跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2016年12月14日7:13885。
doi:10.1038/ncomms13885。

成骨细胞分泌Cxcl9调节骨血管生成

黄斌（Bin Huang） 1, 王文浩 1, 李清初 1, 王振宇 1, 伯燕 1, 张忠民 1, 王亮（Liang Wang） 1, 黄敏君 1, 贾春红 2, 陆建森 1, 刘思奇（Sichi Liu） 2, 陈洪东 2, 李芒芒 2, 蔡道璋 1, 余江 三, 大地金 1, 白晓春 1 2
附属公司

成骨细胞分泌Cxcl9调节骨血管生成

黄斌（Bin Huang）等人。 国家公社. .

勘误表in

  • 作者更正：成骨细胞分泌Cxcl9来调节骨血管生成。
    黄B、王W、李Q、王Z、闫B、张Z、王L、黄M、贾C、卢J、刘S、陈H、李M、蔡D、蒋Y、金D、白X。 黄B等。 国家公社。2023年10月19日；14(1):6620. doi:10.1038/s41467-023-42299-y。 国家公社。2023 PMID：37857608 免费PMC文章。 没有可用的摘要。

摘要

成骨细胞和内皮细胞之间的通讯对骨转换至关重要，但这种通讯的分子机制尚未明确。在这里，我们确定Cxcl9是骨髓微环境中成骨细胞分泌的血管抑制因子。我们发现，成骨细胞产生的Cxcl9与血管内皮生长因子相互作用，阻止其与内皮细胞和成骨细胞结合，从而在小鼠骨骼和体外消除血管生成和成骨。雷帕霉素复合物1的机制靶点通过转录上调STAT1激活Cxcl9表达，并增加STAT1与成骨细胞中Cxcl9启动子的结合。这些发现揭示了成骨细胞产生的Cxcl9在骨血管生成和成骨中的重要作用，Cxcl 9可以靶向促进骨血管生成并预防骨丢失相关疾病。

