Interaction of FUN14 domain containing 1, a mitochondrial outer membrane protein, with kinesin light chain 1 via the tetratricopeptide repeat domain

doi:10.3892/br.2016.818

.2017年1月；6(1):46-50.

doi:10.3892/br.2016.818。 Epub 2016年11月25日。

线粒体外膜蛋白FUN14结构域1通过四肽重复结构域与驱动蛋白轻链1的相互作用

元熙长¹, 年轻的Joo Jeong¹, 孙熙彩¹, Sang-Hwa乌尔姆², 大贤哲¹

附属公司

PMID： 28123706
预防性维修识别码：项目编号：5244772
内政部： 10.3892/br.2016.818

线粒体外膜蛋白FUN14结构域1通过四肽重复结构域与驱动蛋白轻链1的相互作用

元熙长等。生物识别代表. 2017年1月.

.2017年1月；6(1):46-50.

doi:10.3892/br.2016.818。 Epub 2016年11月25日。

作者

元熙长¹, 年轻的Joo Jeong¹, 孙熙彩¹, Sang-Hwa乌尔姆², 大贤哲¹

附属公司

¹韩国釜山614-735印第安大学医学院生物化学系。
²大韩民国釜山614-735仁杰大学医学院预防医学系。

PMID： 28123706
预防性维修识别码：项目编号：5244772
内政部： 10.3892/br.2016.818

摘要

动蛋白1是微管依赖性分子运动蛋白的动蛋白超家族蛋白（KIFs）的一员，在细胞内运输细胞器和蛋白质复合体。驱动蛋白1由驱动蛋白重链（KHCs）的同源或异源二聚体组成，通常（尽管并非总是）与两条驱动蛋白轻链（KLCs）相关。KLCs是与许多不同的结合蛋白和货物相关的非运动蛋白，但其结合伙伴尚未完全确定。在本研究中，使用酵母双杂交系统鉴定与KLC1的四肽重复序列（TPR）域相互作用的蛋白质。本研究结果揭示了KLC1的TPR结构域与FUN14结构域包含蛋白1（FUNDC1）之间的相互作用，FUNDC2是一种介导低氧诱导有丝分裂的线粒体外膜蛋白。在酵母双杂交试验中，FUNDC1结合到KLC1的六个TPR基序区，并且没有与KIF5B（驱动蛋白1的运动亚基）和KIF3A（驱动素2的运动亚单位）相互作用。FUNDC1的细胞质氨基N-末端结构域对于与KLC1的相互作用是必不可少的。在HEK-293T细胞中共表达时，FUNDC1与KLC1共定位，与KLC2共免疫沉淀，但与KIF5B不共沉淀。总之，这些结果表明KLC1可能与LC3竞争，LC3是自噬体形成的关键成分，与FUNDC1相互作用。

关键词：含1的FUN14结构域；驱动蛋白1；驱动蛋白轻链1；微管电机；四三肽重复结构域。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
通过酵母双杂交筛选鉴定与KLC1相互作用的蛋白质。（A） FUNDC1示意图。灰色框表示TM域。从酵母双杂交筛选中分离出的两个阳性克隆具有FUNDC1的cDNA。（B） KLC1中的FUNDC1结合区。KLC1有六个TPR图案，用灰色表示。在酵母双杂交试验中评估截短型KLC1与FUNDC1的相互作用。（C） FUNDC1中的KLC1结合区。在酵母双杂交试验中测试FUNDC1的不同截短物与KLC1.+、，交互作用；-，无交互作用；KLC，驱动蛋白轻链；FUNDC1、FUN14结构域蛋白1；TM，跨膜；TPR，四三肽重复序列；氨基酸。

**图2。**
KLC1或KIF与FUNDC1的相互作用。（A）在酵母双杂交系统中，测试每个KIF的尾部区域以及全长LC3B和KLC与FUNDC1的相互作用。FUNDC1专门与KLC互动，但不与KIF互动。LC3B作为交互作用的阳性对照。（B）在酵母双杂交报告基因测定中，使用β-半乳糖苷酶活性定量检测FUNDC1和KIFs、LC3B或KLCs之间的相互作用强度。数值表示为平均值±标准偏差。（C）在使用纯化GST融合FUNDC1和His-tagged KLC1.+的GST下拉分析中FUNDC1-KLC1的直接结合，交互作用；-，无交互作用；KLC，驱动蛋白轻链；KIF，驱动蛋白超家族蛋白；FUNDC1、FUN14结构域蛋白1；GST，谷胱甘肽S-转移酶。

**图3。**
KLC1和FUNDC1在哺乳动物细胞中的共免疫沉淀和共定位。如图所示，用FLAG-FUNDC1和myc-KLC1质粒瞬时转染（A和B）HEK-293T细胞。用（A）单克隆抗FLAG抗体或（B）抗myc抗体免疫沉淀细胞裂解物。用抗KLC1、KIF5B、LC3和FLAG抗体对沉淀进行免疫印迹。FUNDC1特异性共沉淀KLC1和LC3B，但不是KIF5B。（C）用EGFP-FUNDC1和KLC1质粒瞬时转染HEK-293T细胞。转染后24小时，用抗KLC1抗体对细胞进行免疫荧光。KLC1和FUNDC1在细胞的同一亚细胞区域中被观察到。KLC，驱动蛋白轻链；FUNDC1、FUN14结构域蛋白1；KIF，驱动蛋白超家族蛋白；增强型绿色荧光蛋白EGFP；IP，免疫沉淀。

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