胞中传递EMT促进信号,进而调节转录、形态和功能修饰,从而增强NET细胞的体外向骨性。CXCR4的独特功能可能与其亚细胞定位有关,并可能在未来的体内研究中获得潜在的相关性。

关键词:GPCR核转位;SDF-1;骨转移;类癌;上皮-间充质转化。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突

作者声明,与可能直接或间接影响所提交作品的进行或报告的具有经济利益的行业或组织无任何关联。

数字

图1
图1。CXCL12调节在体外CXCR4的向骨性高的/CXCL12系列低的NET细胞系
(一个)NET细胞的迁移潜能通过跨阱分析测定。与对照制剂相比,当暴露于骨条件培养基中时,只有BON1细胞显著增强了其迁移特性。在以100 ng/ml的浓度与CXCL12孵育2小时后,CM和QGP1细胞株都获得了向骨骼迁移的显著能力。相比之下,CXCR4低的/CXCL12系列高的即使在CXCL12治疗后,H727和CNDT 2.5细胞系对骨也没有明显的化学吸引。(B类)根据Matrigel分析,骨碎片暴露显著增加了BON1和QGP1细胞系的侵袭潜能。CXCR4的入侵高的/CXCL12型低的CXCL12预处理进一步增强了细胞系。数据表示为平均值±SD,并在至少三个不同的实验中进行计算。统计显著性表示为*(第页<0.05),或**(第页< 0.01).
图2
图2。NET细胞系在基线EMT相关转录谱上存在差异
通过RT-PCR研究NET细胞系的EMT相关转录谱。部分EMT的转录特征在BON1细胞中更为明显,但在CM和QGP1细胞系中也存在。H727和CNDT 2.5细胞表现出普遍的上皮特征(即EpCAM上调)。数据表示为2-Δct以β-actin为看家基因。表示平均值±SD,显著差异标记为*(第页<0.05),或**(第页< 0.01).
图3
图3。CXCL12和TGF-β1激活CXCR4中的EMT高的/CXCL12系列低的NET细胞系
(一个)用CXCL12以100 ng/ml的浓度孵育2小时,CXCR4的EMT转录谱发生了变化高的/CXCL12系列低的NET细胞系,导致钙粘蛋白开关和SNAIL上调。这种EMT谱在CM和QGP1细胞中特别显著,而CXCL12未能对CXCR4产生显著影响低的/CXCL12系列高的NET细胞系。(B类)TGF-β1在CXCR4中诱导EMT相关基因高的/CXCL12系列低的和CXCR4低的/CXCL12型高的NET细胞系。细胞因子治疗后转录水平的改变由2表达-ΔΔCT方法以β-actin为看家基因。数据以平均值±标准偏差表示。统计显著性用红线标记。
图4
图4。CXCL12诱导NET细胞形态的改变
通过共焦显微镜评估CXCL12或TGF-β1刺激后NET细胞形态的变化。基线检查时,两个BON1(一个)和H727细胞(D类)呈圆形或不规则多边形。在CXCL12之后(B类)或TGF-β1治疗(C类),BON1细胞作为CXCR4高的/CXCL12系列低的细胞,获得间充质形状。相比之下,代表CXCR4的H727细胞的形态低的/CXCL12系列高的细胞系,CXCL12后保持不变(E类)或转化生长因子-β1(F类). 在QGP1细胞中(H(H)),CXCL12诱导形成假足(白色箭头),而对照制剂中不存在(G公司). QGP1细胞的3D重建显示了非磷酸化CXCR4(FITC,绿色)在细胞膜和核室中的亚细胞定位(). 细胞核染色为蓝色(DAPI),而细胞骨架F-actin染色为红色(指骨蛋白)。CXCL12或TGF-β1治疗后,BON1、CM和QGP1细胞的纺锤指数显著增加(J型). 平均值、95%置信区间和异常值用方框图和胡须图表示。
图5
图5。EMT的激活与CXCR4核积累有关
ICC揭示了CXCR4在NET细胞系中的核定位,如CM细胞中所示。两者都是多克隆的(一个)或单克隆抗体(B类)使用了抗体,导致轻微的染色差异。共焦显微镜还检测到非磷酸化CXCR4分子(白色箭头)的核聚积(C类). CXCL12治疗(类似于TGF-β1治疗,未显示)导致CXCR4相关FITC核强度显著增加(D类). 这些数据通过CXCR4核密度的计算分析得到了证实。如方框图和胡须图所示,在CXCR4中与CXCL12孵育后,核区域内发射的FITC像素平均数显著增加高的/CXCL12系列低的NET细胞系(BON1、CM、QGP1)。
图6
图6。CXCR4在其激动剂刺激后的核积聚在CXCR4中占主导地位高的/CXCL12系列低的NET细胞系
在生化分级后,用抗CXCR4单克隆抗体UMB-2探测NET细胞的核和非核小份,该单克隆抗体仅在非活性和非磷酸化时识别受体。Western blot显示CXCL12孵育后,在BON1和CM细胞系中CXCR4可作用部分的核表达显著上调。在QGP1细胞中,核CXCR4的上调接近统计学意义(第页= 0.08). CXCR4中未发现实质性修改低的/CXCL12系列高的用CXCL12处理的NET细胞系。有趣的是,CXCL12对所有细胞系中非磷酸化CXCR4的非核表达没有显著影响。Lamin A/C和GAPDH分别是核制剂和非核制剂的内部控制。
图7
图7。CXCR4沉默可逆转CXCL12在NET细胞中诱导的EMT样改变
通过定性PCR评估抗CXCR4 siRNA的转染效率(一个),RT-PCR(B类)和共焦显微镜(C类). 总的来说,与原始对照值相比,siRNA处理诱导BON1细胞CXCR4 mRNA减少70%。在同一细胞系中,蛋白质表达也出现了类似的下降。(D类)与CXCL12孵育后,siRNA处理的BON1细胞保持多边形。(E类)CXCR4沉默降低了CXCR4的迁移潜能高的/CXCL12系列低的NET细胞,即使在CXCL12处理后也是如此。

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引用人

工具书类

    1. Cives M,Strosberg J.胃肠胰腺神经内分泌肿瘤的最新进展。肿瘤(威利斯顿公园)2014;28:749–756.-公共医学
    1. Yao JC、Hassan M、Phan A、Dagohoy C、Leary C、Mares JE、Abdalla EK、Fleming JB、Vauthey JN、Rashid A、Evans DB。“类癌”100年后:美国35825例神经内分泌肿瘤的流行病学和预后因素。临床肿瘤杂志。2008;26:3063–3072.-公共医学
    1. Cives M、Rizzo F、Simone V、Bisceglia F、Stucci S、Seeber A、Spizzo G、Montrone T、Resta L、Silvestris F。《神经内分泌肿瘤中的促骨作用:上皮-间充质转化的作用》综述。神经内分泌学。2015;103:321–334。-公共医学
    1. Van Loon K、Zhang L、Keiser J、Carrasco C、Glass K、Ramirez MT、Bobiak S、Nakakura EK、Venook AP、Shah MH、Bergsland EK。神经内分泌肿瘤的骨转移和骨骼相关事件。内分泌连接。2014;4:9–17.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Kavecansky J,Wei L,Caronia L,Ramirez MT,Bloomston M,Shah MH.中等分化神经内分泌肿瘤中的骨转移:俄亥俄州立大学医学中心的单一机构综述。胰腺。2015;44:198–203.-公共医学