PubMed免责声明

数字

图1
图1。成骨细胞中mTORC1活性的改变影响小鼠骨中的血管生成。
(一)12周龄雄性小鼠骨骼中pS6（Ser235/236）和骨钙素（Ocn）免疫染色的代表性图像。比例尺，50 微米。(b条)6周龄雄性Δ的后肢照片Tsc1型（ΔT）和Δ猛禽（ΔR）小鼠及其同胞对照组（Ctrl）。比例尺，1 厘米(c（c）)CD31的代表性图像+EMCN公司+12周龄雄性小鼠股骨切片微血管及H型微血管密度定量分析。比例尺，100 微米。n个=每组9人。(d日)CD31的数量一致+小鼠骨骼周围肌肉中的血管。比例尺，100 微米。数据显示为平均值±标准差。n个=每组9个。数据显示为平均值±标准差*P（P）<0.05, **P（P）<0.01（学生的t吨-测试）。对于该图中的所有面板，数据代表了三个独立实验。
图2
图2。成骨细胞mTORC1活性的改变影响血管生成在体外.
(一)HUVEC中BrdU（绿色）免疫染色的典型共焦图像和BrdU定量分析+单元格数超过总单元格数。比例尺，50 微米。n个=每组9人。(b条)0时HUVEC伤口的代表性显微照片 h和18之后 h；虚线突出显示每组细胞的线性划痕/伤口。条形图显示伤口闭合的平均百分比。比例尺，200 微米。n个=每组9人。(c（c）)用Matrigel培养的HUVEC成管的典型显微照片和管面积的定量分析。比例尺，200 微米。n个=每组9人。数据显示为平均值±标准差*P（P）<0.05, **P（P）<0.01（学生的t吨-测试）。对于图中的所有面板，数据代表了三个独立实验。Ctrl，control。
图3
图3。mTORC1对成骨细胞中VEGF的调节不能解释突变小鼠骨的血管表型。
(一)12周龄雄性小鼠骨中VEGF和Ocn免疫染色的代表性图像及VEGF定量分析+成骨细胞与总成骨细胞的比较。比例尺，50 微米。n个=每组9人。(b条)12周龄雄性小鼠骨骼中CD31、KDR和pKDR（Y1175）免疫染色的代表性图像，以及KDR的定量分析+和pKDR+骨髓中内皮细胞与总内皮细胞的比较。比例尺，50 微米。(c（c）)原代成骨细胞中VEGF的蛋白质印迹。(d日)原代成骨细胞CM作用10年后HUVEC KDR、PLCγ1和ERK1/2磷酸化的Western blot研究 最小数据显示为平均值±标准差*P（P）<0.05, **P（P）<0.01（学生的t吨-测试）。Ctrl，control。
图4
图4。mTORC1调节成骨细胞中的Cxcl9。
(一)的代表性图像就地12周龄雄性小鼠股骨切片中Cxcl9mRNA的杂交以及Runx2的免疫染色。方框区域在右下角放大。Cxcl9公司+成骨细胞总数中的成骨细胞也被定量。比例尺，50 微米。n个=每组9个。(b条)CD31中CXCR3免疫染色的代表性显微照片+骨髓内皮细胞与CXCR3的定量分析+12周龄雄性小鼠骨骼中总内皮细胞中的内皮细胞。比例尺，50 微米。n个=每组9人。(c（c）)培养的HUVEC中CXCR3免疫染色的代表性显微照片。比例尺，100 微米。(d日)用ELISA法评估骨髓（BM）和血清中Cxcl9的浓度。n个=每组5人。(e（电子）)原代成骨细胞Cxcl9 mRNA定量PCR分析。(（f）)原代成骨细胞中Cxcl9的蛋白质印迹。(克)通过ELISA评估原代成骨细胞CM中Cxcl9的浓度。n个=每组5人。数据显示为平均值±标准差*P（P）<0.05, **P（P）<0.01（学生的t吨-测试）。Ctrl，control。
图5
图5。Cxcl9负责突变小鼠骨骼中的血管表型。
(一)CD31和EMCN免疫染色微血管的典型共焦图像，以及ΔTsc1型给予Cxcl9抗体（Ab）和Δ的小鼠猛禽小鼠皮下注射Cxcl9。比例尺，100 微米。n个=每组9人。(b条)代表性Matrigel试管形成分析图像，并使用CM（添加或不添加Cxcl9或Cxcl9-中和抗体）对培养的HUVEC的试管面积进行定量分析，如图所示。比例尺，100 微米。n个=每组9人。(c（c）)Western blot检测用CM处理的HUVEC中KDR、PLCγ1和ERK1/2的磷酸化，CM来自原代成骨细胞，添加或不添加Cxcl9或Cxcl9-中和抗体 最小数据显示为平均值±标准差*P（P）<0.05, **P（P）<0.01（学生的t吨-测试）。Ctrl，control。
图6
图6。Cxcl9通过与VEGF相互作用并阻止其与内皮细胞的结合，对抗内皮细胞中的VEGF信号转导。
