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.2016年12月16日；60(4):2711.
doi:10.4081/ejh.2016.2711。

主动脉夹层与多囊蛋白-1表达减少有关，这是一种导致血管平滑肌细胞ERK磷酸化增加的异常

J Feng（J冯） 1, S Ge公司, L Zhang先生, H车, C梁
附属公司

主动脉夹层与多囊蛋白-1表达减少有关，这是一种导致血管平滑肌细胞ERK磷酸化增加的异常

J Feng（J冯）等。 欧洲组织化学杂志. .

摘要

血管平滑肌细胞（VSMC）表型转换是主动脉夹层（AD）等多种心血管疾病的重要病理生理改变，发病率高。多囊藻毒素-1（PC1）在AD患者的VSMC中显著下调。PC1是一种完整的膜糖蛋白和激酶，调节不同的生物过程，包括细胞增殖、凋亡和细胞极性。然而，PC1在细胞内信号通路中的作用仍不清楚。在本研究中，VSMC中PC1下调促进了SM22α、ACTA2和calponin 1（CNN1）蛋白的表达。此外，VSMC中PC1的下调上调了磷酸化-MEK、磷酸化-ERK和myc，但没有改变磷酸化JNK和磷酸化p38。这些发现表明MEK/ERK/myc信号通路参与PC1介导的人类VSMC表型转换。当ERK抑制剂用于PC1下调的VSMC时，观察到相反的结果。当PC1的C末端结构域（PC1 C-tail）在VSMC中过度表达时，荧光-ERK、myc、SM22α、ACTA2和CNN1蛋白的表达水平下调。PC1 C-tail中突变蛋白（S4166A）过度表达的组显示出与VSMC中PC1下调的组相似的结果。这些结果表明，PC1中4166位点的Ser在PC1介导的MEK/ERK/myc信号通路中起关键作用，这可能是AD的主要病理生理原因。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突：作者声明没有利益冲突。

数字

图1。
图1。
PC1在AD患者主动脉中表达下调。A）AD患者和正常人主动脉的HE染色和Masson三色染色（ctrl）；红色箭头表示主动脉骨折。B） AD患者和正常人主动脉PC1免疫组化（ctrl）。比例尺：100μm。
图2。
图2。
AD患者和正常人PC1 mRNA和蛋白水平。A） 对照组和AD组PC1 mRNA的表达；AD患者的PC1表达显著低于对照组。B） 免疫印迹法检测4例AD患者并进行对照。C） AD组和对照组PC1蛋白的正常化；AD患者的PC1表达显著低于对照组。每种实验条件一式三份，并应用于三个独立的实验。数值表示为平均值±SD*P<0.01。
图3。
图3。
PC1敲除促进VSMC增殖。A） 用LV-PC1-kd感染VSMC 72 h，用Q-PCR检测其效率。B） Western blot检测LV-PC1-kd的效率。C） 通过CCK8试剂盒检测细胞增殖，并在450 nm处通过吸光度进行评估；检测到两组VSMC：一组作为对照，另一组感染了含有PC1-shRNA的慢病毒，该慢病毒可以击倒PC1。D） 在代表性实验中，通过流式细胞术检测两组VSMC的细胞周期。E） 两组VSMC的G0/G1、S和G2/M期细胞比率。F） 在代表性实验中对PC1-kd VSMC进行Transwell分析。通过跨阱室迁移的VSMC被0.05%结晶紫染成紫色；比例尺：50μm。G） 每个VSMC组跨阱分析中迁移细胞的数量。每种实验条件一式三份，并应用于三个独立的实验。数值表示为平均值±SD*P<0.01。
图4。
图4。
PC1基因敲除促进VSMC表型转换。A） RT-PCR检测SM22α、ACTA2和CNN1的mRNA表达水平；检测到两组VSMC：一组作为对照，另一组感染了含有PC1-shRNA的慢病毒，该慢病毒可以击倒PC1。B） 通过Western blot检测SM22α、ACTA2和CNN1的蛋白水平。C） 通过灰度扫描将SM22α、ACTA2和CNN1的相对水平归一化为微管蛋白。每种实验条件一式三份，并应用于三个独立的实验中。数值表示为平均值±SD*P＜0.01。
图5。
图5。
PC1对MAPK通路的影响。A） Western blot检测磷酸化p38、ERK、JNK、PI3K和MEK；检测到两组VSMC：一组作为对照组，另一组感染了含有PC1-shRNA的慢病毒，该慢病毒可以击倒PC1。B） 通过灰度扫描，将磷酸化的相对水平归一化为总特异性蛋白，如荧光蛋白ERK/ERK。C） Western blot检测myc和cylinD1蛋白表达水平。D） 通过RT-PCR检测两组VSMC中myc和cyclinD1的相对mRNA水平。每种实验条件一式三份，并应用于三个独立的实验。数值以平均值±标准差表示*P<0.01。
图6。
图6。
ERK抑制剂SCH772984可以抑制PC1敲除对VSMC的影响。A） 通过CCK8试剂盒检测细胞增殖，并在450 nm处通过吸光度进行评估；检测三组：VSMC对照组，无慢病毒和SCH772984；LV-PC1-kd+DMSO，VSMC与慢病毒，PC1-shRNA和DMSO作为溶剂对照；LV-PC1-kd+组件。，含有慢病毒和PC1-shRNA以及ERK抑制剂SCH772984的VSMC。B） 流式细胞术检测三组VSMC的细胞周期；结果来自一个具有代表性的实验。C） 三个VSMC组G0/G1、S、G2/M期细胞比率。D） Western blot检测ACTA2、SM22α和cyclinD1蛋白表达水平。每种实验条件一式三份，并应用于三个独立的实验。数值表示为平均值±SD*P<0.01。
图7。
图7。
PC1 C-tail的功能和在S4166A形成的突变PC1 C-尾。A） PC1、PC1 C-tail和S4166A突变位点图；蓝色条代表细胞外区域，绿色条代表螺旋结构，红色条代表细胞质区域。B） 检测四组VSMC中磷酸化ERK、ERK、ACTA2、SM22α、CNN1、cyclinD1和myc的蛋白水平：Ctrl、未转染的VSMC；LV-PC1-kd，VSMC感染慢病毒，PC1-shRNA可击倒PC1；PC1，感染慢病毒的VSMC具有PC1 C-tail编码序列，可以促进PC1 C-尾表达；和PC1（S4166A），被慢病毒感染的VSMCs，在S4166A编码序列处具有能够表达PC1 C-尾部的突变形式的突变PC1 C-尾部。C） PC1诱导VSMC表型转换的信号通路图。
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