(一)HUVECs中BrdU（绿色）免疫染色的代表性共焦图像和BrdU的定量分析+单元格数超过总单元格数。比例尺，100 微米。n个=每组9人。(b条)HUVECs在0时伤口的代表性显微照片 h和18之后 h；虚线突出显示每组细胞的线性划痕/伤口。条形图显示了伤口闭合的平均百分比。比例尺，200 微米。n个=每组9人。(c（c）)用Matrigel培养的HUVEC成管的典型显微照片和管面积的定量分析。比例尺，200 微米。n个=每组9人。(d日)Δ处理的HUVEC中Akt（S473）、Src（Y416）、KDR、PLCγ1和ERK1/2磷酸化的Western blotTsc1型CM加或不加NBI-74330（CXCR3拮抗剂）或VEGF，如10所示 最小值(e（电子）)重组小鼠Cxcl9和VEGF164与抗Cxcl9抗体混合并免疫沉淀，并用抗VEGF抗体进行免疫印迹检测。(（f）)的绑定125I–血管内皮生长因子164在Cxcl9浓度增加的情况下。所示为特异性结合，通过从总结合中减去非特异性结合计算得出。数据显示为平均值±标准差**P（P）<0.01（学生的t吨-测试）。
图7
图7。Cxcl9通过与VEGF相互作用和消除VEGF与成骨细胞的结合来抑制成骨。
(一)MC3T3-E1细胞的BrdU染色及BrdU的定量分析+所有单元格中的个单元格。比例尺，100 微米。(b条)成骨诱导第7天MC3T3-E1细胞中成骨标志物Ocn和Runx2表达的Western blot分析。(c（c）)第14天分化MC3T3-E1细胞的茜素红染色。比例尺，1 厘米(d日)的绑定125I–血管内皮生长因子164在Cxcl9浓度增加的情况下对MC3T3-E1细胞进行诱导。所示为特异性结合，通过从总结合中减去非特异性结合计算得出。数据显示为平均值±标准差*P（P）<0.05, **P（P）<0.01（学生的t吨-测试）。
图8
图8。mTORC1通过STAT1调节成骨细胞中的CXCL9。
(一)原代成骨细胞STAT1mRNA的定量PCR（qPCR）分析。n个=每组3人。数据显示为平均值±标准差*P（P）<0.05（学生的t吨-测试）。(b条)原代成骨细胞中总STAT1蛋白和STAT1磷酸化（Y701和S727）的Western blot。(c（c）)典型的共焦图像显示STAT1（红色）在原代成骨细胞中的亚细胞位置。(d日)控制和ΔTsc1型用S6K1 siRNA和阴性对照（NC）处理（ΔT）原代成骨细胞48 h后进行免疫印迹检测STAT1的表达。(e（电子）)用抗mTOR抗体免疫沉淀培养的原代颅骨细胞，并检测沉淀的mTOR对重组谷胱甘肽的激酶活性S公司-转移酶（GST）标记的全长STAT1。(（f）)初级Δ的核提取物Tsc1型（T） ，Δ猛禽（R） 和对照（C）成骨细胞分析STAT1与Cxcl9公司启动子使用EMSA。STAT1与生物素标记DNA探针的结合显示为“STAT1复合物”。为了与结合竞争，在反应中加入200倍摩尔过量的未标记STAT1结合位点DNA探针。在反应中添加抗STAT1抗体会导致STAT1-DNA结合和超位移带的减少。(克)控制和ΔTsc1型用STAT1 siRNA和NC处理原代成骨细胞48 h后进行免疫印迹检测Cxcl9的表达。Ctrl，control。
图9
图9。成骨细胞分泌Cxcl9调节骨血管生成和成骨的模型。
成骨细胞中Cxcl9的表达受mTORC1和下游STAT1的正向调节。Cxcl9与VEGF结合，阻止VEGF与其受体结合，阻断内皮细胞中的VEGF信号转导，从而抑制骨血管生成。此外，Cxcl9通过与VEGF相互作用并消除其与成骨细胞的结合来抑制成骨。干扰素-γ、干扰素γ。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Magne D.等人，《生长板和动脉中的软骨形成：从生理学到病理学》。生物论文27，708–716（2005）。-公共医学
    1. Mark H.、Penington A.、Nannmark U.、Morrison W.和Messina A.大鼠实验性骨折软骨内骨化过程中的微血管侵入。《骨骼》35，535–542（2004）。-公共医学
    1. Zvaifler N.J.等人……正常人血液中的间充质前体细胞。关节炎研究2，477–488（2000）。-项目管理委员会-公共医学
    1. Maes C.等人…成骨细胞前体，但不是成熟的成骨细胞，随着侵入的血管进入发育中和骨折的骨骼。Dev.Cell 19，329–344（2010年）。-项目管理委员会-公共医学
    1. Sacchetti B.等人，骨髓窦中的自我更新骨祖细胞可以组织造血微环境。细胞131，324–336（2007）。-公共医学

出版物类型